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小鼠金属硫蛋白-I的表达对HeLa细胞耐药性的影响: 2000年; Hp SV2 - neo质粒作为载体 ,在 Eco RI酶切位点上插入小鼠金属硫蛋白 (MT- I)基因 ,然后用 DNA-磷酸钙介导的基因转移法将重组质粒转染 He L a细胞 ,经筛选得到表达 MT- I的抗性细胞克隆。经检测 ,G418抗性细胞内有 MT的特异性表达 ,表达量是未转染细胞的 2 .6倍。用不同浓度顺铂、阿霉素处理细胞 ,观察 MT- I基因的表达与 He L a细胞耐药性的关系。结果表明 :0 .1μmol/ ml顺铂作用细胞 72 h后 ,顺铂对转染和未转染 MT细胞的生长抑制率分别为 34%和 82 % (P<0 .0 5 ) ;半数细胞生长抑制浓度 (IC5 0 )分别为0 .144和 0 .0 6 1μmol/ ml,二者相差 2 .36倍。用 0 .2μmol/ ml阿霉素作用细胞 72 h后 ,对转染和未转染细胞的生长抑制率分别为 18%和 2 5 % ,差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结果表明。; 李侠吕文英殷慎敏李令媛茹炳根; 关键词：金属硫蛋白 HELA细胞顺铂阿霉素耐药性

金属硫蛋白在医学上的应用被引量：8: 1996年; 金属硫蛋白在人类的健康、疾病以及癌症治疗方面有着重要作用。ＭＴ可提高机体对化疗药物的耐受住并且作为辅助药物可减少化疗及辐射治疗的毒副作用；而ＭＴ基因的表达在很大程度上是肿瘤细胞获得抗药性的主要原因．此外ＭＴ在镉抑制肿瘤方面以及在ｗｉｌｓｏｎ氏病治疗中扮演了重要角色．ＭＴ家族新成员一生长抑制因子是Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ病病理发生过程中的重要因素．本文将对ＭＴ在癌症治疗中的作用；ＭＴ在细胞抗药性方面的作用；ＭＴ在镉抑制肿瘤方面的作用；ＭＴ在Ｗｉｌｓｏｎ氏病治疗中的作用以及ＭＴ类蛋白一生长抑制因子的作用等五个方面的研究进展加以综述．; 殷慎敏李令媛茹炳根; 关键词：金属硫蛋白

小鼠金属硫蛋白基因－I在CHO细胞中稳定表达及其在医疗方面的应用被引量：2: 1996年; 将小鼠的ＭＴ－Ⅰ基因插入ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ质粒的ＥｃｏＲＩ位点，构建了具有ＳＶ４０和ＭＴ双启动子并正向插入ＭＴ－Ⅰ基因的表达载体。用改良的磷酸钙／ＤＮＡ沉淀法将表达载体导入ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞内，用不含次黄嘌呤（Ｈ）和胸腺嘧啶（Ｔ）的选择培养基筛选出稳定表达ＭＴ阳性克隆Ｄ－２２，经检测１０６细胞的ＭＴ表达量约为１．８μｇ，Ｄ－２２细胞对Ｃｄ２＋浓度抗性较之ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞高１４倍。为了研究金属硫蛋白对正常细胞所具有的保护作用，将不同浓度的顺铂分别处理无ＭＴ表达的ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞和有ＭＴ表达的Ｄ－２２细胞。实验发现顺铂对Ｄ－２２细胞和ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞５０％生长抑制浓度（ＩＣ５０）分别是０．１４５μｍｏｌ／Ｌ和０．０４μｍｏｌ／Ｌ。上述研究表明ＭＴ对正常细胞有一定的保护作用，因而通过诱导正常细胞提高ＭＴ的表达量，同时使用ＭＴ阻断剂阻断肿瘤组织的ＭＴ合成。; 殷慎敏李令媛茹炳根; 关键词：金属硫蛋白细胞转染基因表达 CHO细胞

小鼠金属硫蛋白 Ⅰ cDNA编码序列的克隆及其在昆虫细胞中的表达被引量：1: 1997年; 将质粒ｐＢＸ－ＭＴ上的小鼠ＭＴ－ⅠｃＤＮＡ片段切下作为模板，通过ＰＣＲ方法删除该片段的非编码序列，将编码序列克隆到质粒ｐＢＳ－ＳＫ中，经ＤＮＡ序列测定后证明其克隆序列正确．再将ＭＴ－ⅠｃＤＮＡ编码序列插入到转移载体ｐＢａｃＰＡＫ８的ＢａｍＨⅠ和ＥｃｏＲⅠ位点之间，通过磷酸钙／ＤＮＡ共转染方法将其导入昆虫细胞Ｓｆ９中，以Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和ＤｏｔＥＩＡ方法对表达产物进行了检测。; 殷慎敏时晓冰李令媛茹炳根; 关键词：金属硫蛋白 CDNA 克隆

安徽庐江鸭乙型肝炎病毒LJ-76转染细胞系的建立: 1997年; 为建立鸭乙型肝炎病毒ＬＪ－７６的转染细胞系，将ＬＪ－７６病毒ＤＮＡ插入到ｐＵＣ１９的ＥｃｏＲⅠ位点上，分离得到含有双拷贝ＬＪ－７６ＤＮＡ的重组质粒．通过磷酸钙沉淀方法，将经ＣｓＣｌ等密度离心纯化的ＬＪ－７６ＤＮＡ双体导入到人肝癌细胞ＢＥＬ７４０２中．收集转染细胞的培养液进行蔗糖密度梯度离心，所得沉淀经检测发现含有ＬＪ－７６ＤＮＡ并具有特异性ＤＨＢＶ内源性ＤＮＡ多聚酶活性；对上述样品通过ＤｏｔＥＩＡ检测ＤＨＢＶ核心抗原及表面抗原结果为阳性．Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析表明转染细胞内存在病毒ＤＮＡ复制中间体ｃｃｃＤＮＡ、ｓｓＤＮＡ和ｒｃＤＮＡ，而ｃｃｃＤＮＡ被认为是复制活动较为活跃的标志．电镜观察转染细胞的上清发现有病毒颗粒的存在．; 殷慎敏陈鸿珊; 关键词：鸭乙型肝炎病毒转染细胞系乙型肝炎病毒

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殷慎敏