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传染性法氏囊病病毒超强毒地方株HN01的分离鉴定及分子系统进化分析被引量：2: 2005年; 　用分离的疑为鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)超强毒(vvIBDV)地方分离株HN01,经处理后接种SPF鸡,36h后接种鸡开始发病,发病率为100%,死亡率为70%以上。剖检可见与野外病例相同的病理变化,如肌肉、腺胃、心脏出血,法氏囊水肿且多呈"紫葡萄"样外观。经血清学试验、毒力试验、鸡胚接种试验、分子生物学和电镜形态学观察均证明该分离物为超强毒株,从而证明河南省鸡群中存在不同于IBDV一般强毒株、经典株和变异株的超强毒株。通过对IBDV不同毒株VP2基因高变区氨基酸序列的聚类分析发现,HN01与华南超强毒株G9201、欧洲超强毒株UK661关系最接近,而与HK46,OKYM,D6948,UPM92-04和KS等毒株关系依次渐远。; 贾赟张素芳周斌王旭东王川庆赵玉军陈溥言; 关键词：传染性法氏囊病病毒超强毒株 VP2 系统进化树

猪流行性腹泻病毒嵌套式RT-PCR检测方法的建立被引量：2: 2004年; Two pairs of primers were designed according to the N gene sequence of PEDV-CV777 strain in Genebank (No. AF353511). PCR amplification product of outer-primers was 1328bp, and the inter-primers amplification product was 538bp. With the primers, a nested PCR assay was established to detect PEDV. This method was sensitive and specific and could be used in PEDV diagnosis and epidemiological investigation.; 张素芳贾赟王敏秀倪艳秀何孔旺陈溥言; 关键词：猪流行性腹泻病毒 PED 分子生物学技术

法氏囊病病毒vp2基因在酵母中的分泌表达及鉴定被引量：1: 2004年; 应用 Pichia 酵母表达系统高效分泌表达了传染性传染性法氏囊病病毒 vp2 基因片段。首先用 Primer5.0 设计 1 对引物 P1、P2,以插入 IBDV vp2 基因的 PMD18-T-VP2 载体为模板,扩增出带有终止密码子的 1.4 kb 片段,将此片段正向亚克隆到酵母表达载体pPICZα-A上,将构建好的重组载体pPICZα-A-VP2用SacⅠ内切酶线性化后,电击转化整合入 Pichia PastorisX-33 酵母菌,经高浓度 ZeocinTM 筛选、表型鉴定、诱导表达及表达产物的鉴定,得到高效表达 vp2 基因的酵母工程菌 X-33/ pPICZα-A-VP2。工程菌 72h 培养上清的 SDS-PAGE 电泳与免疫印迹结果显示,vp2 基因表达产物大小约为 55 kDa,比预期的 41kDa 大。凝胶薄层扫描结合 Bradford 蛋白质总含量测定结果表明,表达产物占工程菌培养上清总蛋白的 28%,表达量可达 23 mg/ L。间接 ELISA 结果表明重组表达产物能够有效地区分法氏囊病病毒标准阳性与阴性血清。; 贾赟张素芳周斌徐学清曹瑞兵赵玉军陈溥言; 关键词：传染性法氏囊病病毒 PICHIA

PCR快速检测伪狂犬病病毒野毒感染被引量：31: 2004年; 根据已发表的伪狂犬病病毒(PrV)gE、gI基因的序列,设计并合成了一对引物,以PrV容A株细胞培养毒为模板,筛选最佳反应条件和试剂工作浓度,建立了区分PrV野毒株和疫苗弱毒的鉴别PCR方法.该方法能从PrV容A株(RA)、上海株(SH)、鲁A株(LA)中扩增出一条848bp的片段,但Bartha-K61株没有扩增出该片段.测序结果表明PCR扩增产物和方法的特异性.对正常细胞与其它6种引起猪病毒性疫病相关病毒进行检测,结果均为阴性,没有出现交叉反应.对PrV容A株细胞毒提取物DNA进行检测,其最低检出量为5pg.PCR对感染野毒的发病猪不同组织器官检测发现,淋巴结检出率最高,依次为脾、脑(海马角)、肺、肾、肝等.对2003～2004年期间江苏、浙江、安徽、福建、上海等省市的37个大中型猪场送检的172份病料进行PCR检测病料阳性率为20.34%(35/172),猪场阳性率为40.54%(15/37).实验结果表明所建立的PCR技术可用于伪狂犬病野毒感染的快速鉴定和流行病学调查.; 周斌苏鑫铭张素芳贾赟曹瑞兵陈溥言; 关键词：伪狂犬病毒 PCR

猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪细小病毒混合感染的流行病学调查被引量：68: 2004年; 根据GenBank上发表的PRRSVORF7、PPVVP2及PCV的基因组序列设计合成引物,建立了分别用于检测PRRSV、PPV和PCV的RT-PCR、PCR及复合PCR方法。应用建立的复合PCR方法对送检的127份病料进行了PCV的检测,对鉴定为PCV2阳性的67份病料再分别进行PRRSV和PPV的检测,以确定猪群中PCV2与PRRSV和/或PPV混合感染情况,结果表明,35份样品表现为PRRSV与PCV2混合感染,占样品总数的52.3%;18份样品表现为PCV2与PPV混合感染,占26.9%。另外,还有一定比例的三重感染,共5个样品,占7.5%。由此可见,猪群中PCV2与PRRSV及PPV混合感染比较普遍。; 贾赟芦银华张素芳周斌陈溥言; 关键词：猪圆环病毒2型猪繁殖与呼吸综合征病毒猪细小病毒

