谈立松
- 作品数：30 被引量：41H指数：4
- 供职机构：同济大学附属肺科医院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目上海市卫生局科研基金上海市科委重大科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组表皮生长因子受体噬菌体疫苗的抗肿瘤效果被引量：6
- 2006年
- 目的构建重组表皮生长因子受体(EGFR)噬菌体疫苗,并观察其抗肿瘤效果。方法将鸡源EGFR膜外部分的5个基因片段插入T7噬菌体表达系统中,EGFR蛋白以融合蛋白的形式表达在噬菌体的外壳蛋白10B上,从而构建成噬菌体疫苗。Western blot方法检测噬菌体壳蛋白的EGFR表达,ELISA方法检测免疫小鼠血清中抗EGFR抗体。分离免疫小鼠脾细胞,检测淋巴细胞对靶细胞A431的细胞毒作用。C57BL／6J小鼠经过4次免疫,接种Lewis肺癌细胞,记录肿瘤的生长情况,评价疫苗的抗肿瘤效果。结果成功构建5种鸡源EGFR噬菌体疫苗REPV-C1、REPV-C2、REPV-C3、REF-C4和REPV-C5。Western blot结果显示,噬菌体壳蛋白上有EGFR表达。经免疫的小鼠血清中可检测到抗EGFR抗体。免疫后的小鼠脾细胞对EGFR受体高表达的A431细胞具有杀伤作用,效靶比为10:1时,最大杀伤率可达45．74％±7．21％。肿瘤生长曲线显示,免疫后的C57BL／6J小鼠Lewis肺癌生长受到明显抑制。结论重组EGFR噬菌体疫苗具有抗肿瘤效果,利用噬菌体表达技术构建噬菌体疫苗是一种有效的抗肿瘤方法。
- 刘岽唐亮周彩存谈立松
- 关键词：免疫治疗噬菌体表皮生长因子疫苗
- 重组EGFR噬菌体疫苗抗肿瘤效果的研究(英文)
- 2006年
- 目的构建重组EGFR噬菌体疫苗并且观察其抗肿瘤效果。方法将鸡源EGFR膜外部分的5个基因片段插入到T7噬菌体展示系统中,EGFR蛋白以融合蛋白的形式展示在噬菌体的外壳蛋白10B上,从而构建成噬菌体疫苗。Western blot方法检测噬菌体壳蛋白上是否有EGFR表达。利用ELISA方法检测免疫小鼠血清中抗EGFR抗体。分离免疫小鼠脾细胞,检测淋巴细胞对靶细胞A431的细胞毒作用。C57小鼠经过4次免疫,接种Lewis肺癌,记录肿瘤的生长情况,评价疫苗的抗肿瘤效果。结果本实验成功构建5种鸡源EGFR噬菌体疫苗。Western blot。显示噬菌体壳蛋白上有EGFR表达。免疫后的小鼠血清中检测到抗EGFR抗体。体外分离脾细胞证明免疫后的小鼠脾细胞对EGFR受体高表达的A431细胞具有杀伤作用。靶细胞和效应细胞的比例在1:10时,最大杀伤率可达(45．74±7．21)％(P<0．001)。肿瘤生长曲线显示免疫后的C57小鼠Lewis肺癌生长受到明显的抑制。结论利用噬菌体展示技术构建的噬菌体疫苗是一种有效的抗肿瘤方法。
- 刘岽唐亮周彩存谈立松
- 关键词：免疫治疗噬菌体疫苗肿瘤
- 吉非替尼联合靶向EGFR DNA疫苗对小鼠Lewis肺癌细胞体内外的抑制作用
- 2009年
- 目的:探讨吉非替尼(gefitinib)联合靶向EGFR DNA疫苗对小鼠Lewis肺癌体内外的抑制作用。方法:用鸡EGFR与兔IgG Fc段异种融合DNA疫苗pVAX1/cEGFR-rFc免疫小鼠制备抗血清,ELISA方法测定抗血清的效价。MTT法检测Lewis细胞的生长情况。建立Lewis肺癌鼠移植瘤模型,随机分为疫苗组、吉非替尼组、吉非替尼+疫苗组和对照组,观察各组小鼠肿瘤体积、重量及生存情况。结果:pVAX1/cEGFR-rFc DNA疫苗免疫小鼠后抗EGFR血清效价为1∶1 000。与抗血清组或吉非替尼组相比,抗血清+吉非替尼组可显著抑制Lewis细胞的生长(P<0.05)。体内实验显示,吉非替尼+疫苗组小鼠移植瘤生长缓慢,荷留小鼠生存率显著提高(P<0.01)。结论:以EGFR为靶点的DNA疫苗和靶向药物吉非替尼之间具有协同性抗肿瘤作用,DNA疫苗主动免疫可以提高吉非替尼的疗效。
