睢珂 作品数:10 被引量:40 H指数:3 供职机构: 中国农业科学院农产品加工研究所 更多>> 发文基金: “十一五”国家科技支撑计划 国家科技支撑计划 公益性行业(农业)科研专项 更多>> 相关领域: 轻工技术与工程 理学 化学工程 生物学 更多>>
食品辐照标志物DiHT的人工抗原合成及鉴定 被引量:2 2012年 以二氢脱氧胸腺嘧啶(DiHT)为初始反应物,应用琥珀酸酐法合成二氢脱氧胸腺嘧啶的衍生物,即半抗原DiHT-COOH,经薄层色谱(TLC)和核磁共振波谱(NMR)对其进行鉴定;采用混合酸酐法与活化酯法分别将半抗原与载体蛋白BSA、OVA进行偶联,制备二氢脱氧胸腺嘧啶的人工抗原和包被原,通过紫外扫描、SDS-PAGE凝胶电泳方法对其进行鉴定,偶联比分别为9.8∶1和12∶1。人工抗原偶联成功后免疫BALB/c小鼠制备多抗血清,间接非竞争ELISA方法检测效价达1∶2.56×104,表明人工抗原合成成功。 王志伟 潘家荣 李淑荣 王志东 高美须 李秉超 睢珂 王磊关键词:半抗原 人工抗原 酶联免疫 Pen a 1表位抗原多克隆抗体的制备及鉴定 被引量:8 2013年 【目的】建立一种识别、检测致敏蛋白的新方法。【方法】Pen a 1为虾中主要的致敏蛋白,从其5个主要IgE结合区中选择一段具有代表性的(85—105位)含21个氨基酸的多肽序列,进行化学合成,将多肽分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,制得免疫原和包被原,免疫原免疫新西兰纯种白兔得到多克隆抗体。以刀额新对虾蛋白、卵清蛋白、花生蛋白和牛奶蛋白为样品,免疫印迹鉴定多克隆抗体对刀额新对虾中Pen a 1蛋白的特异性。【结果】经Ellman试剂测定多肽与KLH、BSA的偶联比分别为12﹕1和8﹕1。间接非竞争ELISA测定多克隆抗体的效价达1.024×106,间接竞争ELISA(icELISA)测定该多克隆抗体对多肽的IC50和IC10分别为0.4324μg.mL-1和0.0004μg.mL-1,表明多克隆抗体对多肽具有较强的灵敏性。免疫印迹试验结果表明,此多克隆抗体仅可识别刀额新对虾蛋白中的Pen a 1蛋白,对所选其它物种蛋白无响应。【结论】通过人工合成多肽制备的抗体可用于目标致敏蛋白质的检测分析,该方法快捷灵敏,且具有较高的特异性。 赵杰 高美须 潘家荣 王志东 兰丽平 睢珂 许舒婷 刘超超 牟慧关键词:多克隆抗体 间接竞争ELISA 免疫印迹 醚型菊酯类农药通用抗原的合成及鉴定 被引量:5 2012年 以2-(4-乙氧基苯基)-2-甲基丙醇和氯乙酸钠为原料,合成了醚型菊酯类农药通用半抗原HaptenⅠ,经1H-NMR及13C-NMR鉴定后,分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联,制得免疫原和包被原,经紫外光谱分析法计算得其偶联比分别为14∶1和35∶1,说明人工抗原合成成功。免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,效价达1.28×105,用半抗原经间接竞争ELISA检测人工抗原的免疫原性,IC50和IC10值分别为0.2653和0.0012 mg/L,证明人工抗原具有较好的免疫原性。交叉反应表明此多克隆抗体具有良好的特异性。 睢珂 潘家荣 王磊 王志伟 赵杰 郑月明 诸葛洁婧 潘文斌关键词:酶联免疫吸附法 气相色谱-质谱大体积进样法测定果汁中90种农药残留 被引量:24 2015年 采用程序升温大体积进样技术(PTV-LVI)及Qu ECh ERS方法建立了果汁中90种农药多残留的气相色谱-质谱分析方法。样品用乙腈提取,经Mg SO4和Na Cl除水后,以PSA和C18柱净化,用大体积进样技术的气相色谱-质谱进行测定。PTV-LVI优化参数为:初始温度100℃、分流出口吹扫流量50 m L/min、分流排空时间1.5 min、进样速度2μL/s。结果表明:90种农药在0.05~10μg/L的范围内呈良好线性关系,相关系数(R2)为0.9879~0.9999,相对标准偏差为3.4%~15.6%,平均回收率在70.3%~119.2%之间。