王志宇
- 作品数：17 被引量：16H指数：2
- 供职机构：山东省医药生物技术研究中心更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金山东省医药卫生科技发展计划项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 类风湿性关节炎关节滑液标志物及其应用
- 本发明公开了一种类风湿性关节炎关节滑液标志物，由肽基精氨酸脱亚胺酶4(PADI4)组成。本发明还公开了所述类风湿性关节炎关节液标志物在制备检测类风湿性关节炎的临床诊断试剂中的应用。利用本发明提出的类风湿性关节炎特异性抗原...
- 常晓天韩金祥朱波朱有名吴坚美闫新锋张云忠赵燕常建芳王志宇
- 文献传递
- 转录组分析棒状链霉菌F613-1高产克拉维酸的分子基础被引量：2
- 2017年
- 旨在探究S.clavuligerus工业菌株高产克拉维酸(CA)的分子基础。采用转录组高通量测序,对比标准菌株和高产CA的工业菌株F613-1之间的基因转录水平差异,结合菌株表型差异进行综合分析。结果表型比较显示,F613-1在固体培养基中生长速度、气生菌丝形态、孢子形成等方面与标准菌株存在差异。液体摇瓶培养中,菌体生长速度无明显变化,但F613-1的糖消耗量显著降低,同时CA产量比ATCC27064提高约11.7倍。转录组分析显示,F613-1中CA基因簇及其途径特异性调控基因的表达量显著升高,其副产物全霉素基因簇的表达量显著下降;CA合成原料精氨酸和3-磷酸甘油醛代谢相关基因的转录水平发生显著变化,精氨酸合成代谢基因上调,而3-磷酸甘油醛分解代谢基因下调;ABC转运系统中80多个基因的转录水平也发生明显变化,其中42个显著上调,38个显著下调。工业生产菌株高产克拉维酸的主要原因是CA基因簇及其调控基因表达量的升高、相关副产物基因簇的沉默及CA合成原料精氨酸和3-磷酸甘油醛的积累。
- 覃荣活付加芳宗工理王志宇曹广祥
- 关键词：棒状链霉菌转录组克拉维酸
- 重组人骨靶向干扰素γ-1b在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2019年
- 目的建立人骨靶向干扰素γ-1b的高效原核表达体系。方法从Drug Bank数据库下载人干扰素γ-1b氨基酸序列,在羧基端加上10个天冬氨酸标签作为骨靶向分子。采用大肠杆菌偏爱密码子,DNA Star软件分析获得骨靶向性干扰素γ-1b的基因序列。人工合成基因序列并克隆入pET3c质粒表达载体。将上述pET3c-rhIFNγ-1b-D10重组表达载体转入大肠杆菌BL21,筛选高效表达菌株。分离包涵体,8mol/L尿素溶解,利用镍柱亲和层析纯化重组蛋白。Western blot检测目的蛋白的特异性表达。结果测序结果显示所克隆的骨靶向rhIFNγ-1b基因序列正确,筛选出高效表达菌株。经SDS-PAGE显示在相对分子质量19KD处出现特异的目的蛋白表达带,表达量约占全菌蛋白的30%。表达产物以包涵体形式存在,8mol/L尿素变性后经镍柱亲和层析纯化,纯度大于90%,浓度为0.8mg/mL。Western检测显示在19KD处出现特异性目的条带。结论成功在大肠杆菌中表达了人骨靶向干扰素γ-1b,为研究其生物学活性及用于骨硬化症的治疗奠定基础。
- 王志宇曹广祥曹广祥宗工理付加芳王世立
- 关键词：原核表达纯化骨硬化症
- 人碱性磷酸酶糖蛋白的癌细胞高效表达系统及其应用
- 本发明公开了一种人骨肉瘤细胞系MG‑63在外源表达人碱性磷酸酶糖蛋白中的应用，以及rhALP的外源表达方法，包括如下步骤：(1)构建含有rhALP的重组质粒；(2)将重组质粒整合至人骨肉瘤MG‑63细胞内，获得能够表达r...