- 刘岽武建毅唐亮谈立松
- 关键词：吉非替尼表皮生长因子受体DNA疫苗
- 异种VEGF融合蛋白疫苗对小鼠Lewis肺癌的抑制作用被引量：2
- 2008年
- 目的:利用原核表达系统,构建异源血管内皮生长因子融合蛋白疫苗,研究该融合蛋白疫苗对小鼠Lewis肺癌肿瘤模型的抗血管生成主动免疫治疗效果。方法:将鸡VEGF基因克隆入pGEX-4T-2原核表达载体,经IPTG诱导融合蛋白表达,Ni-NTA纯化,透析复性,构建GST-cVEGF融合蛋白疫苗。将C57BL16J小鼠随机分为3组,GST-cVEGF疫苗组10只、cVEGF疫苗组10只、生理盐水组(NS)10只。将各组样品与等体积弗氏佐剂混合,各组小鼠每只分别0、2、3周免疫100μgGST-cVEGF融合蛋白疫苗、单纯cVEGF蛋白疫苗、生理盐水。接种Lewis肺癌细胞,观察肿瘤的生长情况和小鼠状态。接种肿瘤18d后,处死小鼠,剥离肿瘤称重。检测小鼠血清中特异性抗VEGF抗体滴度。结果:GST-cVEGF疫苗组、cVEGF组、生理盐水组肿瘤均重分别为(1·55±0·534)g、(1·93±0·607)g、(2·87±0·642)g。GST-cVEGF疫苗组肿瘤重量明显小于生理盐水组(P<0·01)。疫苗组血清产生抗VEGF抗体滴度为1∶2000。结论:异种血管内皮生长因子基因重组融合蛋白疫苗可干扰机体对自身VEGF的免疫耐受,可产生较高水平的特异性抗VEGF抗体,并具有抑制小鼠Lewis肿瘤生长的效应。
- 刘倩唐亮李英辉周彩存谈立松赵玉军张培德张尚权
- 关键词：血管内皮生长因子融合蛋白疫苗小鼠
- 可溶性VEGF受体FLT-1克隆、表达及其对血管生成的抑制作用被引量：5
- 2002年
- 目的 :克隆VEGF受体sFLT 1片段 1 3区 ,并使之在原核中进行表达以探讨其对内皮细胞增殖和血管生成方面的抑制作用。方法 :提取脐静脉血管内皮细胞总RNA ,克隆sFLT 1基因 1 3区 ,并使之在QIA表达系统进行表达 ;Ni2 + Sepharose6B亲和层析纯化、复性。应用MTT和鸡胚绒毛尿囊膜血管生成模型 ,探讨重组蛋白对血管生成的抑制作用。结果 :该表达系统能表达sFLT 1基因片段 ,表达量低。纯化后 ,经复性 ,sFLT 1具有与VEGF特异结合功能 ,1μg重组sFLT 1蛋白能抑制 10ngVEGF诱导的脐静脉内皮细胞增殖和 2 0ngVEGF诱导的鸡胚绒毛尿囊膜血管生成。结论 :sFLT 1基因片段能在QIA表达系统中得到表达 ,复性后重组蛋白具有与VEGF结合和拮抗VEGF生物学活性的功能。
- 周彩存谈立松唐亮粟波
- 关键词：FLT-1克隆血管内皮细胞生长因子血管新生
- LTA,CEA,NSE,Cyfra 21-1对肺癌诊断价值的探讨被引量：3
- 2001年
- 目的 探讨 L TA、CEA、NSE和 Cyfra2 1- 1对肺癌诊断价值。方法 清晨空腹抽取临床确诊肺癌患者 12 4例、转移性肺癌 9例和良性肺部疾病 3 4例患者静脉血 7ml,分别用放射免疫法和乳胶凝集试验法 ,检测血清中上述癌性标志物水平。结果 :L TA、CEA、NSE和 Cyfra2 1- 1,在肺癌的阳性率分别为 60 %、8%、3 1%和 4 3 % ;特异性分别为 88%、10 0 %、84 %和 97% ,CEA和 Cyfra2 1-1较高 ;阳性率和敏感性组间差异有统计学意义。 L TA对肺癌细胞类型和是否手术无诊断意义。结论 L TA对肺癌具有一定的诊断价值 ,但特异性差于 Cyfra2 1- 1;
- 周彩存谈立松
- 关键词：CYFRA21-1支气管肺癌
- 鸡VEGF基因的克隆及融合蛋白的表达与分离纯化
- 2008年
