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伪狂犬病病毒Ea株基因组UL区的克隆与序列分析被引量：6: 2004年; 从伪狂犬病病毒Ea株基因组DNA中扩增到3.76 kb的基因组片段,该片段包含UL31、UL32、UL33和UL34基因完整编码区,以及UL30和UL35基因部分序列.UL31、UL32、UL33和UL34基因G+C含量为69.5%~73.4%,偏向于使用富含GC特别是第三密码子位置上核苷酸是C或G的密码子,Ala、Leu、Arg的利用率最高,占氨基酸残基总数的36.4%.PRV Ea株UL31和UL32基因与PRV Ka株核苷酸与氨基酸序列同源性都很高,在98%以上;而UL33和UL34基因与Ka株的氨基酸序列同源性较低,分别为95.7%和94.8%.UL31基因在疱疹病毒α-亚科所有成员之间都很保守,并且UL31基因与马疱疹病毒IV型同源程度最高.UL32、UL33和UL34基因均与牛疱疹病毒I型同源程度最高.UL31、UL32、UL33与UL34基因产物均有酪蛋白激酶2磷酸化位点和蛋白激酶C磷酸化位点,表明UL31、UL32、UL33、UL34蛋白质可能都是磷酸化蛋白质.; 马相如胡勤芹肖少波方六荣陈焕春; 关键词：伪狂犬病病毒基因组牛疱疹病毒I型

特异性抑制伪狂犬病毒EP0基因表达的siRNA分子的合成与筛选: 2006年; EP0基因是伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PRV)的早期基因,可能与病毒复制及潜伏感染等有关。为了筛选特异性抑制EP0基因表达的siRNA序列,本研究按照Ambion公司公布的siRNA分子设计原则,设计并合成了3个针对PRVEa株EP0基因的siRNA模板EP04、EP08和EP12,分别克隆到以CMV启动子的siRNA表达载体pSilencer4.1-CMVneo中,构建相应的重组表达质粒p4.1-EP04、p4.1-EP08和p4.1-EP12。同时,将EP0基因的编码区克隆到真核表达载体pEGFP-N3中,按照读码框架与EGFP基因的5’端融合,获得重组表达质粒pEP0-EGFP。将p4.1-EP04、p4.1-EP08、p4.1-EP12和阴性对照质粒p4.1-NK分别与pEP0-EGFP共转染IBRS-2细胞,荧光显微镜观察、流式细胞仪和半定量RT-PCR检测结果表明,三个siRNA分子均能不同程度地抑制EP0基因的表达,抑制效率从高到低依次为EP08、EP12和EP04;在进一步的病毒感染实验中也得到了与细胞转染模型一致的结论。这为深入研究EP0基因在PRV复制和潜伏感染中的作用奠定了基础。; 习杨周锐郭洪胡勤芹方六荣陈焕春; 关键词：SIRNA 伪狂犬病毒 EPO

应用RNA干扰技术抑制口蹄疫病毒的基因表达与复制的研究: 口蹄疫/(Foot and Mouth Disease，FMD/)是由口蹄疫病毒/(Foot and Mouth Disease Virus，FMDV/)引起的多种偶蹄动物共患的急性传染病，被国...; 胡勤芹; 关键词：口蹄疫病毒 RNAI 病毒复制; 文献传递

伪狂犬病病毒的结构蛋白与功能: 本文对PRV基因结构和功能作一概述,并着重介绍PRV间质蛋白的组成成分及其功能和相互作用,以及对病毒形态建成的影响.; 胡勤芹马相如陈焕春; 关键词：伪狂犬病病毒结构蛋白基因; 文献传递

伪狂犬病病毒的结构蛋白与功能: 伪狂犬病病毒(Pseudorabies Virus,PRV)属疱疹病毒科水痘样病毒属。该病毒可引起多种家畜和野生动物发生急性传染病,给全球养猪业造成巨大的经济损失。伪狂犬病病毒至少含有30种病毒编码的结构蛋白质,它们聚集...; 胡勤芹马相如陈焕春; 文献传递

伪狂犬病病毒宿主关闭蛋白的基因克隆及结构分析被引量：1: 2005年; 为研究伪狂犬病病毒 (pseudorabiesvires ,PRV)UL4 1基因编码的病毒宿主关闭蛋白 (VHS)的结构与功能 ,通过PCR扩增得到含UL4 1基因完整编码区的 1174bp片段 ,将该片段克隆到表达载体pGEX KG中GST下游 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中实现了GST VHS融合蛋白的高效表达 .序列分析发现VHS蛋白具有 4个保守区 ,并且第 3个保守区与核酸内切酶结构域FEN 1(1A76 )高度同源 .PROSPECT软件预测的伪狂犬病病毒VHS蛋白三维结构中含有 10个α螺旋和 2 2个β折叠 ,与单纯疱疹病毒Ⅰ型的VHS蛋白三维结构十分相似 .; 马相如胡勤芹肖少波方六荣刘正飞陈焕春

特异性抑制伪狂犬病毒EPO基因表达的siRNA分子的合成与筛选: 2009年; EPO基因是伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PRV)的早期基因,可能与病毒复制及潜伏感染等有关。为了筛选特异性抑制EPO基因表达的siRNA序列,本研究按照Ambion公司公布的siRNA分子设计原则,设计并合成了3个针对PRVEa株EPO基因的siRNA模板EP04、EP08和EP12,分别克隆到以CMV启动子的siRNA表达载体pSilencer4.1-CMVneo中,构建相应的重组表达质粒p4.1-EP04、p4.1-EP08和p4.1-EP12。同时,将EPO基因的编码区克隆到真核表达载体pEGFP-N3中,按照读码框架与EGFP基因的5'端融合,获得重组表达质粒pEPO-EGFP。将p4.1-EP04、p4.1-EP08、p4.1-EP12和阴性对照质粒p4.1-NK分别与pEPO-EGFP共转染IBRS-2细胞,荧光显微镜观察、流式细胞仪和半定量RT-PCR检测结果表明,三个siRNA分子均能不同程度地抑制EPO基因的表达,抑制效率从高到低依次为EP08、EP12和EP04;在进一步的病毒感染实验中也得到了与细胞转染模型一致的结论。这为深入研究EPO基因在PRV复制和潜伏感染中的作用奠定了基础。; 习杨周锐郭洪胡勤芹方六荣陈焕春; 关键词：SIRNA 伪狂犬病毒 EPO

伪狂犬病病毒Ea株UL31基因克隆、序列分析及其在大肠杆菌中的表达被引量：3: 2004年; 以伪狂犬病病毒Ea株基因组DNA为模板,通过PCR扩增含UL31基因的1000bp片段,扩增产物克隆于pMD18＿T中,双脱氧末端终止法序列测定。通过OM1GA2 0软件包分析发现,Ea株UL31基因编码271个氨基酸,蛋白质分子量为30 38kD,与Ka株UL31基因核苷酸与氨基酸序列同源性均在98%以上。将α＿疱疹病毒亚科9个不同成员UL31同源基因编码的氨基酸序列进行多重比对分析,发现4个保守的功能性结构域。将该片段插入原核表达载体pGEX＿KG中GST下游,构建的原核表达质粒pGEX＿UL31在大肠杆菌BL32(DE3)中获得了高效表达,SDS＿PAGE结果显示,表达的融合蛋白质分子量为56kD。; 马相如胡勤芹肖少波方六荣陈焕春; 关键词：伪狂犬病病毒克隆

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胡勤芹