- 曹广祥付加芳马军霞王志宇宗工理王世立
- 重组人骨形态发生蛋白-7抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的利用重组人骨形态发生蛋白-7（rhBMP-7）制备抗体，为BMP-7临床应用奠定基础。方法采用皮内多点注射法将rhBMP-7免疫新西兰大白兔4次，每次间隔2周。免疫后颈动脉插管取血。ELISA法测定抗血清效价，蛋白免疫印迹技术确定抗血清特异性、最佳稀释度、灵敏度。结果抗血清效价为1：640000；通过从小鼠骨组织及肾脏组织中提取的BMP-7证实抗体有很好的特异性，抗血清的最佳稀释度为1：5000-1：50000，灵敏度为1～100ng。结论成功制备了rhBMP-7抗体，该抗体具有很高的特异性及灵敏度。
- 安新玲王志宇刘肖帅葛鲁娜朱有名韩金祥王世立
- 关键词：骨形态发生蛋白-7抗体效价
- 丙型肝炎病毒核心蛋白基因在毕赤酵母中克隆与分析
- 2007年
- 目的:克隆丙型肝炎病毒核心蛋白基因及其上游DNA序列,为此基因的表达研究作准备。方法:用反转录和PCR方法从HCV的总RNA中扩增得到核心蛋白基因及其上游DNA序列,连接到pMD18-T载体上,用限制性内切酶切下目的基因,插入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建成重组质粒,测序证明正确后,再将目的基因在毕赤酵母中进行克隆,鉴定。结果:重组质粒转化毕赤酵母后,经PCR鉴定,证明形成了目的基因的克隆。结论:应用毕赤酵母作为受体菌,pPIC9K为载体,成功克隆了HCV核心蛋白基因。
- 邵金辉胡洁朱有名吴围屏吴坚美王志宇
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白聚合酶链反应克隆巴斯德毕赤酵母
- 辣根过氧化物酶基因与血管内皮生长因子基因的连接及克隆被引量：1
- 2007年
- 目的连接辣根过氧化物酶(HRP)基因与血管内皮生长因子(VEGF)基因并进行克隆。方法用RT-PCR法从人肺肿瘤组织获得VEGF165基因,从含有HRPC3基因的质粒pMDC3EX中扩增得到HRPC3基因,将两种目的基因通过连接肽相应DNA序列进行连接,再以带有特定酶切位点的引物进行PCR,然后将目的基因插入到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建重组质粒,在大肠杆菌中克隆,并进行序列分析。再将重组质粒转入毕赤酵母中,筛选阳性克隆,提取基因组DNA,采用PCR法鉴定。结果用PCR扩增的VEGF165基因和HRPC3基因片段与预期相符,将二者连接后,克隆到pPIC9K质粒中,经DNA测序证明重组基因与公开发表的相同DNA同源性为97.3%。经PCR鉴定,目的基因已转入毕赤酵母中。结论已成功将辣根过氧化物酶基因与血管内皮生长因子基因连接并克隆。
- 邵金辉潘继红朱有名吴围屏吴坚美王志宇
- 关键词：辣根过氧化物酶血管内皮生长因子克隆毕赤酵母
- PADI4在类风湿关节炎发病中的作用被引量：1
- 2007年
- 类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种病因尚未明了的自身免疫病，以慢性、多滑膜关节炎和关节外病变为主要临床表现。该病多发于手、腕、足等小关节，对称分布，反复发作。早期RA关节有红、肿、热、痛和功能障碍，晚期RA关节可出现不同程度的僵硬畸形，并伴有骨和骨骼肌的萎缩,极易致残。除此之外，RA在临床上还表现出发热、疲乏无力、心包炎、皮下结节、胸膜炎、动脉炎以及周围神经病变等。
- 常建芳常晓天上官玉梦韩金祥朱有名张云忠赵燕吴坚美王志宇朱波
- 关键词：类风湿关节炎发病周围神经病变自身免疫病关节外病变
- 一种骨肉瘤细胞的无血清培养基及其制备方法
- 本发明公开了一种骨肉瘤细胞的无血清培养基，由碳水化合物、氨基酸、核苷酸、维生素、无机盐、微量元素和添加物组成；所述添加物是由终浓度为10‑100mg/L透明质酸、1‑10mg/L吐温‑80、0.1‑10mg/L绿原酸和0...
- 曹广祥付加芳王志宇钟传青宗工理
- 一种骨肉瘤细胞的无血清培养基及其制备方法
- 本发明公开了一种骨肉瘤细胞的无血清培养基，由碳水化合物、氨基酸、核苷酸、维生素、无机盐、微量元素和添加物组成；所述添加物是由终浓度为10‑100mg/L透明质酸、1‑10mg/L吐温‑80、0.1‑10mg/L绿原酸和0...
- 曹广祥付加芳王志宇钟传青宗工理
- 文献传递
