毕慧
- 作品数：8 被引量：30H指数：3
- 供职机构：上海生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划上海市现代生物与新药产业发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脑膜炎球菌表面蛋白fHBP与PorA的融合表达及其免疫原性被引量：2
- 2016年
- 目的构建脑膜炎球菌（Neisseria meningitidis,Nm）表面蛋白fHBP重组表达质粒,并与PorA蛋白融合表达,对单抗原fHBP和融合抗原fHBP-PorA的免疫原性进行检测。方法筛选并优化fHBP和PorA基因序列,设计连接片段将PorA连接至fHBPC-端,构建重组表达质粒pET-24b-fHBP和pET-24b-fHBP-PorA,分别转化E.coli BL21（DE3）感受态细胞,IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经镍柱亲和层析和凝胶过滤层析后免疫家兔,制备抗血清,采用间接ELISA、流式细胞术和微量血清杀菌力试验（serum bactericidal assay,SBA）评价抗原的免疫原性。结果经双酶切和测序鉴定,两个蛋白的重组表达质粒构建正确。重组蛋白fHBP以可溶形式表达,fHBP-PorA以包涵体形式表达,纯化后纯度均在90%以上。抗血清滴度均在1.0×10~5以上。流式细胞术检测显示,抗血清与Nm可发生特异性结合,且fHBP-Por A抗血清显示出一定的交叉反应。fHBP和fHBP-PorA抗血清对Nm29019的杀菌滴度为1∶128。结论 fHBP具有较好的抗原性和免疫原性,具备B群脑膜炎疫苗开发前景。多抗原融合策略需更多的优化考虑。
- 吴根鹏袁萍王月红王晓毕慧黄帼英徐帆洪朱为
- 关键词：脑膜炎球菌免疫原性
- C群脑膜炎球菌结合疫苗的制备及其免疫原性
- 2014年
- 目的 制备由不同分子大小C群脑膜炎球菌多糖（group C meningococcal polysaccharide,CPS）与破伤风类毒素（tetanus toxoid,TT）共价偶联而成的结合疫苗（CPS-TT）,并检测其在小鼠中的免疫原性.方法 将CPS降解成不同大小的片段,经碳二亚胺（carbodiimide,EDAC）或溴化氰（cyanogen bromide,CNBr）活化后偶联到TT上制成CPS-TT.NIH小鼠皮下注射制备的不同CPS-TT,用ELISA法测定小鼠血清抗CPS和TT IgG抗体.结果 EDAC活化的降解CPS的衍化率（3.9％～5.7％）和多糖回收率（11.4％～21.3％）均高于CNBr活化的降解CPS的衍化率（0.4％～1.2％）和回收率（2.4％～11.5％）.EDAC或CNBr活化的降解CPS制备的CPS-TT在小鼠中均具有较强的免疫原性,但EDAC活化的降解CPS制备的CPS-TT免疫小鼠的抗CPS抗体滴度高于CNBr活化的降解CPS制备的CPS-TT免疫小鼠.结论 EDAC活化的降解CPS可用于制备C群脑膜炎球菌结合疫苗.
- 毕慧王伟沈坚王月红王晓荣家康朱为
- 关键词：免疫原性
- A群脑膜炎球菌多糖结合物的免疫原性研究被引量：8
- 2002年
- 目的 制备A群脑膜炎球菌多糖 (PS)结合物 ,观察其免疫原性。方法 A群脑膜炎球菌多糖经溴化氰活化后共价接上己二酰肼手臂 ,在碳二亚胺催化下与精制破伤风类毒素 (TT)偶联制备结合物。单独多糖、多糖结合物和TT按相同程序免疫NIH小鼠 ,用ELISA法检测小鼠血清抗多糖抗体滴度和特异性及抗TT抗体滴度。结果 用上述实验方法制备的结合物具有多糖和蛋白质的抗原性 ,免疫小鼠可诱导高滴度的血清抗多糖IgG抗体 ,免疫 2针后高滴度抗体至少持续存在 3周。血清抗体可中和多糖。加强免疫提示有免疫记忆性。结合物还可诱导产生一定水平的TT抗体。结论A群脑膜炎球菌多糖结合到TT上可明显增强多糖在小鼠中的免疫原性 。
- 朱为尹行余生玲毕慧黄帼英金铭于宝珍徐裕忠曹婕陈哲文何祥昆
- 关键词：A群脑膜炎球菌免疫原性细菌性脑膜炎
- 冻干A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性及氢氧化铝佐剂复溶疫苗的免疫效果被引量：2
- 2010年
