祝蓉
- 作品数：12 被引量：21H指数：2
- 供职机构：复旦大学附属中山医院更多>>
- 发文基金：上海市科委重大科技攻关项目中国博士后科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 靶向表皮生长因子受体基因的短发夹RNA对肺腺癌A549细胞生长及药物敏感性的影响
- 2007年
- 目的探讨瞬时转染靶向表皮生长因子受体(EGFR)基因的短发夹RNA(shRNA)表达载体对肺腺癌A549细胞生长及药物敏感性的影响。方法构建靶向EGFR的shRNA载体(pShEGFR)和非特异性的shRNA载体(pShNEG),阳离子脂质体将其转染至肺腺癌A549细胞,免疫荧光和Western blot法检测转染后细胞中EGFR蛋白表达变化;克隆形成实验观察细胞生长变化;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;MTI法检测细胞对顺铂、阿霉素、泰素的敏感性。结果与未转染组和pShNEG转染组细胞相比,pShEGFR可显著抑制A549细胞中EGFR蛋白表达,转染后第6天抑制率达74.1%(P<0.01);pShEGFR转染组细胞克隆形成抑制率为62.8%。与未转染组和pShNEG组相比,pShEGFR组细胞阻滞在G_0/G_1期(P<0.01),凋亡细胞比例显著增加(P<0.01);与未转染组相比,pShEGFR可将A549细胞对顺铂、阿霉素、泰素的敏感性分别提高6.7、5.5、6.6倍。结论瞬时转染靶向EGFR基因的shRNA表达载体能够通过下调EGFR蛋白水平抑制肺腺癌A549细胞生长,并提高细胞对不同化疗药物的敏感性。
- 白莉余祖滨祝蓉张新高磊白春学
- 关键词：表皮生长因子
- 端粒酶永生化原始乳腺癌组织来源细胞及其意义被引量：1
- 2007年
- 背景与目的：乳腺癌细胞系大部分来源于乳腺癌转移所致的胸水或非原始乳腺癌组织来源，与真正的乳腺癌的生物学性状有很大差异。而仅部分细胞系直接由乳腺癌原代细胞在体外培养条件下成为永生化的细胞系，过表达人端粒酶逆转录酶（hTERT）可使正常人上皮细胞永生化。本研究将通过hTERT转染人原始乳腺癌组织来源的细胞建立永生化乳腺癌细胞系，并研究过表达hTERT对其他基因表达的影响。方法：通过重组逆转录病毒pBABE-hTERT-puro将hTERT基因导人原始乳腺癌组织来源的细胞，建立稳定表达hTERT的永生乳腺癌细胞。再利用微阵列技术检测乳腺癌细胞中hTERT诱导的基因表达改变。结果：Real-TimeRT-PCR证实hTERT转染后的乳腺癌细胞中hTERT过度并稳定表达，为转染前表达量的1400倍以上，并使得被转染的细胞永生化，可以传40～50代以上。微阵列结果进一步证实hTERT在转染后的细胞中过表达，另外，有22个基因在转染后的乳腺癌细胞中上调，未观察到所有细胞株中均下调的基因。结论：过表达hTERT可导致乳腺癌原代细胞的永生化，并对部分基因有上调作用。
- 贲勇白春学肖奎祝蓉
- 关键词：端粒酶逆转录酶细胞培养永生化基因表达谱
- RNA干扰下调不同肿瘤细胞表皮生长因子受体表达及其意义被引量：1
- 2007年
- 背景与目的:表皮生长因子受体在多种上皮源性肿瘤中过表达,与肿瘤的发生、发展密切相关,是肿瘤治疗的重要靶点。本研究采用针对EGFR的小干扰RNA(siRNA),探讨其在不同类型肿瘤细胞A431、HeLa、SPC-A-1中的RNA干扰效应。方法:化学合成针对EGFR的siRNA,转染A431、HeLa、SPC-A-1细胞,通过定量RT-PCR、免疫荧光染色和流式细胞仪检测EGFR表达;通过集落形成实验观察细胞集落形成能力,分析不同类型肿瘤细胞的RNA干扰效应。结果:转染siRNA-EGFR后,3种肿瘤细胞的EGFR表达均明显下调。在A431细胞,其mRNA水平下调73.9%,蛋白水平下调77.0%。在HeLa和SPC-A-1细胞,mRNA水平的下调分别为44.6%和57.7%,蛋白水平下调61.3%和65.2%。EGFR下调后细胞集落形成能力均出现抑制,A431、HeLa和SPC-A-1的集落形成抑制率分别为27.2%、53.9%和59.1%。结论:siRNA-EGFR可在不同类型肿瘤细胞中产生RNA干扰效应,抑制细胞集落形成能力。RNA干扰技术在开发广谱抗肿瘤靶向治疗药物中具有应用价值。
- 祝蓉白莉白春学张新
- 关键词：表皮生长因子受体RNA干扰肿瘤靶向治疗
- RNA干扰在哺乳动物中的应用与肿瘤基因治疗
- 2006年
- RNA干扰是目前分子生物学研究领域的热点。随着其作用机制和生物学意义逐渐被阐明,它已成为基因治疗学研究的得力工具。它在哺乳动物细胞中的特殊作用机制及应用策略研究也为人类肿瘤性疾病的治疗开辟了一条前景光明的新途径。
- 祝蓉张新白春学
- 关键词：RNA干扰哺乳动物肿瘤治疗
- 采用RNA干扰技术抑制上皮源性肿瘤细胞表皮生长因子受体表达及阻滞肿瘤细胞周期的实验研究
- 第一部分 RNA干扰下调上皮源性肿瘤细胞表皮生长因子受体表达及其生物学效应研究
[目的] 表皮生长因子受体在多种上皮源性肿瘤中过表达，其过度表达和/或激活与肿瘤患者生存期短、预后差、放化疗敏感性下降相关，是目前公...