传染性腔上囊病病毒HN01超强毒株VP2基因的克隆和序列分析被引量：1: 2004年; 根据GenBank中登录的传染性腔上囊病病毒(IBDV)标准强毒株52 70株基因组序列,设计并合成了1对扩增IBDVVP2基因的特异性引物。以IBDV超强毒分离株HN01感染发病鸡腔上囊组织中提取的病毒RNA为模板,用RT PCR扩增出了1.45kb的cDNA产物,将扩增的IB DVHN01株VP2基因克隆于pMD18 T载体上,获得了pMD18 T VP2重组质粒。将IBDVHN01株VP2基因序列测定结果与已发表的其他IBDV毒株VP2基因序列进行分析比较,绘出系统进化树。结果表明,HN01株与欧洲超强毒株UK661、日本超强毒株OKYM、香港超强毒株HK46等非常相似,而与经典强毒株、弱毒株和变异株相差较大。; 贾赟王旭东赵玉军陈溥言; 关键词：传染性腔上囊病病毒 VP2基因克隆

传染性法氏囊病病毒VP_2基因的真核表达载体的构建及表达: 2004年; 根据GenBank发表的传染性法氏囊病病毒 (IBDV) 5 2 70株VP2 基因序列 ,设计合成了 1对特异扩增IBDVVP2 基因的引物。以IBDV超强毒河南分离株HN0 1感染发病鸡法氏囊组织中提取病毒RNA来制模板 ,利用RT PCR扩增出了 1 .4kb的VP2 基因 ,将其克隆到pIREShyg载体上 ,构建了pIRES VP2 真核表达载体。然后通过磷酸钙共沉淀法转染CHO细胞 ,通过潮霉素筛选得到阳性克隆 ,间接免疫荧光实验 (IFA)鉴定VP2 在CHO细胞中的表达 ,并用RT PCR的方法从转录水平证实VP2 在CHO k1细胞中的表达 ,最终建立了CHO VP2; 贾赟张素芳陈溥言赵玉军; 关键词：传染性法氏囊病病毒 VP2基因真核表达潮霉素

Magainin和cecA-mil抗菌肽基因的密码子优化及在毕赤酵母中的高效表达被引量：36: 2004年; 选用毕赤酵母偏爱密码子 ,设计合成了新型抗菌肽基因。所合成的magainin基因和cecA mil杂合肽基因全长分别为 1 0 1bp和 60bp ,并在其N端引入kex2裂解位点 ,以保证表达抗菌肽具有天然N端。其中 ,cecA mil杂合肽基因根据cecropinAN端第 1～ 7个氨基酸残基、melittinN端第 5～ 1 2个氨基酸残基所设计合成。基因分别克隆入pPICZα A质粒 ,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα A mag和pPICZα A CM。在AOX1 (醇氧化酶 )启动子调控下 ,类似天然抗菌肽大小的magainin及cecA mil蛋白获得分泌表达 ,其表达量分别为 1 0 5mg L和 1 1 8mg L。初步抑菌活性测定 ,显示两者对金黄色葡萄球菌及E .coliDH5α有较好的抑杀活性。; 张素芳贾赟蔡梅红仇妍虹陈溥言; 关键词：抗菌肽分泌表达毕赤酵母

种公猪精液中猪瘟和蓝耳病病毒混合感染的快速检测被引量：10: 2005年; 参考GenBank公布的猪蓝耳病病毒(PRRSV)VL 2332株、LV株以及猪瘟兔化弱毒(CSFV)C株的基因序列,各设计合成了一对引物,建立了在相同PCR扩增条件下能同时检测PRRSV和CSFV的RT-PCR方法.对2003～2004年期间江苏、浙江、安徽、福建、上海等省市的17个大中型猪场送检的186份种公猪精液进行了检测,结果18份呈PRRSV阳性,24份呈CSFV阳性,其中有11份为PRRSV和CSFV的混合感染,约占送检精液样品的5.91%.试验结果表明,所建立的RT-PCR方法可用于精液中这2种野毒感染的快速鉴定和分子流行病学调查.; 周斌吴增坚贾赟陈溥言; 关键词：精液猪瘟病毒猪蓝耳病病毒

杂合抗菌肽cecA-mil的改造及在毕赤酵母中的分泌表达: 参照毕赤氏巴斯德酵母(Pichia pastoris)偏好密码子,改造并化学合成杂合抗菌肽cecA-mil基因,改造后的cecA-mil基因克隆到pPICZα-A载体中,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-CM,...; 张素芳曹瑞兵贾赟周斌陈溥言; 关键词：分泌表达抑菌活性抗菌谱; 文献传递

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贾赟

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