李贞
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
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- 慢病毒介导miRNA-184体外转染对人晶状体上皮细胞上皮间质转分化的影响被引量：2
- 2015年
- 目的 观察慢病毒介导miRNA-184体外转染对TGF-β2诱导人LEC发生上皮间质转分化（EMT）时其基因表型的影响.方法 实验研究.构建pL/IRES/GFP-miR-184质粒,经慢病毒介导体外转染由TGF-β2诱导而发生EMT的人LEC,利用QRT-PCR检测转染0、6、24 h后人LEC中相关基因E-钙黏蛋白（CDH1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白（VIM）表达水平的变化,并与阴性对照慢病毒侵染组进行比较.采用单因素方差分析进行统计学分析.结果 成功构建pL/IRES/GFP-miR-184质粒,经慢病毒介导转染由TGF-β2诱导而发生EMT的人LEC 24 h后,上皮细胞标志性基因CDH1相对表达量保持相对不变,24 h时为6.30E-06,而对照组则下调,24 h时为1.37E-06,差异有统计学意义（F=261.78,P＜0.01）;间质细胞标志性基因α-SMA和VIM的相对表达量均保持相对不变,24 h时分别为1.55E-02和4.61E-04,而对照组则均上调,24 h时分别为2.09E-02和6.73E-04,差异有统计学意义（F=26.21,P=0.007;F=17.91,P=0.013）.结论 miRNA-184经慢病毒介导转染人LEC后,能抑制其由TGF-β2诱导所发生的EMT相关的基因表型变化。
- 徐庆李贞张慧
- 关键词：上皮细胞上皮-间质转化转染慢病毒属
- 慢病毒介导的TGFβ-R2 shRNA抑制人LECs细胞TGFβ-R2的表达被引量：1
- 2014年
- 目的:观察转化生长因子β-R2特异性短发夹RNA(shRNA)对人晶状体上皮细胞TGFβ-R2表达的影响。方法:根据小干扰RNA(siRNA)的设计原则,针对转化生长因子β-受体2基因序列特征构建特异性shRNA(RNAi)载体,与TGFβ-R2过表达载体共转染293T细胞,经Western blot筛选出有效RNAi载体后,进行扩增、纯化、滴度测定,并转染培养的人LECs,qPCR检测TGFβ-R2siRNA慢病毒载体对TGFβ-R2 mRNA表达的影响。结果:经Western blot筛选,TGFβ-R2/GV1 15RNAi#1对目的基因的表达敲减效果最明显,慢病毒包装,滴度为8E+8TU/mL,感染人LECs细胞后,对TGFβ-R2基因有显著的敲减效果,达到78.1%(P<0.05)。结论:TGFβ-R2 RNAi载体构建成功,并且能抑制人晶状体上皮细胞TGFβ-R2 mRNA的表达。
- 李贞徐庆张慧
- 关键词：人晶状体上皮细胞小干扰RNA
- 转化生长因子-β2诱导的上皮间质转分化对人晶状体上皮细胞基因表型的影响被引量：1
- 2013年
- 目的观察转化生长因子-β2(TGF-β2)诱导人晶状体上皮细胞(LECs)发生上皮间质转分化(EMT)时,其形态和基因表型所发生的变化。方法在体外培养的人LECs中,加入100 pg/mL浓度的TGF-β2,诱导其发生EMT,处理0、6、24、48 h后,观察其在形态上的变化,利用实时定量反转录聚合酶链反应(qRTPCR)于各时间点检测其标志性基因E-钙粘蛋白(CDH1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(VIM)等在表达水平上所发生的变化,并与未处理的空白对照组进行比较。结果加入TGF-β2后,随着时间的推移,人LECs在形态上拉长,呈梭形;上皮细胞标志性基因如CDH1的表达水平逐渐下调,48 h时相对表达量为1.10E-06,和对照组2.68E-06相比差异有统计学意义(P=0.002);间质细胞标志性基因如VIM的表达水平逐渐上调,48 h时相对表达量为1.64E-02,和对照组1.37E-02相比差异有统计学意义(P=0.006);而α-SMA的表达水平也逐渐上升,48 h时相对表达量为9.21E-03,虽和对照组8.67E-03相比差异无统计学意义(P=0.551),但仍呈上升趋势。结论在TGF-β2诱导下,人LECs发生EMT,其形态和基因表型均发生与间质细胞相符的变化。
- 徐庆武静李贞
- 关键词：晶状体上皮细胞上皮间质转分化
