王春花
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：同济大学附属同济医院更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 野生型和突变型小鼠动力蛋白激活蛋白1真核表达载体的构建及其在小鼠足细胞中的表达
- 2012年
- 目的构建野生型和突变型小鼠动力蛋白激活蛋白1(dynactin-1)真核表达载体,并观察其在小鼠足细胞中表达。方法以总RNA反转录合成的cDNA为模板,通过PCR扩增得到小鼠dynactin-1的全长cDNA,将该片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)-FLAG和pEGFP-N1;利用部位特异性突变插入方法构建突变型表达载体,经酶切和测序鉴定;各载体转染小鼠足细胞MPC5后,用蛋白质印迹分析法和免疫荧光显微镜法检测dynactin-1蛋白表达。结果 PCR扩增得到大小为3.8kb的小鼠dynactin-1片段,连接到载体后,酶切鉴定电泳结果分别显示pcDNA3.1(+)-FLAG(5.4kb)、pEGFP-N1(4.7kb)以及小鼠dynactin-1(3.8kb)片段,测序分析结果显示克隆的野生型和突变型小鼠dynactin-1序列与数据库序列相同;蛋白质印迹分析法检测到重组dynactin-1的蛋白条带;免疫荧光显微镜观察到dynactin-1主要表达在小鼠足细胞的细胞质。结论成功构建了野生型和突变型小鼠dynactin-1真核表达载体,并在足细胞中表达,为进一步开展细胞生物学研究奠定了实验基础。
- 王春花李林傅鹏李金花原爱红孙向华蒋晓峰余晨
- 关键词：真核表达载体足细胞
- 来氟米特治疗顽固性局灶节段性肾小球硬化肾病综合征患者的研究被引量：4
- 2013年
- 局灶节段性肾小球硬化（FSGS）是成人原发性肾病综合征中的常见病理类型，基本治疗药物为糖皮质激素和／或细胞毒性药物。但单纯使用激素疗效极差，70％以上患者经足量激素治疗8周无效或依赖激素，或频繁复发，且可出现肾功能的减退，称为难治性肾病综合征。
- 刘建琼朱小利原爱红王春花张昆傅鹏
- 关键词：局灶节段性肾小球硬化原发性肾病综合征来氟米特顽固性难治性肾病综合征
- 透析患者脑钠肽检测的临床价值
- 2013年
- 目的观察脑钠肽(BNP)与维持性血液透析患者低血压的发生率、不同原发病及透析时间的关系,探讨BNP在维持性血液透析评估中的临床应用价值。方法选择维持性血液透析6个月以上的患者,连续监测血压、心率等血流动力学指标,每月检测末次透析后BNP,共观察半年。结果 BNP水平与透析患者低血压发生率呈正相关,随着BNP水平升高,维持性血液透析中低血压发生率显著升高(P<0.05)。BNP水平与透析时间也呈正相关性,透析时间越长,BNP也呈上升趋势(P<0.05)。原发病中,糖尿病组患者的BNP水平显著高于其他各组,而其他各组间BNP水平比较无显著性差异。结论 BNP水平与维持性透析低血压发生率、透析时间呈正相关,也与原发病有关,测定血清BNP水平有助于临床评估,具有重要的临床应用价值。
- 原理王春花原爱红
- 关键词：脑钠肽血液透析低血压糖尿病
- 小鼠动力蛋白激活蛋白1-shRNA慢病毒载体的构建及在足细胞中的敲低效应
- 2012年
- 目的构建表达小鼠动力蛋白激活蛋白1(dynactin-1)特异性shRNA的慢病毒载体,并检测其对小鼠足细胞dynactin-1的敲低效果。方法针对小鼠dynactin-1mRNA序列,设计合成3种shRNA,克隆到入门质粒pENTR/pTER中,再利用LR反应重组到pLenti X2Puro慢病毒目的质粒,经过酶切测序鉴定后,将慢病毒质粒和包装质粒共转染293FT细胞,包装得到病毒颗粒。各组shRNA病毒载体转染小鼠足细胞后,用嘌呤霉素抗性筛选细胞,利用蛋白质印迹法检测各组细胞中dynactin-1蛋白的表达水平。结果构建的各组shRNA入门质粒和慢病毒载体经酶切及测序鉴定正确;慢病毒载体与慢病毒包装质粒共转染293FT细胞,制备病毒颗粒,转染小鼠足细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定表达shRNA的足细胞系;蛋白质印迹检测结果表明转染dynactin-1-shRNA组的dynactin-1蛋白表达降低。结论构建的小鼠dynactin-1-shRNA慢病毒载体能有效降低小鼠足细胞中dynactin-1蛋白表达,为进一步研究dynactin-1在足细胞中的功能奠定了基础。
- 傅鹏原理李金花王春花李林原爱红马骏
- 关键词：RNA干扰慢病毒足细胞
