熊丁杰
- 作品数：13 被引量：34H指数：4
- 供职机构：四川农业大学更多>>
- 发文基金：“十一五”国家科技支撑计划长江学者和创新团队发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪圆环病毒2型ORF2基因插入猪细小病毒VP2基因3′端对病毒样颗粒形成的影响被引量：3
- 2009年
- 以猪细小病毒(PPV)四川分离株SC-1的VP2基因3′端为靶点,在第1215和1216位之间插入长约700 bp的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因片段,将重组后的PPV VP2-PCV2 ORF2克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,构建了重组质粒pEGFP.VO;经酶切和PCR鉴定后,采用脂质体介导法将重组质粒pEGFP.VO转染COS-7细胞,应用倒置荧光显微镜、电镜、免疫荧光以及生物信息学技术对表达产物进行观察分析。结果显示,重组质粒pEGFP.VO在COS-7细胞中得到表达,但在电镜下没有观察到病毒样颗粒。通过对PPV衣壳蛋白的三维结构分析及免疫荧光检测发现,PCV2 ORF2基因的插入位点位于PPVVP2基因的3′端,相应表达产物则位于VP2蛋白多肽的C端,且被其包裹在内,这可能影响了病毒样颗粒的形成,表明,PPV VP2基因3′端不适合外源基因插入构建重组病毒样颗粒。
- 徐志文郭万柱蒋清蓉朱玲熊丁杰王印徐凯王小玉
- 关键词：猪细小病毒VP2基因插入位点病毒样颗粒
- 猪细小病毒VLPs供外源蛋白插入的候选位点发现及其重组PCV2-ORF2的病毒样颗粒构建
- 试验中先将PPV SC-1株VP2基因扩增产物克隆到pMD18-T载体构建质粒pMD-VP2;设计两对引物（分别引入HindⅢ和SacⅠ两个酶切位点）扩增PCV2 SC株ORF2基因,构建了pMD-ORF2.A和pMD-...
- 朱玲郭万柱蒋清蓉徐志文熊丁杰张博王印赵玲
- 关键词：猪细小病毒病毒样颗粒
- 文献传递
- PCV2 ORF2 B细胞表位与PPV VP2真核表达质粒的构建及其免疫原性被引量：3
- 2012年
- 为了研究猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2B细胞表位与猪细小病毒(PPV)VP2重组真核表达质粒的免疫原性,将PCV2ORF2的B细胞表位基因(141～257bp)重组到PPV SC-1株VP2基因的N端,构建了真核表达质粒pCI-VP2.ORF2B。用脂质体转染法将重组质粒pCI-VP2.ORF2B转染至Vero细胞中,利用间接免疫荧光法检测其在体外的表达情况。将重组质粒免疫小鼠,并设猪细小病毒灭活疫苗、猪圆环病毒亚单位疫苗和空载体对照组,采用MTT比色法、流式细胞术和ELISA法分别对免疫小鼠脾淋巴细胞的转化功能,外周血CD4+和CD8+淋巴细胞比例,PCV2和PPV IgG抗体效价进行了检测。结果表明,转染Vero细胞后第48小时用间接免疫荧光法能在荧光显微镜下观察到绿色荧光,检测到特异性蛋白的表达;pCI-VP2.ORF2B免疫组脾淋巴细胞从第7天开始对ConA有明显反应,显著高于对照组;CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞的数量高于或显著高于对照组;在免疫后第14天检测到PPV/PCV2IgG抗体。提示pCI-VP2.ORF2B能够有效诱导机体产生细胞免疫和体液免疫反应。
- 梅淼陈燕凌朱玲熊丁杰郭万柱王颖旺吴云飞徐志文
- 关键词：VP2基因ORF2基因B细胞表位
- 不同剂量的猪瘟活疫苗单次免疫效果评价及疫苗在体内的残留研究
- 引言猪瘟(Classical Swine Fever,CSF)每年给我国造成的经济损失达数十亿。我国对CSF的控制策略主要是免疫,但猪瘟疫苗如何免疫,免疫后如何检测等问题,成了规模化猪场猪瘟净化工作中的难题。本研究对不同...
- 范学政徐璐熊丁杰郑然王琴
- 文献传递
- 不同剂量的猪瘟活疫苗单次免疫的免疫效力及疫苗残留检测
- 用1200RID、6000 RID和24 000 RID三种不同剂量的猪瘟活疫苗单次免疫9头30日龄的断奶仔猪,检测试验用猪抗体的消长和疫苗毒核酸在猪体内的存在时间,并用6头猪进行攻毒保护试验。结果表明:不同免疫剂量的试...
