柯雪丹
- 作品数：19 被引量：30H指数：4
- 供职机构：江苏省血吸虫病防治研究所更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学更多>>
- 重组日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶动力学分析
- 2011年
- 目的对重组的日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(SjTGR)进行酶动力学特征分析。方法用阿糖胞苷-2’,5’-二磷酸琼脂糖凝胶通过亲和层析纯化重组SjTGR蛋白。利用紫外分光光度计(UV-2550,SHIMADZU),在25℃条件下分别以5-联硫代-双-2-硝基苯甲酸(DTNB)、胰岛素、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、β-羟乙基二硫化物(HED)为底物,测定SjTGR的硫氧还蛋白还原酶(TrxR)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷氧还蛋白(Grx)活性及其米氏常数。以金诺芬为抑制剂,测定其对SjTGR活性的抑制作用及抑制常数。结果 SjTGR是一种具有TrxR,GR,Grx活性的多功能酶,酶活性分别为8.11、2.19和12.10μmol·min-1mg-1。不同的酶底物得到的Km值分别为(21.42±0.44)μmol·L-1(NADPH)、(3.24±0.40)μmol·L-1(Trx)(、145.05±6.31)μmol·L-1(DTNB)(、49.55±6.31)μmol·L-1(GSSG)、(2 792±231)μmol·L-1(HED)(、1 698±54)μmol·L-1(GSH)。金诺芬对SjTGR活性有明显的抑制作用,5 nmol·L-1重组SjTGR的TrxR、GR、Grx半数抑制浓度(IC50)值分别为6.89、0.47和8.12 nmol·L-1,TrxR、GR的抑制常数(Ki)分别为为0.762和0.034 nmol·L-1。金诺芬对SjTGR的TrxR活性抑制作用为竞争抑制,而对SjTGR的GR活性的抑制作用为非竞争抑制作用。结论 SjTGR具有TrxR、GR、Grx三种酶活性,能被金诺芬所抑制,是开发抗日本血吸虫新药的分子靶标。
- 宋丽君李家璜余传信华子春殷旭仁钱春艳王瑜张伟柯雪丹
- 关键词：酶动力学金诺芬抑制剂
- 酿酒酵母表达Sj23HD-HSA融合蛋白与免疫反应性分析被引量：5
- 2011年
- 目的采用酵母表达技术制备日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白分子大亲水肽段(Sj23HD)与人血清白蛋白(HSA)成熟肽的融合蛋白(Sj23HD-HSA),并分析其免疫反应性。方法应用重叠PCR方法构建编码Sj23HD-HSA融合蛋白的融合基因片段,通过TA克隆和DNA测序确定构建的融合蛋白基因序列的正确性。将融合基因定向插入酵母表达质粒pWX530中构建分泌型重组表达载体Sj23HD-HSA/pWX530。重组质粒转化酿酒酵母感受态细胞,在亮氨酸营养缺陷型培养基上筛选含重组质粒的酵母转化子菌落。对转化子酵母进行发酵培养,通过SDSPAGE分析酵母培养液上清中的蛋白成分,离子交换层析纯化培养上清中的Sj23HD-HSA蛋白成分。