毕惠祥
- 作品数：51 被引量：94H指数：5
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- 恶性疟原虫保护性抗原复合基因—痘苗病毒重组活疫苗株家兔免疫血清及IgG对恶性疟原虫的体外抑制试验被引量：4
- 1999年
- 用恶性疟原虫痘苗病毒重组活疫苗候选株的家兔免疫血清及纯化的ＩｇＧ 进行了恶性疟原虫的体外培养抑制试验，并与该目的基因的原核表达蛋白及全虫抗原进行了比较。结果在疟原虫的第一个生长周期内，重组痘苗病毒组的免疫血清抑虫作用最强（Ｐ＜ ０．０５），其次为全虫抗原及原核蛋白组；ＩｇＧ 则在第一及第二个生长周期均以原核表达蛋白组抑虫作用最强（ Ｐ＜ ０．０５） ，其次为重组痘苗病毒及全虫抗原组。说明重组痘苗病毒免疫血清及ＩｇＧ具有一定的体外抑制恶性疟原虫增殖作用，值得进一步深入研究。
- 董文其毕惠祥李明李英杰
- 关键词：疟原虫痘苗病毒IGG
- 华支睾吸虫成虫转录辅激活因子基因在原核细胞中的克隆、表达及其生物功能分析被引量：3
- 2005年
- 目的 构建华支睾吸虫成虫转录辅激活因子 (transcriptionalcoactivator ,TC)基因 (TC基因 )原核重组质粒 ,进行原核表达、鉴定及生物功能分析。 方法 根据TC基因已知序列设计 1对引物 ,从华支睾吸虫成虫cDNA文库中扩增TC基因片段 ;将目的基因进行聚合酶链反应 (PCR) ,其产物和空质粒 pGEX 4T 1、pET3 0a (+ )同时用限制性内切酶BamHⅠ、SalⅠ双酶切 ,纯化回收后连接并转化大肠埃希菌 (E .coliBL2 1)。将构建的重组质粒pGEX 4T 1 TC和 pET3 0a (+ ) TC分别经双酶切、PCR及测序鉴定后在大肠埃希菌BL2 1中诱导表达。用十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹法 (Westernblotting)鉴定其表达效果 ,用亲和层析法纯化重组质粒pET3 0a (+ ) TC表达产生的组氨酸重组蛋白 (His TC)。 结果 构建了TC基因原核重组质粒pGEX 4T 1 TC和 pET3 0a (+ ) TC。SDS PAGE结果表明TC基因在大肠埃希菌BL2 1系统获得高效表达 ,其重组蛋白分子量与理论值相符。Westernblotting结果表明重组质粒 pGEX 4T 1 TC表达的谷胱甘肽硫转移酶 (GST)重组蛋白(GST TC)可被华支睾吸虫免疫兔血清识别 ,具有免疫反应性。纯化的TC基因的组氨酸 (His)重组蛋白 (His TC)经SDS PAGE显示单一条带。
- 张咏莉余新炳吴德吴忠道毕惠祥
- 关键词：华支睾吸虫基因大肠埃希菌辅激活因子
- 一种恶性疟原虫多价重组疫苗的体液免疫反应研究被引量：1
- 1995年
- 一种恶性疟原虫多价重组疫苗的体液免疫反应研究陈白虹，缪军，薛采芳，毕惠祥，李英杰（寄生虫学教研室西安７１００３３第一军医大学疟疾免疫学研究室）关键词恶性疟原虫；重组疫苗；ＥＬＩＳＡ中图号Ｒ３８２．３１自杂合肽ＳＰｆ６６在猴和人体内试验中取得了初步的成...
- 陈白虹缪军薛采芳毕惠祥李英杰
- 关键词：恶性疟疟疾重组疫苗疟原虫疫苗
- 自制免疫胶体金层析条检测恶性疟原虫的初步研究被引量：12
- 2002年
- 目的 建立一种简易快速、适合于基层使用的自测式免疫胶体金层析 (GICA)法用于恶性疟原虫的检测。方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒 ,标记抗恶性疟原虫乳酸脱氢酶(LDHpf)单抗 2A5 ,并以另外 4株单抗作为包被抗体 ,制成诊断恶性疟原虫的免疫层析条 ,探索最佳配对模式及估计最低检测量。以镜检和PCR法为对照 ,用GICA条检测门诊“四热”病人血样 ,评价其敏感性和特异性 ,并对其稳定性进行了初步研究。结果 GICA检测重组LDHpf,最低检测量为 1ng。以镜检法和PCR法为标准 ,GICA条检测恶性疟原虫的敏感性分别为 88.37%和 86 .6 7% ,GICA与镜检法的符合率均为 91.5 5 %。并且当虫体密度 >2 0 0个 μl时 ,GICA的敏感性为 10 0 %。GICA条在 4℃下可保存 3个月以上。结论 GICA检测恶性疟原虫简易快速、灵敏度高 ,无需特殊仪器设备 。
- 吴英松李明毕惠祥董文其李英杰
- 关键词：恶性疟原虫
- 恶性疟原虫环子孢子蛋白基因在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 1999年
- 用ＰＣＲ方法特异性扩增恶性疟原虫云南株（ＰＦＤ－３／ＹＮ）环子孢子蛋白基因片段，经基因序列测定后克隆于ｐＷＲ４５０－１融合蛋白表达载体，并转化大肠杆菌ＴＧ１、ＪＭ１０３及ＪＭ１０９。在不同菌体浓度及不同剂量ＩＰＴＧ诱导下检测ＣＳＰ融合蛋白的表达，结果显示仅ｐＷＲ－ＣＳＰ／ＴＧ１工程菌在菌体浓度ＯＤ５９０值达０．７～０．８时，加入终浓度１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ进行诱导，可表达一８８ｋＤａ的融合蛋白。
- 肖建华李明崔东毕惠祥王萍李英杰
- 关键词：恶性疟原虫环子孢子蛋白基因表达大肠杆菌
- 恶性疟原虫RNA组分的分离
- 1994年
- 恶性疟原虫ＲＮＡ组分的分离南京军区福州总医院检验中心第一军医大学疟疾免疫研究室福州３５０００１兰风华，林来兴妹，赵雨田，毕惠祥，彭一兵，李英杰为了研究恶性疟原虫的ＲＮＡ，综合文献报道的多种方法，建立了从同批虫体中分离多个不同ＲＮＡ组分的方法，效果良好...
