沈丹红
- 作品数：8 被引量：37H指数：4
- 供职机构：扬州大学园艺与植物保护学院更多>>
- 发文基金：江苏省林业三项工程项目江苏省普通高校研究生科研创新计划项目国家林业局林业科技成果推广计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 银杏雄株叶片类黄酮糖基转移酶活性分析被引量：2
- 2014年
- 【目的】为银杏黄酮糖苷的生物合成代谢研究及其叶用资源评价和优选提供新的技术。【方法】根据UFGT催化黄酮苷元槲皮素与UDPG反应生成槲皮素糖苷和UDP的原理．建立经试验筛选得到的最佳pH、温度、底物浓度和反应时间组成的优化体系，采用反相离子对色谱法测定银杏雄株不同生长时期叶片的UFGT酶活性。【结果】反应产物UDP线性为12．5—300mg·L^-1（r=O．9994），回收率为98．76％，RSD为1.3％（n=5）；建立的UFGT活性测定优化体系为：pH=8．0、反应温度30℃、槲皮素浓度400μmol·L^-1、反应时间4h：银杏雄株叶片5—10月间UFGT活性变化表现为由5月份的0．2μmol·L^-1·min^-1逐渐上升，到9月份达到最大值，为0．62μmol·L^-1。【结论】该技术简便、准确、重复性好。可推荐供银杏黄酮糖基转移酶活性测定参考应用．银杏叶用雄株9月份采叶可获得较高的黄酮糖苷含量。
- 沈丹红陈鹏蒋菲马江黎王金艳戴燕
- 关键词：银杏雄株叶片
- 银杏类黄酮O-甲基转移酶活性的高效液相色谱分析被引量：1
- 2012年
- 首次明确了银杏叶片类黄酮生物代谢关键酶O-甲基转移酶(flavonoid O-methyltransferase,FOMT)活性的HPLC测定技术与方法。采集扬州大学银杏种质资源圃银杏雄株成熟叶片,提取粗酶液,根据FOMT催化反应生成S-腺苷-L-高半胱氨酸(SAH)的原理,以山奈酚、槲皮素和异鼠李素等3种黄酮苷元为反应底物,采用优化的HPLC体系检测样品中FOMT催化反应生成的SAH峰面积,通过标准曲线求得不同反应底物的FOMT相对活性。FOMT活性反应生成物SAH在1.5～20μg/mL内呈良好的线性关系,RSD为2.1%(n=5),建立了FOMT活性测定优化体系。不同反应底物的FOMT活性表现不同,山奈酚与异鼠李素显著高于槲皮素。FOMT活性HPLC测定方法准确、快速、可靠、灵敏度高。
- 仲月明张传丽陈鹏沈丹红吴秋月周长远
- 关键词：银杏雄株叶片高效液相色谱
- 响应面法优化提取银杏雄株叶片聚戊烯醇的工艺研究被引量：9
- 2013年
- 目的优化银杏雄株叶片中聚戊烯醇的提取工艺。方法以影响提取得率的料液比、时间、温度为主要影响因子,采用高效液相色谱法(HPLC)测定聚戊烯醇含量,明确一定条件下各主要作用因子对聚戊烯醇提取得率的影响后,采用Box-Behnken试验设计,分别测定得到各因子不同水平处理的聚戊烯醇提取得率,并进行回归分析建模和方差分析。结果银杏雄株叶片聚戊烯醇提取的优化体系由料液比1∶12(g/mL)、时间60 min和温度38℃组成。通过响应面设计法优化体系提取的聚戊烯醇得率达到1.481%～1.653%。结论该优化体系提取率高,简单可行,适用于银杏叶聚戊烯醇的提取。
- 吴秋月陈鹏仲月明周长远沈丹红蒋菲
- 关键词：银杏雄株叶片响应面法HPLC
- 银杏雄株叶片萜内酯类化合物的HPLC检测分析被引量：1
- 2011年
- 目的:银杏叶萜内酯类化合物具重要的药用与保健开发利用价值。方法:在银杏最佳采叶期随机采取银杏叶片,经超声波70%乙醇水溶液提取、石油醚与正己烷萃取,再经ADS-17大孔树脂柱与酸性氧化铝柱纯化,以水∶甲醇∶四氢呋喃=7∶2∶1(V/V)为流动相,采用Waters ODS C18柱(250mm×416mm,5μm)进行HPLC分析:0.6ml/min流速、219nm检测波长、26℃检测温度、15μl进样量。结果:GA、GB、GC和BB分别在23～460μg/ml、21～420μg/ml、22～440μg/ml和27～540μg/ml范围内呈线性相关,最小检出量0.5μg,回收率90.74%～102.38%,RSD 1.63%～4.2%。GBE3得率1%,GA、GB、GC、BB占GBE3的12.55%,超过GBE761的6%国际标准。结论:该HPLC检测分析技术与方法适用于银杏叶片萜内酯类化合物的提取、纯化和检测。
