胡迪超
- 作品数：14 被引量：15H指数：3
- 供职机构：武汉生物制品研究所有限责任公司更多>>
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- 基因工程抗体高效表达载体的构建
- 目的:构建基因工程抗体高效表达载体。方法:采用分子生物学技术以质粒pcDNA3.3-T4L和pOotiVEC-T4H为骨架,通过在表达框中添加增强子和插入内含子、弱化筛选标志基因以及优化表达载体的物理构象等策略构建以筛选...
- 胡迪超张爱华杨晓明
- 关键词：抗体
- 文献传递
- 抗CD25人鼠嵌合抗体的构建与瞬时表达
- 目的：构建抗CD25嵌合抗体的真核表达载体并在293T细胞中进行瞬时表达。
方法：使用RT-PCR法，设计针对信号肽的简并引物钓取抗CD25杂交瘤细胞的重、轻链可变区基因，以质粒PAG4622为模板钓取人抗体I...
- 潘勇兵张爱华胡迪超闭兰杨晓明
- 关键词：嵌合抗体流式细胞术真核表达
- 文献传递
- 抗人CD25嵌合抗体的稳定表达及鉴定
- 2012年
- 目的:构建抗人CD25嵌合抗体稳定细胞株,并对表达产物进行相关鉴定。方法:构建CD25嵌合抗体稳定表达质粒VEC-VTacH和3.3-VTacL并稳定转染CHO-DHFR-细胞,经选择性培养、有限稀释法克隆和MTX加压选择后扩大培养构建的工程细胞,Protein A纯化回收目的抗体后分别进行质谱分析、蛋白质N端测序和平衡解离常数(Kd)的测定。结果:CD25嵌合抗体稳定细胞株的抗体表达水平约为3.74～7.07μg/ml,质谱分析结果表明其含有鼠源成分和人源成分,蛋白质N端测序表明其与亲本抗体N端序列完全一致,其Kd为2.35×10-10mol/L,而亲本抗体的Kd为1.88×10-10mol/L。结论:抗人CD25嵌合抗体保留了亲本抗体的抗原结合活性和亲和力。
- 胡迪超张爱华杨晓明
- 关键词：CD25嵌合抗体
- 抗人CD25嵌合抗体基因的构建及其瞬时表达研究被引量：1
- 2011年
- 目的:构建抗人CD25嵌合抗体基因并在哺乳动物细胞中进行瞬时表达和初步鉴定。方法:采用RLM-RACE法克隆WuTac抗体可变区和信号肽序列,并利用基因拼接法构建嵌合抗体基因。用脂质体法瞬时转染三种哺乳动物细胞,并使用ELISA、FCM、WB、Dot blot和免疫荧光法进行检测。结果:成功克隆WuTac抗体可变区和信号肽序列,并构建了抗人CD25嵌合抗体表达质粒。瞬时转染结果表明所表达的嵌合抗体保留了亲本抗体WuTac的抗原结合力。结论:成功构建了抗人CD25嵌合抗体基因,为其进一步研究打下基础。
- 胡迪超张爱华潘勇兵詹珊珊杨晓明
- 关键词：CD25基因拼接嵌合抗体
- 重组抗体高效表达的研究进展(Ⅱ)被引量：1
- 2013年
- （续上期）2抗体基因序列的优化
越来越多的研究表明,抗体基因序列中存在的剪接信号、二级结构、GC含量以及密码子偏爱等影响抗体的表达水平。信号肽会影响抗体折叠、
- 胡迪超张爱华杨晓明
- 关键词：基因序列GC含量信号肽密码子
- 抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒的构建及其瞬时表达被引量：2
- 2011年