- 兰风华林来兴妹赵雨田毕惠祥彭一兵李英杰
- 关键词：恶性疟原虫疟原虫RNA
- 恶性疟原虫海南、云南、安徽株裂殖子表面抗原MSA2基因的克隆和序列分析被引量：3
- 1995年
- 应用ＰＣＲ技术扩增并克隆了恶性疟原虫海南、云南、安徽三个地理株的ＭＳＡ２基因，测定并分析了全基因序列。结果表明，海南、云南、安徽株ＭＳＡ２基因序列完全相同，全长为７９５ｂｐ，编码２６４个氨基酸，与ＦＣＱ－２７／ＰＮＧ株ＭＳＡ２高度同源。对抗原表位进行多参数综合分析表明，我国虫株除具有国外已确定的抗原表位ＳＴＮＳ、ＤＴＰＴＡＴＥ外，在第５３—７２位氢基酸间可能具有一个新的抗原表位。
- 李明谢毅李英杰任大明毕惠祥
- 关键词：疟原虫裂殖子表面抗原基因序列分析
- 抗恶性疟McAb的筛选与恶性疟免疫诊断研究
- 1991年
- 用单克隆抗体(McAb)夹心斑点免疫金银染色法(Dot-IGSSA)对11株抗恶性疟McAbs和4株抗食蟹猴疟原虫McAbs进行了筛选,其中McAbs11G5、13A2、13A1可包被到硝酸纤维素膜(NcF)上作为捕获抗体,McAb14D9可用于胶体金探针的标记。此外,为增加胶体金的标记效果和胶体金标记McAb14D9探针的敏感性,还对McAb14D9的等电点(pI)进行了测定,其pI为6.35。同时用筛选出的最佳McAbs对10份恶性疟病人感染血和10份健康人血样品进行了检测,并对这几株McAbs的交叉反应性进行了测定,结果表明McAbs11G5、13A1与14D9夹心时,对云南株和安微株恶性疟原虫红内期抗原呈现交叉反应,而且McAb13A1与14D9夹心时还可以用于检测间日疟抗原。
- 周增桓李海燕李英杰李全贞巢穗欧阳明辉毕惠祥彭一兵
- 关键词：疟疾恶性疟原虫免疫抗体
- 抗恶性疟HRP-11单链抗体的筛选和鉴定(英文)
- 2000年
- 目的 研究开发简便、快速和有效的疟疾诊断技术。方法 利用噬菌体抗体库技术 ,在构建抗恶性疟原虫红内期噬菌体抗体库的基础上 ,经 3轮“吸附 -洗脱 -扩增”的富集反应后 ,筛选抗HRPII阳性克隆株并进行可溶性诱导表达 ,最后用ELISA和Westernblot等进行鉴定。结果 筛选出 6株抗HRPII阳性克隆株 ,表达的单链抗体Mr 为 310 0 0左右 ,能与HRPII抗原起特异性结合反应。
- 徐伟文董文其李明毕惠祥陈白虹王萍
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体恶性疟
- 恶性疟原虫FCC1/HN株新抗原表达序列标记位(ESTs)的获得
- 1999年
- 目的： 以筛选恶性疟原虫ＦＣＣ１／ＨＮ 株λｇｔ１１ ｃＤＮＡ 表达文库所获得的强阳性克隆作基础， 对上述强阳性克隆的ｃＤＮＡ 插入片段进行ＤＮＡ 序列测定， 阐明相对应的新表达序列标签 （ＥＳＴｓ）， 作为发现新抗原基因的线索。方法：以ｃＤＮＡ 表达文库接头的较长链作ＰＣＲ引物、扩增ｃＤＮＡ 插入片段，将扩增产物克隆入Ｍ１３ ｍ ｐ１８测序载体， 进行部分ＤＮＡ 序列测定、编辑， 将之在ＧｅｎＢａｎｋ 中进行ＤＮＡ 序列同源性搜索比较和分析。结果： 获得１ 个Ｃ０３ 序列为已知恶性疟原虫热休克蛋白７０－２ 基因片段， 发现５ 个新的具有抗原意义的恶性疟原虫表达序列标记位 （ＥＳＴｓ）。结论： 这５ 个新的恶性疟原虫表达序列标记位为发现新的恶性疟原虫抗原基因奠定了基础。
- 阎宗合谢毅李明王萍王燕妮毕惠祥李英杰
- 关键词：恶性疟原虫抗原CDNA