- 为获得鸡VEGF基因片段,原核表达GST-cVEG基因,并对融合蛋白进行分离纯化,应用RT-PCR从鸡睾丸中扩增出VEGF片段,将PCR产物克隆至pMD 18-T载体。随后,将cVEGF片段亚克隆至带有GST的原核表达载体pGEX-4T-2中,测序鉴定。将重组质粒pGEX4T2-cVEGF转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,IPTG诱导,并进一步通过Ni-NTA Agarose亲合层析纯化,纯化产物以SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,结果表明,成功地构建了原核表达质粒pGEX4T2-cVEGF。GST-cVEGF融合蛋白在大肠杆菌中得到了表达,Ni-NTA Agarose纯化后得到较纯的蛋白。Western blot分析证实,纯化后蛋白是GST-cVEGF融合蛋白,为进一步研究GST-cVEGF融合蛋白疫苗抗小鼠肿瘤模型奠定了基础。
- 刘倩唐亮谈立松赵玉军
- 关键词：融合蛋白原核表达
- 表皮生长因子受体靶向重组T7噬菌体抗肿瘤疫苗的免疫活性被引量：1
- 2005年
- 目的探讨表皮因子受体为靶向,重组T7噬菌体疫苗在体诱导的免疫活性。方法用构建的重组T7噬菌体疫苗免疫动物,Dot-Blot和流式细胞仪检测产生的特异性抗体,MTT法检测产生的特异性杀伤肿瘤细胞活性。结果实验组动物均产生特异性抗体,与A431细胞结合的阳性细胞率分别为37.6%、47.6%和35.1%;T7415-1b-90和T7415-1b-132实验组均诱导产生对A431细胞的特异性杀伤作用,检测的ODE+T与对照组相比具有显著性差异(P<0.01);T710-3b-638实验组对肿瘤细胞无杀伤作用。结论异源EGFR分子构建的重组T7噬菌体疫苗可以诱导机体产生体液免疫反应和细胞免疫反应。
- 蔡新华张钦宪唐亮刘岽谈立松
- 关键词：表皮生长因子受体抗肿瘤疫苗抗体
- VGFR噬菌体疫苗的构建及抗肿瘤效果被引量：3
- 2006年
- 目的构建重组血管内皮生长因子受体(VGFR)／中心实验激酶功能区受体(KDR)噬菌体疫苗并且观察其抗肿瘤效果。方法将人源VGFR、KDR的膜外部分插入到T7噬菌体的基因组中,作为一种融合蛋白展示在T7噬菌体外壳上,从而构建了一种新型的抗肿瘤疫苗。ELlSA方法检测抗VGFR、KDR 抗体,C57小鼠经过四次免疫,接种Lewis肺癌后记录肿瘤生长情况,评价疫苗效果。结果成功从人 A549细胞中可克隆出VGFR、KDR基因,并且构建了相应的噬菌体疫苗。ELISA方法检测到了免疫小鼠血清中有特异性抗体的产生,滴度可达104,肿瘤生长曲线显示噬菌体疫苗有明显的抑制肿瘤生长的作用。结论提示利用噬菌体展示技术构建的噬菌体疫苗的应用是一种非常有效的抗肿瘤方法。
- 刘岽唐亮周彩存谈立松
- 关键词：免疫治疗噬菌体KDR疫苗
- VEGF DNA疫苗注射部位对小鼠抗原表达与Th细胞活性的影响
- 2008年
- 目的探讨小鼠不同部位皮下注射VEGF DNA疫苗对抗原表达与Th细胞活性的影响,为DNA疫苗在体内获得良好的细胞免疫提供优化条件。方法用RT-PCR法从A459细胞株中扩增570 bp的VEGF片段,此片段构建成真核表达重组质粒pVAX1-VEGF;在小鼠耳廓、胸部、腹部及背部皮下注射1μg/μl的pVAX1-VEGF DNA100μl,ELISA法检测血清中VEGF抗原表达水平和脾细胞产生的IL-4及IFN-γ动态变化。结果小鼠耳廓、胸部及腹部免疫,VEGF抗原表达较强,其中耳廓免疫所激活的Th1细胞最强,产生524.2 pg/ml IFN-γ,与胸部、腹部及背部免疫的效果相比,差异显著;pVAX1-VEGF疫苗组与pVAX1对照组的Th1与Th2细胞活性差异均显著,不同部位的pVAX1-VEGF疫苗组对Th2细胞活性无明显影响。结论本研究所构建人源VEGF的DNA疫苗能在小鼠体内有效表达,且不同部位皮下免疫后均可激活Th细胞,但以Th1细胞效应为主和耳廓皮下接种最佳。
- 王和勇向阳唐亮谈立松周彩存
- 关键词：皮下注射DNA疫苗抗原表达TH细胞小鼠