- 目的构建抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒,并在哺乳动物细胞中进行瞬时表达。方法采用RLM-RACE法克隆WuT4抗体可变区和信号肽序列,并采用基因拼接法构建嵌合抗体基因真核表达质粒。采用脂质体法瞬时转染HEK293T、CHO-DHFR-和COS-7 3种哺乳动物细胞,ELISA法检测转染细胞上清中嵌合抗体的浓度,流式细胞术、Western blot和Dotblot分析嵌合抗体的抗原结合活性,并对表达的嵌合抗体进行免疫荧光分析。结果成功克隆了WuT4抗体可变区和信号肽序列;抗人CD4嵌合抗体共表达质粒pOptiVEC-T4H和pcDNA3.3-T4L构建正确;表达的嵌合抗体保留了亲本抗体的抗原结合力,并能特异性识别人CD4分子;免疫荧光分析表明,表达的嵌合抗体含人抗体的重、轻链恒定区。结论 已成功构建了抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒,并能在哺乳动物细胞中瞬时表达,为其进一步研究奠定了基础。
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- 关键词：基因拼接嵌合抗体
- 人CD4分子及其治疗性抗体的研究进展被引量：4
- 2010年
- 在正常情况下,人CD4分子能协助机体免疫系统进行免疫防御、免疫自稳和免疫监视;但在一定条件下,又与某些疾病的发生发展密切相关。目前,已研制出几种抗CD4治疗性抗体,并在一些疾病的临床研究中获得了成效。本文就人CD4分子的结构、功能、与疾病的关系以及抗CD4治疗性抗体的研究进展作一综述。
- 胡迪超张爱华杨晓明
- 关键词：分子结构疾病抗体
- 人鼠嵌合抗体的基因构建被引量：4
- 2009年
- 为了克服鼠单克隆抗体在人体治疗中出现的问题,经典的基因工程抗体技术将人源抗体恒定区替代鼠抗体的恒定区,即构建人鼠嵌合抗体。嵌合抗体不仅保留了亲本抗体的特异性和亲和力,大大降低了人抗鼠抗体(HAMA)反应,而且可表现出不同的生物学功能和半衰期。本文就嵌合抗体鼠抗体可变区基因的克隆、人抗体恒定区基因的钓取、鼠抗体可变区基因与人抗体恒定区基因的拼接及表达载体和宿主细胞的构建作一综述。
- 胡迪超张爱华杨晓明
- 关键词：嵌合抗体可变区
- 重组抗体高效表达的研究进展(Ⅰ)被引量：3
- 2013年
- 重组抗体在哺乳动物细胞中的高效表达有赖于高效表达载体的构建、抗体基因序列的优化、抗体稳定细胞株的筛选、表达宿主细胞的改造及细胞培养工艺的优化等。本文对上述问题的研究进展进行综述。
- 胡迪超张爱华杨晓明
- 抗人CD4嵌合抗体的稳定表达及鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的构建抗人CD4嵌合抗体稳定表达细胞株,并对表达产物进行鉴定。方法采用脂质体法将抗人CD4嵌合抗体质粒pHDC4稳定转染CHO-DHFR-细胞,经选择性培养、有限稀释法克隆和MTX加压筛选抗人CD4嵌合抗体稳定表达株,经细胞工厂扩大培养。收集培养上清,经Protein A亲和层析纯化目的抗体,激光共聚焦显微镜观察抗体基因在细胞内的表达,并分别进行质谱分析、蛋白质N-末端测序和平衡解离常数(KD)的测定。结果构建的抗人CD4嵌合抗体稳定表达细胞株的抗体表达水平为4.29～10.52μg/ml;BCA测得纯化回收后的抗体表达水平为12.68 mg/L;激光共聚焦检测显示,抗CD4嵌合抗体稳定表达细胞株可稳定表达人的恒定区和鼠的可变区;质谱分析表明,其含有鼠源性和人源性成分;蛋白质N-末端氨基酸测序表明,其轻链与亲本抗体N-末端氨基酸序列完全一致;其KD为2.67×10-9M。结论成功构建了抗人CD4嵌合抗体稳定表达细胞株,其表达的抗人CD4嵌合抗体保留了亲本抗体的抗原结合特异性和亲和力。
- 胡迪超张爱华杨晓明
- 关键词：嵌合抗体