经免疫印迹分别与血吸虫病人、华支睾吸虫病人和健康人血清反应,确定酵母表达的Sj23HD-HSA融合蛋白的免疫反应性。结果 DNA序列分析显示,编码外分泌型Sj23HD-HSA融合蛋白的融合基因构建成功。含有Sj23HD-HSA/pWX530重组表达质粒的酵母转化子可以在非诱导条件下表达外分泌型可溶性的Sj23HD-HSA融合蛋白,其分子量大小与预期大小(73kDa)相近。免疫印迹分析结果显示,Sj23HD-HSA融合蛋白可以特异性地被血吸虫病人血清所识别,但与华支睾吸虫病人血清、健康人血清不发生反应。结论 Sj23HD-HSA融合蛋白被成功制备,并具有良好的特异性和免疫反应性,是一种有潜在价值的血吸虫病免疫诊断抗原。
- 张伟余传信杨建良冯炜殷旭仁宋丽君王玠钱春艳柯雪丹
- 关键词：日本血吸虫酵母表达免疫反应性
- 血吸虫感染小鼠及家兔抗Sj23ku膜蛋白大亲水肽段(Sj23HD)IgG应答模式及其免疫诊断价值被引量：3
- 2013年
- 目的探讨日本血吸虫中国大陆株23ku膜蛋白分子大亲水肽段(Sj23HD)的抗体反应模式及重组Sj23HD-HSA用于血吸虫诊断和疗效考核的价值。方法建立血吸虫尾蚴感染小鼠及家兔模式动物。采集尾蚴感染前、感染后及治愈后不同时间点小鼠及家兔血清,以酵母表达的纯重组Sj23HD蛋白为抗原,通过间接ELISA方法检测抗Sj23HD IgG应答水平的动态变化,观察Sj23HD在小鼠及家兔体内的抗体反应应答模式及其疗效考核潜能;以Sj23HD-HSA融合蛋白为抗原,以ELISA检测132份血吸虫、30份华支睾吸虫、10份并殖吸虫感染者以及80份健康人血清,观察该重组抗原用于血吸虫病诊断的价值,以抗可溶性虫卵抗原的抗体应答反应作为对照。结果血吸虫感染小鼠及家兔体内抗Sj23HD蛋白的抗体反应呈短寿应答模式,抗Sj23HD IgG反应随着感染时间的延长呈增强趋势,治愈后的初期继续增强,至治疗后2～4周达到最高水平,随后逐渐下降,至治疗后16周,部分小鼠、家兔的抗体水平可达到阴性阈值,但下降幅度存在个体差异;抗SEA抗体水平在治疗后呈轻度下降趋势。未治疗小鼠和家兔血清中抗Sj23HD、SEA的抗体水平均无明显下降。重组Sj23HD-HSA和SEA ELISA检测132份血吸虫病病人血清,特异抗体阳性率分别为88.64%和97.73%;检测10份并殖吸虫病病人血清,交叉反应率为50%和90%;检测30份华支睾吸虫病病人血清,交叉反应率为0和16.7%;80份健康人血清检测均为阴性。结论血吸虫感染小鼠、家兔血清中抗Sj23HD蛋白的抗体反应为抗原依赖的短寿抗体反应,检测参与这一特异性短寿抗体反应的抗体具有血吸虫病诊断与疗效考核潜能。与SEA相比,重组Sj23HD蛋白作为抗原用于血吸虫病实验诊断具有较好的特异性,但对于来自并殖吸虫流行区的患者仍需注意鉴别诊断。
- 张伟王玠余传信宋丽君殷旭仁钱春艳沈双金一柯雪丹姚媛高玒许永良杨静
- 关键词：疗效考核
- 血吸虫感染小鼠早期诊断抗原的研究
- 目的:对6种日本血吸虫抗原的早期诊断价值进行评价,并应用二维电泳(2-DE)、免疫印渍和质谱技术鉴定可溶性日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)成分中具有早期诊断价值的抗原分子,为研制用于哨鼠早期诊断的免疫试剂提供候选抗原。...
