沈清武
- 作品数：12 被引量：39H指数：4
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 甘油诱导的骨骼肌损伤修复过程肌间脂形态学及肌分泌因子表达变化被引量：1
- 2015年
- 研究发现在甘油诱导的小鼠肌肉损伤修复过程中可能存在肌间脂的沉积,而肌肉分泌因子(myokines)作为特殊的蛋白参与了肌肉与脂肪的多种生理过程.为研究肌肉内注射甘油后对肌间脂生成的影响,以及注射后肌肉分泌因子在肌肉损伤后修复及肌间脂沉积过程中的表达趋势,本文选用三月龄C57BL/6品系小鼠,右腿胫骨前肌注射50%HBSS(V/V)甘油,左腿胫骨前肌注射等量的HBSS缓冲液作为对照.取注射后不同时期小鼠的胫骨前肌,冰冻切片技术检测肌肉再生及肌间脂沉积状况,实时定量PCR检测各分泌因子(IL-6、IL-15、MSTN、FNDC5、FGF21、myonectin和Insl6)的mRNA表达变化,酶联免疫分析(ELISA)检测分泌因子的蛋白表达变化.结果表明,在甘油诱导的肌肉损伤再生修复过程中存在肌间脂的生成,同时IL-6、Insl6、FGF21和IL-15的mRNA相对表达量在肌肉损伤修复过程中的前、中期变化明显,而MSTN和myonectin的mRNA相对表达量则在中、后期变化明显.IL-6、Insl6的蛋白表达量在前、中期明显升高.综上所述,甘油注射可引起肌肉损伤修复,并在这一过程中伴随着肌间脂的沉积,而肌肉分泌因子作为肌肉与脂肪之间的信息交换因子可能参与了肌肉损伤后的再生修复以及肌间脂的形成.
- 陈婷李仲文张艳艳冯芾杨公社沈清武
- 关键词：甘油肌损伤
- KLF15基因表达特征及其腺病毒超表达载体的构建被引量：3
- 2015年
- 【目的】分析锌指蛋白转录因子15(KLF15)在小鼠各组织及C2C12细胞分化过程中的表达情况,构建KLF15的腺病毒超表达载体。【方法】采集小鼠肝、脾、肾、脂肪、骨骼肌及培养的C2C12成肌细胞,提取不同分化时期(0,2,4d)的C2C12细胞及不同组织的RNA,检测KLF15的表达情况;过夜连接HindⅢ和XbaⅠ双酶切后的pAdTrack-CMV与KLF15真核表达质粒(pcDNA3.1-KLF15),获得pAdTrack-KLF15质粒。将该质粒经PmeⅠ线性化后转入BJ5183感受态细胞进行重组,构建pAdEasy-KLF15腺病毒超表达载体。将pAdEasy-KLF15质粒PacⅠ酶切线性化回收后,转染293A细胞进行包装、扩繁和纯化。将获得的KLF15重组腺病毒侵染C2C12细胞,实时荧光定量PCR检测其对KLF15表达的影响。【结果】KLF15在C2C12成肌细胞分化过程中表达显著升高,并在分化后期达最高值;KLF15在肝脏、肾脏和脂肪中的表达水平极显著高于骨骼肌和脾脏。成功获得了pAdEasy-KLF15腺病毒超表达载体,其侵染C2C12细胞后能显著上调KLF15mRNA的表达水平。【结论】KLF15基因在C2C12成肌细胞中高表达,并成功构建了KLF15重组腺病毒载体。
- 王杰陈婷沈清武
- 关键词：重组腺病毒
- 猪骨骼肌卫星细胞体外培养方法
- 本发明公开了一种猪骨骼肌卫星细胞(Skeletal Muscle Satellite Cell，SMSC)体外培养方法，包括以下步骤：样品采集；培养皿的预处理；骨骼肌纤维的移植；单根肌纤维的移除；SMSC的传代培养；SM...