- 目的观察冻干A群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗的稳定性,并比较A(lOH)3佐剂和磷酸盐缓冲液(PBS)复溶疫苗的免疫效果。方法将冻干疫苗于2～8℃放置36个月,每隔6个月取样,测定游离多糖含量、分子大小等,观察疫苗的稳定性。分别用A(lOH)3和PBS两种稀释液复溶疫苗后,计算吸附率并免疫小鼠,采用ELISA法测定小鼠血清中抗多糖IgG抗体滴度。结果疫苗于2～8℃放置30个月,各项质量指标均合格。A(lOH)3稀释液复溶疫苗的吸附率为100%。以两种稀释液复溶的疫苗均可诱导小鼠产生高滴度的抗多糖IgG抗体及免疫记忆反应,且A(lOH)3稀释液明显优于PBS稀释液。结论冻干A群脑膜炎球菌结合疫苗具有良好的稳定性,A(lOH)3佐剂可作为其稀释液。
- 朱为毕慧王月红王晓
- 关键词：脑膜炎结合疫苗稳定性氢氧化铝
- A群和C群脑膜炎球菌荚膜多糖提制工艺研究被引量：4
- 2011年
- 研究一种不使用苯酚的荚膜多糖提制工艺,用于疫苗制备。采用液体罐培养A群和C群脑膜炎球菌,杀菌后离心取上清液,用十六烷基三甲基溴化铵沉淀多糖,用氯化钙溶液解离后,加乙醇至25%去除核酸等杂质,经乙醇沉淀获得粗多糖。将粗多糖溶解后,加乙醇至一定浓度沉淀蛋白,离心获得上清液,经超滤浓缩和乙醇沉淀,获得纯化多糖。纯化的多糖生化检测结果符合WHO和《中国药典》(2010年版)规定,豚鼠和小鼠异常毒性检查合格,豚鼠过敏试验未见过敏反应,1H NMR检测显示多糖结构具有一致性。该研究建立的A群和C群脑膜炎球菌荚膜多糖提制工艺为应用于疫苗制备奠定了基础。
- 朱为荣家康江元翔王晓毕慧王月红郑小秋黄帼英秦洁
- 关键词：脑膜炎球菌荚膜多糖提制乙醇
- A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性研究
- 本文通过观察游离多糖含量和结合物分子大小,对A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗液体和冻干两种剂型的稳定性等进行研究.
- 朱为毕慧黄帼英金铭
- 关键词：A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗生物制品稳定性分子生物学
- 文献传递
- A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性被引量：2
- 2004年
- 目的 观察A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性。方法 疫苗放不同温度和不同时间后 ,用乙醇沉淀法测定A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的游离多糖含量 ,SepharoseCL 4B凝胶层析法测定分子大小。结果液体疫苗放置 2～ 8℃ 9个月 ,游离多糖含量为 30 %以上 ;4℃放置 18个月 ,Kd <0 2的多糖回收率 <6 0 %。冻干疫苗放置 2 5℃和 37℃ 12个月 ,或放置 2～ 8℃ 18个月 ,游离多糖含量均不高于 2 5 % ,Kd <0 2的多糖回收率 >6 0 %。结论 冻干A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗具有良好的稳定性。
- 朱为毕慧黄帼英金铭
- 关键词：A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗稳定性温度
- A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗在6月龄～5岁儿童中的安全性与免疫原性研究被引量：12
- 2008年
- 目的评价A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗（Meningococcal Polysaccharide ConJugate Vaccine，MCV）在6月龄～5岁儿童中的安全性和免疫原性。方法对1339名6月龄～5岁儿童接种1～2剂A群MCV或A群脑膜炎球菌多糖疫苗（Meningococcal Polysaccharide Vaccine，MPV），观察72h内局部和全身反应，测定免疫前后血清杀菌抗体滴度。结果接种A群MCV或MPV后，均未观察到即时反应，局部和全身反应轻微，发热反应以弱反应为主。6～11月龄接种2剂、1～5岁接种1剂A群MCV后，杀菌抗体几何平均滴度分别为1：891．3和1：924．6，抗体≥4倍增长率分别为98．81％和98．45％。结论A群MCV对6月龄～5岁儿童具有良好的安全性和免疫原性。临床试验注册国家食品药品监督管理局药物临床研究批件号：2003L02729、2004L00764。
- 朱为叶强李荣成王树巧李亚楠李艳萍王琰毕慧农艺李凤祥
- 关键词：A群脑膜炎球菌结合疫苗多糖疫苗安全性免疫原性
