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低温诱导东乡野生稻幼苗期叶片cDNA文库的构建和鉴定: 2010年; 从8℃低温诱导的东乡野生稻幼叶中提取总RNA,以总RNA为模板,利用SMART技术合成第1链,再经LD-PCR扩增合成第2链后,将获得的双链cDNA与双元表达载体YPL3连接,重组质粒电转入大肠杆菌,成功构建了东乡野生稻cDNA文库。经测定,原始文库滴度平均为4.4×107cfu/mL,平均插入片段约1kb,重组率为100%,符合cDNA文库构建要求,为后续利用酵母功能互补技术筛选东乡野生稻有利基因奠定了基础。; 李玲龙邢俊杰崔玲玲韩小霞阳志刚李丁谢灵灵曹孟良; 关键词：东乡野生稻 CDNA文库构建 SMART技术

小粒野生稻STK类抗病基因同源序列的克隆与分析被引量：5: 2009年; 根据丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶类(serine-threonine kinase,STK)抗病基因结构中保守结构域,设计引物,以小粒野生稻基因组DNA为模板,扩增获得10条STK类抗病基因同源序列.同源性分析表明其都具有STK保守结构域,与已克隆的STK类抗病基因有不同程度的相似性,为进一步克隆小粒野生稻中的STK类抗病基因提供依据.; 崔玲玲韩小霞邢俊杰李玲龙阳志刚罗秀娟李丁谢灵灵曹孟良; 关键词：小粒野生稻抗病基因同源序列

野生稻基因组抗性基因富集文库的构建被引量：2: 2008年; 通过集成候选抗性基因克隆技术和磁珠富集文库技术以及可转化基因组文库技术,提出了基于野生稻基因组富集文库克隆野生稻新抗性基因的策略。包括构建野生稻可转化基因组文库,利用RecA重组蛋白介导生物素标记的探针对文库进行磁珠富集,构建野生稻基因富集文库,然后对富集文库的克隆进行鉴定分析,包括点杂交和克隆末端测序分析,最后对富集文库的阳性克隆进行全序列测定和功能验证。按照上述方法,构建了东乡普通野生稻和小粒野生稻可转化基因组文库,库容量分别达到1.58×105和2.68×105个克隆,进而构建了东乡野生稻基因组候选抗性基因富集文库,单克隆总数1 152个,对富集文库的菌落原位杂交筛选获得12个阳性克隆,对其中5个阳性克隆全序列测定结果表明,4个阳性克隆含有已克隆抗性基因的保守序列,证实构建候选抗性基因富集文库克隆野生稻新抗性基因的策略是可行的。; 曹孟良李磊韩小霞田志坚邢俊杰李强崔玲玲张朝良李玲龙罗秀娟杨志刚李丁谢灵灵陶小平罗泽宇唐丽; 关键词：野生稻富集文库新基因克隆

水稻叶绿体表达载体的构建及遗传转化: 叶绿体转化技术具有诸多优点,但是该技术在水稻上的应用较少。本实验中,分别克隆了水稻叶绿体表达载体的不同元件,以水稻总DNA为模板,PCR扩增了叶绿体基因组同源重组片段trnI和trnA,与GenBank中水稻叶绿体基因组...; 谢灵灵; 关键词：水稻原核表达绿色荧光蛋白抗性育种

水稻苗期抗寒性的杂种优势分析被引量：3: 2011年; 通过观察12个水稻杂交组合(包括父母本)的苗期叶片的相对电导率和植株的成苗率,来探讨水稻苗期抗寒性的杂种优势.分析表明:在经过4℃、2 d的冷处理后,12个杂交组合的相对电导率的超亲优势值都为负数,中亲优势值在-37.27%～+21.02%之间,成苗率在-30.80%～+7.20%之间,杂种优势表现为中亲优势.; 贺荣华左佳李丁谢灵灵韩小霞高婧舒服李祺曹孟良; 关键词：杂种优势相对电导率成苗率

小粒野生稻酵母双杂交cDNA文库的构建被引量：5: 2010年; 采用酵母双杂交系统,利用SMART技术,在酵母菌株AH109中构建了小粒野生稻全长cDNA文库,文库容量约为1×106,插入片段平均大小约为640bp。该文库可以用于进一步的酵母双杂交筛选。; 邢俊杰陶小平李玲龙阳志刚唐丽李丁谢灵灵李莉曹孟良; 关键词：小粒野生稻酵母双杂交 CDNA文库构建

RecA蛋白介导的小粒野生稻STK类抗性基因富集文库的构建: 2010年; 利用RecA蛋白的同源重组特性,以生物素标记的STK类抗性基因PCR扩增产物为探针,对小粒野生稻DNA文库进行富集,构建了库容量为1 710个的STK类抗性基因富集文库,通过菌落原位杂交筛选获得21个阳性克隆.其中10个阳性克隆进行了两端测序,生物信息学分析表明:有3个阳性克隆可分别定位于粳稻抗性基因附近和抗性基因内,可能是新的候选抗性基因;有2个阳性克隆可以在粳稻上定位,但周围无抗性基因片段;其它5个阳性克隆由于与栽培稻有多处匹配,不能精确定位。; 韩小霞崔玲玲唐丽陶小平邢俊杰李丁谢灵灵贺荣华左佳曹孟良; 关键词：小粒野生稻抗性基因富集文库

东乡野生稻RPS2类候选抗病基因的克隆与分析被引量：5: 2009年; 利用NBS保守结构域获得的探针及基于RecA文库富集方法的试剂盒筛选东乡野生稻液体pCAMBIA1301质粒文库,杂交筛选获得阳性克隆,在NCBI上进行BLASTN序列比对后,设计相关引物,扩增获得编码区,并利用生物信息学方法预测其编码蛋白序列,与已克隆的NBS-LRR类抗性基因建立进化树.结果分析表明,其预测蛋白除了部分氨基酸缺失及2个氨基酸不同外,与粳稻大部分序列一致,分子进化树表明其与粳稻、拟南芥RPS2基因的关系最近.; 崔玲玲李磊韩小霞邢俊杰李玲龙阳志刚罗秀娟李丁谢灵灵曹孟良; 关键词：东乡野生稻生物信息学

水稻叶绿体基因组定点表达载体的构建及增强型绿色荧光蛋白原核表达分析: 2011年; 分别克隆了水稻叶绿体基因组同源重组片段trnI和trnA、具有3种不同核糖体结合位点(RBS)序列的增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)、来自烟草叶绿体的16S rRNA基因启动子Prrn和psbA基因终止子TpsbA,将上述元件通过酶切位点依次连接到质粒pUC19上,构建了3种能编码增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的水稻叶绿体基因组定点整合表达载体pIA-EGFP1、pIA-EGFP2和pIA-EGFP3。进行分子检测验证后,对上述载体进行了大肠杆菌EGFP原核表达检测,结果携带来源于λ噬菌体T7基因10的5'端非翻译区的载体pIA-EGFP3荧光最强,适合用于水稻叶绿体转化。; 谢灵灵李丁崔玲玲严礼左佳贺荣华赵迎曦高婧曹孟良; 关键词：水稻原核表达

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谢灵灵