- 王玠余传信张伟殷旭仁宋丽君钱春艳何伟柯雪丹
- 文献传递
- 质谱技术鉴定日本血吸虫可溶性虫卵抗原具有早期诊断价值的蛋白分子被引量：4
- 2012年
- 目的采用二维电泳、免疫印迹法和质谱技术鉴定日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)成分中具有早期诊断价值的抗原分子。方法通过等电聚焦以及十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳对SEA进行二维电泳,将胶上蛋白质斑点转移到硝酸纤维素膜上,再分别与日本血吸虫感染前、后不同时间点的小鼠血清反应,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG作为二抗,进行免疫印迹试验,寻找SEA中能与血吸虫感染早期血清反应的蛋白斑点。通过高效液相色谱串联质谱(LC MS/MS)分析鉴定其蛋白成分。结果对血吸虫感染1、2、6周以及未感染健康小鼠血清识别SEA的二维电泳免疫印迹图谱进行匹配分析发现,SEA中有2个蛋白斑点能被血吸虫感染后1、2、6周小鼠血清识别,另有3个蛋白斑点仅被血吸虫感染后6周小鼠血清识别。经LC MS/MS鉴定,2个被血吸虫感染早期血清识别的SEA蛋白分子分别为热休克蛋白(HSP70)和葡萄糖调节蛋白(Grp78/Bip)。结论 SEA中HSP70和Grp78/Bip可能具有血吸虫感染早期诊断价值。
- 王玠宋丽君何伟殷旭仁钱春艳张伟许永良曹国群柯雪丹余传信
- 关键词：日本血吸虫可溶性虫卵抗原二维电泳质谱
- 应用免疫蛋白质组学方法鉴定弓形虫病诊断抗原分子的研究被引量：3
- 2015年
- 目的鉴定对弓形虫感染具有潜在诊断价值的弓形虫抗原分子。方法制备刚地弓形虫RH株速殖子全虫可溶性蛋白及弓形虫感染小鼠腹腔蛋白,经SDS-PAGE分离后采用半干电转移方法将其转移到硝酸纤维素膜上,再分别与22份弓形虫感染者血清进行Western blot,以22份健康人血清和其他寄生虫病患者血清作为对照,筛选能被弓形虫感染者血清特异性识别的蛋白组分;两种蛋白样本经二维电泳分离后采用Western blot筛选能被弓形虫感染者混合血清识别,但不能被健康人血清及其他寄生虫病患者血清识别的特异性斑点。切取SDS-PAGE胶上相应的特异性蛋白质斑点进行MALDI-TOF分析,鉴定蛋白斑点的基因。结果一维电泳及Western blot结果显示,弓形虫感染小鼠腹腔蛋白中的90、37、30、28和18ku组分分别可被部分弓形虫感染者血清识别,其中为28ku蛋白能被22份弓形虫感染病人血清中的15份所识别;速殖子全虫可溶性虫体蛋白中的90、70、67、56、48、39、37、30、28和18ku组分可被部分弓形虫感染者血清识别,其中28ku蛋白可被22份弓形虫感染者血清中的21份识别,22份健康人血清中有2份与28ku蛋白呈弱阳性反应,与其他寄生虫病患者血清无交叉反应。二维电泳Western blot阳性斑点的飞行质谱分析显示,弓形虫感染小鼠腹腔蛋白中的28ku组分为磷酸丙糖异构酶,弓形虫速殖子全虫可溶性蛋白中的28ku组分为GRA2和GRA7。结论弓形虫抗原与宿主抗体反应具有高度异质性,GRA2、GRA7及磷酸丙糖异构酶等分子的弓形虫感染者血清识别率高,此三种蛋白可作为建立具有高敏感性的弓形虫病特异性免疫诊断方法的抗原分子。
- 沈双肖迪宋丽君余传信张建中殷旭仁高玒王玠柯雪丹许永良杨静唐凤仝德胜
- 关键词：弓形虫RH株排泄分泌抗原WESTERNBLOT
- 2005-2016年血吸虫病研究项目国家自然科学基金资助情况分析被引量：1
- 2017年
- 目的通过研究2005-2016年国家自然科学基金对血吸虫病研究项目的资助情况,分析血吸虫病领域的主要研究方向和动态。方法通过国家自然科学基金ISIS系统,筛选2005-2016年血吸虫病学研究领域的资助课题,统计分析资助数量、金额、类别、机构、学科的分布情况,并借助网络图谱,展现研究主题进展。结果 2005-2016年血吸虫病研究共获得国家自然科学基金资助项目198项,共计7 605万元。获资助的项目以面上项目和青年项目为,获资助机构以科研院所和医学类高校为主,主要资助方向为医学病原微生物与感染、兽医学和医学免疫学。结论国家自然科学基金对血吸虫病的资助有下降趋势,但获项目的研究深度与广度日益渐深,因此需鼓励创新性研究,推动学科交叉,以促进血吸虫病学的发展。