- 祝蓉
- 关键词：表皮生长因子受体小干扰RNA上皮源性肿瘤短发夹RNA细胞周期
- 靶向EGFR基因的短发夹RNA对A549细胞生长及药物敏感性的影响被引量：4
- 2007年
- 背景与目的:已证实非小细胞肺癌中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的过度表达和活化与肿瘤分期、放化疗敏感度下降密切相关。许多阻滞和下调EGFR的方法被用来抑制肿瘤增殖以改善预后,EGFR目前成为公认的肿瘤基因治疗的重要靶点。本研究采用靶向EGFR的短发夹RNA(short hairpinRNA,shRNA)表达重组质粒,观察能否在人肺腺癌细胞株A549细胞中引发RNA干扰(RNAi)效应及其对A549细胞生长及药物敏感性的影响。方法:构建靶向EGFR的shRNA重组质粒(pShEGFR)和非特异性的shRNA重组质粒(pShNEG),阳离子脂质体将其转染至肺腺癌A549细胞分别命名为A549/pShEGFR、A549/pShNEG和对照组A549,免疫荧光和Western blot法检测转染后细胞中EGFR表达变化;克隆形成实验观察细胞生长变化;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;MTT法检测细胞对顺铂、多柔比星、紫杉醇的敏感性。结果:与对照组A549细胞和A549/pShNEG相比,A549/pShEGFR可显著抑制A549细胞中EGFR表达,转染后第6天抑制率达74.1%(P<0.01);A549/pShEGFR组细胞克隆形成抑制率为62.8%。与对照组A549细胞和A549/pShNEG相比,A549/pShEGFR组细胞阻滞在G0/G1期(63.2±1.1,64.5±1.4vs.74.2±0.8;P<0.01),凋亡细胞比例显著增加(5.8±1.4,7.7±1.2vs.25.6±1.2;P<0.01);与A549组相比,A549/pShEGFR可将A549细胞对顺铂、多柔比星、紫杉醇的敏感性分别提高6.7、5.5、6.6倍。结论:瞬时转染靶向EGFR基因的shRNA表达重组质粒能够通过下调EGFR蛋白水平抑制肺腺癌A549细胞生长,并提高细胞对不同化疗药物的敏感性。
- 白莉余祖滨祝蓉张新高磊白春学
- 关键词：表皮生长因子敏感性DDP多柔比星
- RNAi抑制水通道蛋白5表达及其对细胞株黏蛋白合成及分泌的影响被引量：1
- 2008年
- 目的观察瞬时及稳定转染的RNA干扰法对水通道蛋白5（AQP5）的抑制效果,并观察AQP5抑制后细胞株黏蛋白合成、分泌的变化。方法用化学合成siRNA和质粒介导的shRNA分别转染SPC-A1细胞,并在转染后7d内的不同时点收集细胞,检测AQP5 mRNA和蛋白的变化。用G418筛选稳定转染细胞株,用Western blot法检测稳转株AQP5蛋白的抑制情况。用ELISA法检测AQP5抑制后各时点及稳定转染细胞株MUC5AC表达量的变化。结果siAQP5及shAQP5转染24h对AQP5 mRNA的抑制率分别为65%、79%。对蛋白的抑制在转染后第7d最明显,分别为93%,98%。稳转株（5株）对AQP5蛋白的抑制率为45%～64%。ELISA显示瞬转第5d,MUC5AC的合成和分泌分别增加57.9%、85.3%。在5株稳定转染细胞中（shAQP5-G1,G2,G3,A1,A5）MUC5AC的合成和分泌分别增加59%～156%及33%～166%。结论化学合成及质粒介导的RNA干扰法均能有效抑制SPC-A1细胞AQP5的表达,后者较前者更经济,抑制效应更优。与瞬时转染比较,稳定转染可长时间抑制特定基因的表达。AQP5抑制后,细胞株黏蛋白的合成、分泌增高。
- 陈智鸿高磊祝蓉白莉白春学
- 关键词：SHRNAAQP5黏蛋白稳定转染
- 靶向表皮生长因子受体的小干扰RNA重组腺病毒及其用途
- 本发明属生物技术领域，具体涉及靶向表皮生长因子受体的小干扰RNA重组腺病毒及其在抑制人肺腺癌细胞体内生长中的作用。本发明使用腺病毒载体系统构建shuttle vector－穿梭载体和backbone vector－骨架载...
- 白春学张新白莉祝蓉
- 文献传递
- 小发卡状RNA介导的人呼吸道黏膜下腺细胞对水通道蛋白5的抑制及其对MUC5AC表达的影响被引量：2
- 2006年
- 陈智鸿祝蓉白莉白春学
- 关键词：水通道蛋白5黏膜下呼吸道腺细胞外分泌腺
- 84例肺结节病临床特征分析
- 2007年
- 目的:探讨肺结节病的临床特点及诊治方法。方法:分析84例肺结节病患音的临床资料。结果:本组病例有以下临床特征:(1)以中老年女性患者为主,平均年龄48.26岁;(2)症状多样性。胸部X线检查是早期诊断的重要手段,支气管肺泡灌洗液细胞分类对诊断有帮助;(3)确诊依赖组织病理学。经纤支镜粘膜活检及经纵隔镜淋巴结活检诊断阳性率较高。结论:肺结节病临床表现多样,糖皮质激素治疗有一定疗效,但应采取个体化疗法,必要时加用其它免疫抑制剂。
- 张维杰祝蓉贾友明白春学
- 关键词：结节病