- 杨公社刘月光史新娥沈清武杨秋梅高晓娟陈宗正
- 文献传递
- 慢病毒载体介导的RNA干扰Akt2表达抑制猪前体脂肪细胞分化被引量：7
- 2012年
- 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2(serine/threonine protein kinase2,Akt 2)是胰岛素信号通路的关键基因,与细胞生存和癌症的发生密切相关.但Akt2在前体脂肪细胞分化中的作用仍然不是十分清楚.本研究构建了慢病毒干扰载体pLentiH1-Akt2 shRNA 1,2,3及scrambled,经酶切和测序鉴定均正确;这4种干扰载体分别转染HEK293T细胞后,均获得有感染性的病毒颗粒并感染猪前体脂肪细胞.转染HEK293T细胞48 h后real-time PCR分析和转染72 h后Western印迹分析表明,Akt2 shRNA2和shRNA3介导的Akt2 mRNA和蛋白表达被显著下调(P<0.05),其中pLentiH1-Akt2 shRNA3介导的对Akt2 mRNA和蛋白的干扰效率均达到70%以上(P<0.01).进一步研究发现,猪前体脂肪细胞中Akt2被有效干扰后,细胞中脂滴明显减少并变小,且成脂标志基因PPARγ和aP2蛋白水平被显著下调.本研究结果表明,Akt2 knockdown可显著抑制猪前体脂肪细胞分化.
- 王平熊燕杨公社沈清武庞卫军
- 关键词：慢病毒载体前体脂肪细胞
- miR-143-3p促进C2C12成肌细胞分化被引量：5
- 2013年
- MicroRNAs(miRNAs)是一类小非编码RNA,近年研究发现其在骨骼肌发育调控中发挥重要作用.为探明miR-143-3p在C2C12成肌细胞分化中的调控作用,采用real-time PCR检测了miR-143-3p在小鼠各组织及C2C12成肌细胞分化过程中的表达;使用miR-143-3p的模拟物和特异性抑制剂分别处理细胞,采用real-time PCR和Western印迹分别检测成肌因子MyoG和成肌标志基因MyHC mRNA和蛋白水平的变化;用免疫荧光染色的方法观察肌管的形成.结果显示,miR-143-3p在小鼠各组织中均有表达,并且随着细胞分化表达量逐渐增加;C2C12成肌细胞过表达miR-143-3p,与对照组相比,成肌调控因子MyoG和成肌标志基因MyHC的mRNA和蛋白表达均显著升高,肌管数量明显增多;抑制剂处理结果显示,细胞分化被显著抑制.检测miR-143-3p对MyHC各亚型表达的影响发现,miR-143-3p表达的变化并不直接影响MyHC各亚型的表达.以上结果说明,miR-143-3p在骨骼肌和成肌细胞中均有表达,能够促进C2C12成肌细胞分化,但并不直接调控MyHCs的表达.
- 云青吴国芳魏欢庞卫军杨公社沈清武
- 关键词：微RNA成肌分化
- EGCG通过抑制Wnt/β-catenin信号通路调节猪骨骼肌卫星细胞的增殖和分化被引量：2
- 2012年
- 为了阐明Wnt/β-catenin信号通路在猪骨骼肌卫星细胞增殖分化中的作用,利用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)处理猪骨骼肌卫星细胞,采用MTT、流式细胞术、免疫荧光和Western印迹等方法检测了细胞增殖和分化情况.结果显示,与对照组相比,EGCG以时间、浓度依赖方式抑制猪骨骼肌卫星细胞的增殖.流式细胞术检测细胞周期结果表明,与对照组相比,经EGCG处理后,猪骨骼肌卫星细胞的G1期细胞比例上升,而G2和S期细胞比例下降,这说明细胞被阻滞在G1期,细胞的增殖受到抑制.免疫荧光检测分化过程中MyHC的表达,与对照组相比,EGCG促进猪骨骼肌卫星细胞的分化,并降低增殖标志基因MyoD以及细胞周期蛋白D的表达量,而提高了分化标志基因MyoG和MyHC的表达量.在猪骨骼肌卫星细胞增殖分化过程中,EGCG降低β-联蛋白的表达量,且核内的β-联蛋白明显减少.结果表明,EGCG通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制猪骨骼肌卫星细胞的增殖,促进其分化.