- 熊丁杰范学政徐璐王琴徐志文郭万柱刘俊陈蕾汤波
- 关键词：免疫剂量抗体水平
- 文献传递
- 猪瘟抗体阻断ELISA检测方法的建立和对猪瘟活疫苗免疫效果的评价
- 本研究将含有编码猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2基因的重组杆状病毒接种于SF9昆虫细胞中,经复壮和悬浮培养后收集细胞上清,过滤后用镍柱做亲和层析纯化E2蛋白,经SDS-PAGE鉴定,在约53Kda处有一特异表达的蛋白带,同猪瘟病毒...
- 熊丁杰
- 关键词：猪瘟抗体阻断ELISA
- 文献传递
- PRRSV感染致断奶仔猪肺脏和外周免疫器官的病理损伤被引量：4
- 2011年
- 用PRRSV ATCC VR-2332株感染8头28日龄仔猪,同时设立2头健康对照猪。PRRSV单独感染猪分别于感染后7,17,25 d各剖杀2,3,3头,对照组于17,25d各剖杀1头。剖杀后采集脾脏、肺脏和全身主要淋巴结(颌下淋巴结、肺门淋巴结、腹股沟淋巴结和肠系膜淋巴结)等免疫器官,用甲醛溶液固定,组织石蜡切片以观察显微病理变化。试验组猪的抗体和抗原检测结果均表明,感染后7 d血清PRRSV抗体和免疫器官组织PRRSV抗原部分呈阳性;剖检和石蜡切片结果均显示,试验猪于攻毒后,随着病程的发展,发生了不同程度的间质性肺炎及相应的显微病变,PRRSV单独感染能引起免疫器官以淋巴细胞及巨噬细胞变性坏死为特征的急性炎症变化,造成免疫损伤,进而引起免疫抑制。
- 熊丁杰徐志文梅淼余庆彭西刘彬尹雪琴刘万铃
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒仔猪免疫器官病理损伤
- 不同剂量的猪瘟活疫苗单次免疫效果评价及疫苗存留试验被引量：10
- 2011年
- 用1 200 RID、6 000 RID和24 000 RID 3种不同剂量的猪瘟活疫苗单次免疫9头30日龄的断奶仔猪,检测试验猪的抗体消长和疫苗毒核酸在猪体内的存留时间,并用6头猪进行攻毒保护试验。结果表明:不同免疫剂量的试验猪其抗体水平的动态变化没有显著差异,免疫后21 d试验猪的猪瘟抗体均成阳性,63 d后至578 d猪瘟抗体阻断率仍然高于85%,应用荧光定量RT-PCR技术检测,猪瘟疫苗毒核酸在猪血液和扁桃体中的检出时间分别达28 d和42 d;免疫后370 d进行猪瘟强毒攻击后,免疫猪没有出现明显的临床症状,存活且不带毒。本研究证实,没有其他疫病和母源抗体的仔猪单次接种合理剂量的猪瘟活疫苗就能产生坚强的保护力,提出加强种猪场各种病原监测,淘汰病原阳性种猪,净化种猪群对提高猪瘟疫苗免疫效果,最终控制猪瘟具有重要意义。
- 熊丁杰范学政徐璐王琴徐志文郭万柱周远成刘俊陈蕾汤波
- 关键词：猪瘟疫苗
- 不同剂量的猪瘟活疫苗单次免疫效果评价及疫苗在体内的残留研究
- 本研究对不同剂量的猪瘟活疫苗单次免疫后试验猪的猪瘟抗体变化和弱毒疫苗核酸的存留时间进行了研究，以图探讨规模化猪场在免疫状态下如何检测，为规模化猪场猪瘟控制提供依据。
- 范学政徐璐熊熊丁杰郑然王琴
- 关键词：猪瘟活疫苗免疫效果疫病控制规模化猪场
- 猪细小病毒VLPs供外源蛋白插入的候选位点发现及其重组PCV2-ORF2的病毒样颗粒构建
- 试验中先将PPV SC-1株VP2基因扩增产物克隆到pMD18-T载体构建质粒pMD-VP2；设计两对引物(分别引入HindⅢ和SacⅠ两个酶切位点)扩增PCV2 SC株ORF2基因,构建了pMD-ORF2.A和pMD-...
- Zhu-ling朱玲郭万柱Guo-wanzhuJiang-qingrong蒋清蓉Xu-zhiwen徐志文Xiong-dingjie熊丁杰Zhang-bo张博王印Wang-yinZhao-ling赵玲
- 关键词：猪细小病毒病毒样颗粒