- 周雯迪施亮柯雪丹王玠
- 关键词：血吸虫病国家自然科学基金
- 江苏省血吸虫病防治研究所2005--2014年科研课题回顾分析被引量：1
- 2017年
- 目的通过对江苏省血吸虫病防治研究所2005—2014年获批科研课题情况进行回顾与分析，为提升科研能力，加快人才培养和十三五科研业务发展规划的制定提供依据。方法将江苏省血防所2005—2014年的课题立项年度计划和人事部门提供的人员名册表录入MicrosoftExcel2010软件，用统计软件Stata12．0进行数据的统计分析，通过比较每年获批课题数来分析获批课题趋势。结果2005--2014年，江苏省血防所共获得课题100项，其中国家级课题29项，占29．0Voo；省部级课题31项，占31．0％；国际合作课题12项，占12．0％；其他市厅级课题28项，占28．0Vo。课题研究性质为基础研究58项，应用研究42项，获批课题负责人年龄中35岁以下人员人数上升明显，课题负责人逐渐转变为以中级职称人员为主。结论该所获批的课题研究类型以基础研究为主，课题中标总体呈上升趋势，青年人才正迅速成长，但仍需进一步提升国家重大项目和国际合作项目的承担能力，不断拓展研究领域，加强对其他寄生虫病的研究力度。
- 王阶周雯迪柯雪丹罗恩培毛元春曹园园颜维安羊海涛梁幼生
- 关键词：科研管理寄生虫病
- 日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶免疫功能的研究
- 2015年
- 目的研究日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(Thioredoxin Glutathione Reductase of Schistosoma japonicum,SjTGR)的免疫原性及抗日本血吸虫感染的免疫保护性作用。方法 75只小鼠随机分为5组:空白组、PBS组、CpG2免疫组、TGR免疫组和TGR+CpG2联合免疫组,免疫3次。首次免疫前及第3次免疫后2周经尾静脉采血,采用酶联免疫法分别检测血清中抗SjTGR蛋白IgG、IgG1和IgG2a的抗体水平。第3次免疫后2周,每只小鼠经腹部感染日本血吸虫尾蚴40±2条,42 d后剖杀,收集成虫和虫卵,计算减虫率和减卵率;制备各组小鼠单个脾淋巴细胞,采用流式细胞术检测脾细胞表面标志物CD44high、CD4+CD44high或CD8+CD44high水平;用SjTGR刺激免疫小鼠脾细胞72 h,采用酶联免疫法检测脾细胞的IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的水平。结果第3次免疫后2周TGR与CpG2+TGR免疫组小鼠血清抗SjTGR抗体的IgG滴度均达1:200 000以上,IgG2a与IgG1的比值(IgG2a/IgG1)随时间的延长缓慢增高。TGR免疫组和TGR+CpG2联合免疫组细胞上清中的IFN-γ和IL-2水平与空白组、PBS组、CpG2免疫组相比明显增高(P<0.05)。TGR免疫组与TGR+CpG2免疫组小鼠脾细胞的CD44high、CD8+CD44high及CD4+CD44high与空白组和PBS组相比细胞比值增加(P<0.05)。TGR免疫组和CpG2+TGR免疫组的减虫率分别为9.4%,10.5%,减卵率分别为9.2%和32.8%。结论 SjTGR具有较强的免疫原性,可诱导小鼠免疫反应向Th1型极化,但不足以产生抗日本血吸虫感染的保护效应。CpG2 ODN可能是一种有效的Th1型免疫佐剂。
- 宋丽君余传信殷旭仁沈双高玒张伟金一姚媛刘茜王玠柯雪丹许永良杨静
- 关键词：日本血吸虫免疫原性免疫保护
- 日本血吸虫核糖核酸酶T2样SjCP1412蛋白的表达及功能分析
- <正>目的制备重组日本血吸虫SjCP1412蛋白,并研究其生物学功能。方法采用PCR方法从质粒CP1412/PEU-GST中扩增出RNT2的开放阅读框基因片段,构建重组质粒Sj CP1412-pET28a。将重组质粒Sj...
- 余传信柯雪丹宋丽君殷旭仁沈双姚媛高玒
- 文献传递