- 陈宗正仇杨吴国芳史新娥沈清武杨公社孙世铎
- 关键词：骨骼肌卫星细胞
- LiCl激活经典Wnt信号通路诱导猪骨骼肌卫星细胞向慢肌分化被引量：4
- 2012年
- Wnt/β-catenin信号通路参与调控细胞的增殖及分化,决定细胞的命运。LiCl通过抑制GSK-3β(glycogen synthetase kinase-3β)稳定细胞内β-catenin的表达。为研究Wnt/β-catenin信号通路在哺乳动物骨骼肌卫星细胞成肌分化过程中的作用。以原代培养猪骨骼肌卫星细胞为实验材料,将其培养在含有1%CEE和20%胎牛血清的GMEM培养液中,再用15 mmol/L LiCl诱导分化,并采用免疫荧光染色和Western blotting等方法检测经典Wnt信号通路中相关因子及成肌分化过程中细胞的蛋白表达。结果表明:LiCl处理猪骨骼肌卫星细胞后促进分化,p-GSK-3β、β-catenin、myosin及慢肌蛋白增加,p-β-catenin、GSK-3β及快肌蛋白减少,并且核内源性β-catenin增多。结果提示,激活Wnt/β-catenin信号通路促进骨骼肌卫星细胞成肌分化,并且诱导其向慢肌分化。
- 杨秋梅刘月光沈清武史新娥杨公社
- 关键词：卫星细胞WNT/Β-CATENIN分化LICL
- 猪骨骼肌单根肌纤维分离、培养方法的建立
- 骨骼肌由肌纤维组成，动物出生后，肌纤维数量一般保持恒定不变，肌肉生长主要依赖于肌纤维体积的增大。骨骼肌卫星细胞是位于肌纤维膜与基膜之间的肌源性干细胞，通常以静息状态存在，当受到外界刺激(生长、远动、损伤等)时，就会被激活...
- 刘月光史新娥沈清武杨秋梅陈宗正高晓娟杨公社
- 关键词：骨骼肌纤维卫星细胞
- Wnt/β—catenin信号通路相关基因及MyHCs在猪骨骼肌发育中的表达规律
- 猪生后骨骼肌纤维.根据其代谢和收缩功能分为慢速氧化型、快速氧化型、快速酵解型和中间型四种，分别由不同的肌球蛋白重链(MyHC)异构体MyHCI、MyHCIIa、MyHCIIb和MyHCIIx表示。猪骨骼肌纤维数目在出生前...
- 杨秋梅史新娥沈清武刘月光高晓娟陈宗正杨公社
- 关键词：WNT/Β-CATENIN肌纤维类型信号通路
- Wnt/β-catenin信号通路相关基因及MyHCs在猪骨骼肌发育中的表达规律被引量：4
- 2011年
- 为研究Wnt/β-catenin信号通路对猪骨骼肌纤维类型发育的影响,并探讨其潜在的作用机制。本研究以1日龄、1周龄、2周龄、1月龄、2月龄和6月龄大白猪背最长肌组织为研究材料,利用Real-time PCR、Westernblot、冰冻切片免疫组化等方法,研究Wnt/β-catenin信号通路相关基因及MyHCs在猪骨骼肌发育过程中的表达规律。Real-time PCR结果显示:MyHC-Ⅰ、GSK-3β、β-catenin和Fz3mRNA随着个体日龄增加表达量下降,My-HC-Ⅱb mRNA表达逐渐升高,MyHC-Ⅱa mRNA表达量在1日龄～2周龄阶段升高后又降低,MyHC-Ⅱx mRNA表达量变化不显著;免疫组化结果显示:快肌蛋白呈棕色,慢肌蛋白呈灰白色,在出生1日龄～1周龄时,快、慢肌呈弥散交叉分布,到2周龄时慢肌簇被快肌包被在肌束中间,随着年龄增加,慢肌簇逐渐减少。Western blot检测结果显示:慢肌蛋白从出生到2周龄显著下降,在2周龄～2月龄阶段下降不明显,生长到6月龄时又显著降低;快肌蛋白随日龄增加而增加,在2周龄～6月龄期间增加极显著;β-catenin、GSK-3β蛋白表达量与其mRNA表达一致,而p-β-catenin在2周龄时显著高于1日龄,且随后持续上调;Tyr216 p-GSK-3β蛋白表达量早期生长下调极显著;Ser9p-GSK-3β蛋白表达量则是在后期生长显著降低。上述基因表达变化规律揭示,Wnt/β-catenin信号通路相关基因β-catenin、Fz3、GSK-3β与MyHC-Ⅰ表达呈正相关,与MyHC-Ⅱ表达呈负相关,其在骨骼肌生长过程中对肌纤维类型组成具有重要影响。
- 杨秋梅史新娥沈清武刘月光高晓娟陈宗正杨公社
- 关键词：WNT/Β-CATENIN信号通路肌纤维类型背最长肌发育