90种农药的检出限均低于10μg/kg,定量限低于20μg/kg。本方法快速、简便、灵敏度高、重现性好,适用于果汁中的多种类农药残留分析。 张弛 宋莹 潘家荣 焦必宁 睢珂 梁世正 冯涛 傅丽丽关键词:果汁 农药多残留 大体积进样 气相色谱-质谱 QUECHERS 苄嘧磺隆人工抗原的合成与鉴定 2012年 以2-甲酸甲酯苄磺酰胺和琥珀酸酐为原料合成半抗原(hapten),经薄层层析和1H-NMR鉴定后,采用混合酸酐法分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联获得免疫原(hapten-BSA)和包被原(hapten-OVA),紫外光谱分析法计算得其偶联比分别为8:1和13:1,初步说明具有较好免疫原性。通过动物免疫实验获得了效价达1:32000的阳性血清,采用间接酶联免疫吸附检测(ELISA)法检测抗体的IC50和IC10值为0.5032mg/L和0.0024mg/L,表明人工抗原合成成功。 王磊 睢珂 王志伟 潘家荣 赵杰 郑月明关键词:苄嘧磺隆 醚型菊酯类农药单克隆抗体的制备及初步应用 拟除虫菊酯类农药是一种重要的杀虫剂,但是它对鱼、虾等具有高毒性,并且抗性问题严重。醚型菊酯类农药是近年来农药工作者的研发重点,它们的分子具有醚型结构,秉承了拟除虫菊酯类农药的高效、广谱杀虫性能,并且对鱼等温血动物低毒,农... 睢珂关键词:单克隆抗体 酶联免疫吸附法 醚型菊酯类农药通用半抗原,抗原、合成方法及其应用 本发明“醚型菊酯类农药通用半抗原,抗原、合成方法及其应用”,涉及生物检测技术。本发明的抗原是在具有如下结构的本发明合成的半抗原分子<Image file="DDA0000113540160000011.GIF" he="... 睢珂 王磊 王志伟 潘家荣 赵杰 郑月明文献传递 醚型菊酯类农药通用半抗原,抗原、合成方法及其应用 本发明“醚型菊酯类农药通用半抗原,抗原、合成方法及其应用”,涉及生物检测技术。本发明的抗原是在具有如下结构的本发明合成的半抗原分子<Image file="DDA0000113540160000011.GIF" he="... 睢珂 王磊 王志伟 潘家荣 赵杰 郑月明文献传递 利用Pen a 1表位抗体亲和纯化目标蛋白的研究 被引量:2 2013年 以虾致敏蛋白Pen a 1(Tropomyosin)抗原表位为研究对象,建立了利用Pena 1表位抗体亲和纯化致敏蛋白的新方法.Fmoc法合成致敏Pen a 1蛋白的C端含有3个抗原表位的第247 ~284位氨基酸对应的多肽片段,应用马来酰亚胺法将多肽与KLH(匙孔血蓝蛋白)、BSA(牛血清白蛋白)偶联制备人工免疫抗原(Pep-tide-KLH)和人工包被抗原(Peptide-BSA),免疫人工抗原免疫纯种新西兰白兔,获得多克隆抗血清,抗血清经辛酸-硫酸铵及特异性血清纯化预装柱(HiTrap rProtein A FF)纯化后与溴化氰活化琼脂糖凝4B(CNBr-Activated Sepharose 4B)进行偶联.ELISA(酶联免疫吸附试验)测定该多克隆抗体效价为2.05×106,多肽对抗体的IC50(50%抑制浓度)为0.21 mg/L,交叉试验表明该抗体与虾中非Pena 1蛋白无交叉反应性;Bradford法测定CNBr-Activated Sepharose 4B与抗体的偶联率为90.76%.间接竞争ELISA测定1 mL偶联介质的吸附容量为2.84 mg Pen a 1,免疫亲和柱的加标回收率为89.6%~93.6%,亲和柱使用寿命为4次. 赵杰 高美须 潘家荣 兰丽平 睢珂 牟慧 许舒婷关键词:PEN 免疫亲和柱 ELISA 苄嘧磺隆通用半抗原、人工抗原及其制备方法与应用 本发明属于免疫检测及生物化工技术领域,涉及苄嘧磺隆通用半抗原、人工抗原及其制备方法与应用。本发明提供的苄嘧磺隆通用半抗原制备得到的人工抗原免疫得到的抗体能够光谱的识别具有上述人工半抗原结构的苄嘧磺隆类农药分子,使得采用该... 王磊 睢珂 王志伟 潘家荣 赵杰 郑月明文献传递