杨秉呼
- 作品数：14 被引量：56H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程理学生物学更多>>
- 反义寡核苷酸药物癌泰得的定性分析方法研究被引量：3
- 2001年
- 癌泰得 (ACTCACTCAGGCCTCAGACT)为端粒酶表达抑制活性反义寡核苷酸 .为了探讨其定性检测手段 ,通过阴离子交换高效液相色谱和毛细管凝胶电泳分析方法 ,确定了该硫代寡核苷酸以及与其有关的短序列和部分未被硫代类似物的保留时间 ,并分析了不同混合物样品 .结果表明 ,阴离子交换高效液相色谱对硫代寡核苷酸骨架上的差异非常敏感 ,可很好地分离长度相同的硫代和未完全硫代类似物 ,并且随未被硫代磷酸基数目增加 ,保留时间依次缩短 .阴离子交换高效液相色谱对硫代寡核苷酸的长度不敏感 ,不能分离相差一个碱基的硫代寡核苷酸 .毛细管凝胶电泳可很好地分离长度相差一个碱基的硫代寡核苷酸 ,不能分离同长硫代和部分硫代寡核苷酸 .高效液相色谱结合毛细管凝胶电泳可有效地确定癌泰得的纯度和修饰程度 .
- 杨秉呼管伟王升启
- 关键词：癌泰得反义寡核苷酸端粒酶阴离子交换HPLC
- 以胰岛素样生长因子受体1基因为靶的反义寡核苷酸体内外抗肿瘤研究被引量：9
- 2002年
- 以胰岛素样生长因子受体 - 1基因为靶筛选抗肿瘤药物 .根据IGF1RmRNA的二级结构设计了 9条反义寡核苷酸药物 ,以脂质体介导进行转染 ,MTT染色计算细胞生长抑制率 ,从中筛选出一条序列并对之进行优化 ,最后以最佳序列进行体外作用持续时间及体内细胞生长抑制率分析 .结果表明该序列在体内外具有良好的抗肿瘤活性 ,具有剂量依赖性关系 ,且对荷瘤裸鼠无明显的毒性 .
- 林莉王升启管伟杨秉呼胡小电
- 关键词：靶标反义寡核苷酸抗肿瘤IGF1R
- 毛细管凝胶电泳法测定硫代寡核苷酸药物癌泰得的含量被引量：11
- 2004年
- 癌泰得为20碱基的抑制端粒酶催化亚基hTERT的硫代反义寡核苷酸,体内、体外抗肿瘤活性评价显示其有较好的抗肿瘤活性。采用固相合成仪分别制备了癌泰得及与其碱基百分组成基本相同的硫代寡核苷酸内标,并使用制备型阴离子交换色谱和反相高效液相色谱进行纯化。采用毛细管凝胶电泳仪和单链DNA分离试剂盒测定了癌泰得的含量。所用毛细管规格为内径100μm,总长31cm,有效长度20cm;电动进样,进样电压-10kV,进样时间1s;分离电压-12 4kV;柱体温度40℃;样品储存温度为30℃;缓冲溶液为pH8 5的Tris 硼酸盐 7mol/L尿素缓冲液;紫外检测,波长为254nm。结果表明,在12 5～800mg/L时呈现良好的线性关系(r=0 99997);最低检测限为0 220mg/L;日内、日间的相对标准偏差(RSD)分别为0 449%～1 89%和1 01%～1 48%;低、中、高3种浓度的平均回收率为96 95%,RSD为6.88%。说明毛细管凝胶电泳内标法用于反义硫代寡核苷酸的含量测定结果准确、可靠。
- 杨秉呼孙偶君张敏丽王升启
- 关键词：癌泰得反义硫代寡核苷酸药物
- API4基因为靶的反义寡核苷酸体内外抗肿瘤研究被引量：1
- 2001年
- 林莉王升启管伟杨秉呼胡小电
- 关键词：反义寡核苷酸肿瘤基因治疗
- 色谱技术在寡核苷酸药物分析中的应用被引量：1
- 2000年
- 合成寡核苷酸及类似物作为潜在治疗药物在病毒感染和癌症治疗方面有良好的应用前景。寡核苷酸药代动力学的研究需提供强有力的分析技术来确定其纯度和含量。本文介绍了在寡核苷酸分析及质量控制中所用的毛细管凝胶电泳、高效液相色谱和高效薄层色谱技术。
- 杨秉呼王升启
- 关键词：寡核苷酸药物分析HPLCHPTLC
- AIM-1基因为靶的反义寡核苷酸抗肿瘤活性研究被引量：1
- 2001年
- :[目的]以AIM 1基因为靶筛选抗肿瘤药物。[方法]根据AIM 1mRNA的二级结构设计了9条反义寡核苷酸药物 ,以脂质体介导进行转染 ,MTT染色计算细胞生长抑制率 ,从中筛选出一条序列并对之进行优化。最后对7#进行体外作用持续时间及体内细胞生长抑制率进行分析。[结果]7#在体内外具有良好的抗肿瘤活性。[结论]AIM 1可作为肿瘤治疗的新靶点。
- 林莉王升启管伟杨秉呼胡小电
- 关键词：肿瘤反义寡核苷酸
- 反义寡核苷酸药物的大规模合成、纯化和质量控制
- 针对端粒酶特性,根据端粒酶RNA合成端粒模板区的RNA序列设计合成了多条反义寡核 苷酸.通过其对恶性肿瘤细胞体外抑制试验,初步筛选出特异性抑制端粒酶的ASODN,为抗 癌新型药物的研究奠定了试验基础.对于其它恶性肿瘤高表...
