苗小康 作品数:6 被引量:19 H指数:2 供职机构: 华南理工大学生物科学与工程学院 更多>> 发文基金: “十一五”国家科技支撑计划 广东省科技攻关计划 广东省科技计划工业攻关项目 更多>> 相关领域: 生物学 轻工技术与工程 医药卫生 更多>>
根癌农杆菌介导酸性蛋白酶在泡盛曲霉中表达的研究 被引量:2 2011年 利用Gateway克隆技术快速构建丝状真菌表达载体,以米曲霉α-淀粉酶A启动子(amyB)、α-糖苷酶终止子(agdA)及黑曲霉酸性蛋白酶基因(pepA)分别构建入门载体,以带有潮霉素抗性标记(hygB)的农杆菌双元载体pHGW为目的载体,通过LR连接反应,构建根癌农杆菌介导丝状真菌重组表达载体pHGW-apA。转化泡盛曲霉宿主菌,筛选的转化子经传代培养确定其遗传稳定性,PCR及测序分析表明,hygB和目的基因pepA整合到了泡盛曲霉基因组。转录水平上的RealTime-PCR定量分析、表达水平上的Western Blotting分析以及培养液酶活分析表明酸性蛋白酶基因pepA在泡盛曲霉中得到正确表达。为丝状真菌表达载体快速构建与外源基因在丝状真菌中快速表达提供了可行的方法。 潘力 李俊星 苗小康关键词:根癌农杆菌 PEPA 双元载体 黑曲霉酸性蛋白酶基因在曲霉中表达的研究 曲霉类丝状真菌是优良的蛋白表达宿主和重要的工业生产菌种,在基础研究和工业生产中具有广泛的应用。对丝状真菌曲霉的基因工程研究日益活跃,而其遗传转化系统是进行基因工程研究必不可少的手段。本研究对曲霉菌的转化系统进行探索,以工... 苗小康关键词:丝状真菌 酸性蛋白酶 文献传递 基于基因组改组的米曲霉沪酿3.042多亲株PEG介导融合育种 被引量:8 2008年 利用经过分生孢子的原生质体紫外线-氯化锂、NTG复合诱变得到的米曲霉沪酿3.042的8株突变株作为候选株文库,采用基因组改组(genome shuffling),利用原生质体,进行多亲株双灭活PEG介导融合,优化融合条件。以酪蛋白平板初筛,以及固体发酵测定中性蛋白酶酶活复筛,通过2轮融合操作,筛选出6株高产中性蛋白酶的融合株。其中融合菌株FII-41酶活达到7412U/g(干基),比原始出发菌株4212U/g(干基)提高1.76倍,且遗传稳定。 潘力 梁燕嫦 苗小康 胡杰关键词:中性蛋白酶 基因组改组 酱油酿造米曲霉AS3.951(沪酿3.042)种曲胞外蛋白谱鉴定与分析 被引量:8 2010年 分析米曲霉AS3.951(沪酿3.042)种曲培养过程中不同培养时间的胞外蛋白谱,确定培养时间为48h时种曲达到蛋白鉴定要求;采用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOFMS)技术检测鉴定出SDS-PAGE胶图上11个蛋白条带,通过比对数据库鉴定得到8个蛋白,其中包括α-淀粉酶、淀粉糖化酶B、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶等,与已在2009年Biosci Biotechnol Biochem期刊发表的《Analysis of extra cell ular proteins of Asper gillus oryzae grown on soy sauce koji》米曲霉AS3.951大曲的分泌蛋白谱共同提供了米曲霉沪酿AS3.951在酱油制曲过程中较完整的胞外分泌蛋白谱。 潘力 苗小康 梁燕嫦关键词:种曲 胞外蛋白 大肠杆菌及其可溶性表达转谷氨酰胺酶酶原的方法 本发明公开了大肠杆菌及其可溶性表达转谷氨酰胺酶酶原的方法,该方法包括如下几个步骤:(1)根据茂原链霉菌转谷氨酰胺酶酶原基因的核苷酸序列,设计PCR引物进行PCR扩增,克隆到原核表达载体pET22b(+)中,构建表达载体p... 潘力 杨慧林 苗小康 崔翠文献传递 大肠杆菌及其可溶性表达转谷氨酰胺酶酶原的方法 本发明公开了大肠杆菌及其可溶性表达转谷氨酰胺酶酶原的方法,该方法包括如下几个步骤:(1)根据茂原链霉菌转谷氨酰胺酶酶原基因的核苷酸序列,设计PCR引物进行PCR扩增,克隆到原核表达载体pET22b(+)中,构建表达载体p... 潘力 杨慧林 苗小康 崔翠