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石慧
作品数:
2
被引量:1
H指数:1
供职机构:
广州医学院第二附属医院
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发文基金:
广东省科技计划工业攻关项目
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
刘启才
广州医学院实验医学研究中心
陈德基
广州医学院第二附属医院
陈盛强
广州医学院第二附属医院
严小玲
广州医学院第二附属医院
李敏雄
广州医学院第二附属医院
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石慧
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陈盛强
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重组人肝细胞生长因子-NK4腺病毒的制备及初步鉴定
2006年
目的制备表达人肝细胞生长因子(HGF)-NK4蛋白的复制缺陷型重组腺病毒。方法酶切pcDNA3-hNK4质粒获得NK4基因编码区序列并克隆至穿梭载体构建重组pAdTrack-CMV-NK4载体,线性化后与pAdEasy-1共转化B J5183,通过同源重组得到重组pAd-NK4病毒载体。将重组腺病毒载体转染HEK293包装细胞制备重组腺病毒,用病毒悬液感染人肝癌细胞株HepG2。RT-PCR法检测感染肿瘤细胞中NK4 mRNA表达。结果酶切鉴定得到阳性pAd-NK4重组腺病毒载体,该载体能有效转染HEK293细胞并在细胞内成功包装。在转染2 d后能观察到绿色荧光蛋白(GFP)表达。制备的Ad-NK4在体外能有效感染HepG2细胞并获得NK4基因高水平表达。结论成功构建了NK4基因的重组腺病毒载体并制备重组腺病毒颗粒,为进一步研究NK4基因的功能及应用NK4进行基因治疗提供实验依据。
石慧
陈德基
刘启才
关键词:
复制缺陷型腺病毒
同源重组
NK4基因
基因治疗
共表达人B7—1和HGF/NK4基因的重组腺病毒的制备及初步鉴定
被引量:1
2007年
目的构建能同时表达B7—1和HGF/NK4基因的重组腺病毒载体,同时制备相应的复制缺陷型重组腺病毒,检测其在喉癌细胞中的表达。方法构建以串联方式携带人B7-1和HGF/NK4基因的重组穿梭载体pAdtrack-NK4-B7-1。Pme I线性化后与腺病毒载体pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,通过同源重组得到重组腺病毒载体pAd—NK4-B7—1。将重组腺病毒载体转染HEK293包装细胞制备重组腺病毒,应用病毒悬液感染人喉癌细胞株。用RT-PCR检测感染细胞中B7-1和NK4基因mRNA表达。结果酶切鉴定证实阳性pAdTrack—NK4-B7—1重组穿梭载体含有目的基因B7-1和HGF/NK4,同源重组后制备的病毒载体DNA经酶切鉴定获得了阳性重组腺病毒载体,该载体能有效转染HEK293细胞并在细胞内成功包装,转染3d后可以观察到绿色荧光蛋白(GFP)表达并逐渐增多、增强。制备的Ad—NK4-B7在体外能有效感染Hep-2细胞,感染后可维持6d高水平的B7—1和NK4基因的表达,整体表达可持续2周。结论成功构建了同时表达B7.1和NK4基因的重组腺病毒载体并制备出重组腺病毒颗粒,该病毒能有效地感染喉癌细胞并表达高水平的NK4和B7-1基因,为进一步研究B7—1和NK4基因的功能及应用B7—1和NK4进行喉癌的联合基因治疗提供了依据和素材。
李敏雄
刘启才
石慧
陈盛强
严小玲
陈德基
关键词:
腺病毒
NK4基因
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