- 葛家利沈丹红仲月明吴秋月陈鹏
- 关键词：银杏银杏内酯白果内酯HPLC
- 银杏类黄酮糖基转移酶基因全长序列克隆及表达分析被引量：9
- 2012年
- 以银杏(Ginkgo biloba L.)雄株叶片为试材,采用同源基因克隆及RACE-PCR方法,克隆到了类黄酮糖基转移酶(UDP-glycose:flavonoid glycosyltransferase,UFGT)基因GbUFGT的全长cDNA序列,其在GenBank中的注册号为JN640564.2。该基因编码区长1491bp,编码496个氨基酸。GbUFGT蛋白具有保守的PSPG基序、UDP-葡萄糖基转移酶和UDP-葡萄糖醛酸基转移酶结构域,与其他植物中的UFGT蛋白同源性较高。GbUFGT基因组序列与其cDNA序列相同,无内含子。半定量RT-PCR结果表明,GbUFGT在整个银杏叶片发育期均可较高水平的表达,且不同发育期表达水平无明显变化,属非发育时期特异性基因。
- 张传丽陈鹏仲月明周长远沈丹红蒋菲
- 关键词：银杏CDNA基因组
- 银杏类黄酮O-甲基转移酶基因的克隆与表达分析被引量：7
- 2012年
- 采集扬州大学银杏种质资源圃不同发育时期的银杏叶片提取RNA,经简并引物PCR和5′RACE扩增,得到了5′端包含起始密码子在内的长为876bp的银杏类黄酮O-甲基转移酶(flavonoid O-methyl-transferase,FOMT)基因cDNA片段,命名为GbFOMT-13,其在GenBank数据库注册号为JN711433。对所得核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行BLAST比对分析和进化树分析,结果证实了GbFOMT-13为银杏的FOMT部分序列。半定量RT-PCR结果表明,GbFOMT-13表达水平在银杏叶片的不同发育时期差异很大,其表达模式表现为春季幼叶>秋季老叶>夏季成熟叶,与类黄酮总量增长速率变化趋势相似。
- 张传丽陈鹏仲月明周长远梁国华沈丹红吴秋月
- 关键词：银杏叶片基因克隆
- 植物类黄酮O-甲基转移酶研究进展被引量：10
- 2012年
- 植物类黄酮O-甲基转移酶(flavonoid O-methyltransferase,FOMT)属转移酶类的甲基转移酶家族,是一类可催化S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)中的-CH3基团转移到类黄酮-OH上的蛋白质酶。甲基化是类黄酮物质最基本、最主要的修饰反应之一,不仅可以降低类黄酮的化学反应活性,而且增加了其脂溶性,赋予了类黄酮更多的生理生化特性。该文对近年来国内外有关类黄酮甲基化对植物中FOMT催化的生理生化代谢反应、FOMT的分类、FOMT酶蛋白结构域、生物学功能以及FOMT基因克隆与表达调控等方面的研究进展进行综述,为植物类黄酮更广泛、更深入的研究提供新的思路与途径。
- 张传丽仲月明沈丹红陈鹏
- 关键词：结构域基因克隆与表达生物学功能
- 银杏类黄酮糖基转移酶基因片段克隆与分析被引量：4
- 2012年
- 根据GenBank中其他植物的类黄酮糖基转移酶基因(UFGT)的保守区设计简并引物,采用RT-PCR技术从银杏中扩增出UFGT基因的部分保守序列,并利用3′-RACE PCR方法,得到了包括3′-末端在内的银杏UFGT基因片段,命名为GbUFGT-3。结果表明:该片段长度为1 064bp,其中3′-UTR长度为314bp、编码区长度为750bp,可编码249个氨基酸,该氨基酸序列具有完整的UFGT特征序列PSPG-box;BLASTp分析及系统进化树分析表明GbUFGT-3确为银杏UFGT基因的序列片段;半定量RT-PCR结果表明,GbUFGT-3是非诱导表达基因,在银杏叶片的整个发育期均有较高水平的表达,不同发育期表达量无差异。GbUFGT-3已被GenBank收录,登录序列号为JN640564.1。
- 张传丽陈鹏仲月明周长远沈丹红蒋菲
- 关键词：银杏基因克隆