- 杨秉呼
- 关键词：反义寡核苷酸端粒酶高效液相色谱质谱
- 文献传递
- 反义寡核苷酸药物的高效液相色谱大规模纯化技术被引量：1
- 1999年
- 合成寡核苷酸在生命科学基础和应用领域的广泛使用，特别是作为潜在治疗剂所展示的在病毒感染和癌症的反义治疗前景，需要大量的高纯寡核苷酸。本文介绍了寡核苷酸的大规模制备纯化技术。
- 杨秉呼王升启
- 关键词：寡核苷酸反义药物高效液相色谱纯化
- 流感泰得在小鼠模型中抗流感病毒活性研究被引量：8
- 2000年
- 为了在动物整体水平评价流感泰得 (flutide ,FT)抗流感病毒活性 ,建立了流感病毒感染小鼠实验模型 ,并测定了FT在小鼠模型中的抗病毒活性和对小鼠的急性毒性作用。结果表明 ,流感病毒A 京防 86 1(H1N1)和A 沪防 93 9(H3N2 )在小鼠体内连续传代 6次时即对小鼠具有感染性 ,表现为小鼠体重下降 ,小鼠肺脏湿重增加并能检测到很高的病毒滴度。在小鼠模型中FT具有较高的抗病毒活性 ,表现在FT能明显提高病毒感染小鼠的存活率 ,抑制病毒感染引起的小鼠体重下降和肺湿重增加。当FT剂量为 6.5× 10 -4μmol g和 32 .5× 10 -4μmol g滴鼻给药时 ,小鼠存活率分别提高30 %和 5 0 % (P <0 .0 5 ) ;给药途径对FT抗病毒作用有一定影响 ,静脉注射高于腹腔注射和滴鼻给药 ;当接种剂量为 5 2× 10 -4μmol g时 ,FT对小鼠的生长状态、体重和肺脏湿重等均无影响。以上结果为抗流感病毒反义寡核苷酸药物研究向临床前试验过渡提供了试验依据。
- 陈忠斌王升启孙志贤杨秉呼管伟
- 关键词：流感病毒小鼠模型抗病毒作用
- 反义寡核苷酸体外抗流感病毒活性被引量：4
- 2000年
- 为了获得具有抗流感病毒活性的反义寡核苷酸 ,针对A型流感病毒基因组 3′和 5′端保守序列 ,设计并合成了多条硫代寡核苷酸 (ODN) :3′端反义ODN(IV3#)与 3′端正义ODN(IV3S) ;5′端反义ODN(IV4#)与 5′端正义ODN(IV4S)以及由 5′和 3′端正义 /反义保守序列组成的复合序列ODN(IV6#和IV7#)。测定了PS ODN的体外细胞毒性和在MDCK细胞中对流感病毒复制的影响。结果表明 :( 1 )PS ODN浓度高达 50 μmol/L时对MDCK细胞末表现有毒性作用 ;( 2 )与流感病毒基因组 5′端互补的ODNIV4#以及由 5′和 3′端保守序列构成的IV6#ODN和IV7#ODN均具有较高的抗病毒活性 ;如IV4#ODN浓度为 1 μmol/L时对流感病毒A/京防 /86 1 (H1 N1 )抑制率近 50 % ,浓度为 1 0 μmol/L或更高时抑制率超过70 % ,且IV4#抑制病毒活性呈现明显的序列和剂量依赖性 ;( 3)IV4#ODN不仅对A型流感病毒H1 N1 亚型有抑制作用 ,对H3N2 亚型也表现较高的抑制活性 ;( 4 )病毒感染复数 (MOI)对IV4#ODN抗病毒活性有一定影响 ,当MOI较低时 ,IV4#ODN表现的剂量效应关系更加明显。抗流感病毒反义寡核苷核IV4#ODN的发现为进一步研究流感新型药物奠定了实验基础。
- 陈忠斌王升启管伟杨秉呼孙志贤
- 关键词：流感病毒反义寡核苷酸抗病毒活性
