赵永刚
- 作品数：123 被引量：662H指数：14
- 供职机构：中国动物卫生与流行病学中心更多>>
- 发文基金：青岛市科技发展计划项目国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学经济管理更多>>
- 貂、狐、貉源犬瘟热病毒分离株H和N基因的遗传多样性分析被引量：10
- 2007年
- 为研究鼬科动物犬瘟热病毒（CDV）毒株的变异特性,对来自不同地区的貉、狐、貂的5个CDV分离株（其中HD-m、LN-m为貂源,HTp-r、THD1-r为貉源,HB-f为狐源）和1个CDV国内弱毒疫苗株（vCh）的N基因和部分H基因进行了核苷酸测序,并构建系统发生树。结果表明,5个分离株之间H基因核苷酸序列同源性均达到97.5%以上,而N基因为94.5%-99.8%。vCh与5个分离株的H基因和N基因核苷酸序列同源性普遍较低（H基因：90.5%-91.8%;N基因：90.9%-93.5%）,而与国外疫苗株vCon和vOnder的H基因核苷酸同源性达96.8%和97.2%。分离株之间H蛋白氨基酸同源性差别不大（97.1%-100%）,而N蛋白氨基酸同源性差别较大（91.6%-100%）。5个CDV分离株与vCh疫苗株H蛋白和N蛋白同源性均普遍较低,H蛋白为89.7%-91.8%,N蛋白为92.8%-96.8%。vCh与vOnder、vCon有很高的同源性,其H蛋白氨基酸同源性分别为97.1%和95.6%,vCh与vOnder N蛋白氨基酸同源性达97.3%。结果显示,最近犬瘟热的流行和免疫失败现象的发生与国内所用疫苗毒株和野毒株的遗传关系甚远有关。
- 王君玮姜平王志亮张维李林赵永刚
- 关键词：犬瘟热病毒H基因N基因同源性
- 表达非洲猪瘟病毒CD2v蛋白重组腺病毒的构建及其吸附红细胞特性的研究被引量：1
- 2021年
- 为构建表达非洲猪瘟病毒(ASFV)CD2v蛋白的复制缺陷型重组腺病毒,本研究将ASFV EP402R基因融合猪泛素(Ub)基因,并经密码子优化后整合至人复制缺陷性5型腺病毒(Ad5)骨架质粒,经Pac I酶切线性化后转染293A细胞,拯救重组腺病毒(Ad5-CD2vUb-YH),结果显示,在转染8 d后出现典型细胞病变,且经测序鉴定显示插入片段与预期一致,表明拯救出一株重组腺病毒Ad5-CD2vUb-YH。利用Adeno-X快速滴度试剂盒测定F1~F3代Ad5-CD2vUb-YH的滴度,结果显示F1~F3代Ad5-CD2vUb-YH的滴度分别为1.36×10^(8)IFU/mL、1.47×10^(8)IFU/mL、2.16×10^(8)IFU/mL。利用直接免疫荧光试验(DFA)和western blot对F3代Ad5-CD2vUb-YH在Vero细胞中CD2v蛋白的表达进行鉴定,DFA鉴定结果显示感染Vero细胞的Ad5-CD2vUb-YH能与V5-FITC抗体特异性结合,细胞质内呈现特异性绿色荧光信号;Western blot鉴定结果显示感染Vero细胞的Ad5-CD2vUb-YH能与V5-HRP抗体和ASFV阳性血清均可进行特异性反应,在约102 ku和31 ku处均可见两条特异性条带,以上结果均表明CD2v蛋白得到了有效表达;进一步利用蛋白质谱对CD2v蛋白位置的胶块进行肽段序列测定并分析,结果显示其肽段序列与数据库中ASFV CD2v蛋白氨基酸序列匹配度为11%。对F3代Ad5-CD2vUb-YH感染293A细胞后吸附猪红细胞的能力进行鉴定,结果显示,Ad5-CD2vUb-YH表达的CD2v蛋白具有吸附红细胞的特性。本研究首次获得了一株重组腺病毒Ad5-CD2vUb-YH,其表达的CD2v蛋白与ASFV的CD2v蛋白特性完全一致,为ASFV CD2v蛋白吸附红细胞功能域的研究和ASFV重组腺病毒载体疫苗的研制奠定了基础。
- 常星胡永新周昊赵永刚赵永刚张永强戈胜强王建琳
- 关键词：非洲猪瘟病毒腺病毒载体
- 一种羊痘病毒属病毒通用Cycleave荧光PCR检测方法
- 本发明提供一种可同时检测羊痘病毒属牛结节性皮肤病、山羊痘与绵羊痘的Cycleave荧光PCR引物对、探针及应用该引物对和探针的检测方法。本发明所提供的引物对和探针组，其正向引物的序列为SEQID NO：1；反向引物的序列...
- 南文龙陆游陈义平吴晓东王永杰哈达特木尔巴根巩明霞李林张永强赵永刚屈海龙邹艳丽张雨初王志亮
- 文献传递
- 表达非洲猪瘟病毒P72蛋白复制缺陷型重组腺病毒的构建及鉴定被引量：11
- 2019年
- 本研究旨在构建能够表达非洲猪瘟病毒(ASFV)P72蛋白的缺陷型重组腺病毒。参考ASFV China-SY18株的基因序列,合成B646L基因。先将合成的B646L基因通过TOPO连接克隆到过渡载体pENTR/D-TOPO中;再将插入B646L基因的过渡载体pENTR/D-TOPO-ASFV-P72与pAd/CMV/V5-DEST腺病毒骨架载体进行重组,得到pAd-ASFV-P72重组质粒;重组质粒经PacⅠ酶切线性化后转染293A细胞,连续传代后获得重组腺病毒。结果表明,获得的Ad5-ASFV-P72重组腺病毒的滴度为2.53×10^9 IFU·m^L^-1;经免疫荧光方法及Western blot鉴定ASFV-P72蛋白在Vero细胞中成功表达,且能够与ASFV标准阳性血清发生特异性反应。本研究成功获得能够表达ASFV P72蛋白的重组腺病毒Ad5-ASFV-P72,不仅为ASFV多基因重组腺病毒载体疫苗的研制奠定了一定基础,还为ASFV相关血清学诊断方法的建立提供了安全有效的抗原。
- 胡永新赵永刚张永强刘拂晓樊晓旭吴晓东王志亮
- 关键词：非洲猪瘟病毒复制缺陷型腺病毒
- 西班牙非洲猪瘟根除计划的经验与借鉴被引量：34
- 2016年
- 非洲猪瘟（African swine fever,ASF）于1921年由Montgomer[y1]首次报道。1928年,Steyn等[2]发现该病也在南非出现。此后有报道称,1933年到1934年发生于南非的非洲猪瘟疫情共涉及11 000头猪,其中8 000多头死亡,2 000多头销毁,只有862头存活,其严重程度可想而知[3]。该病发现的早期只限流行于东非和南非部分地区,而在1957年,该病从安哥拉传入葡萄牙的里斯本,虽然很快被扑灭,但在1960年该地区又暴发疫情,并在亚平宁半岛广泛流行。
- 戈胜强孙成友吴晓东张志城张永强赵永刚梅凝香刘华雷王志亮
- 关键词：非洲猪瘟疫苗
- 四川猪链球菌Ⅱ型分离株生物学特性的初步研究被引量：3
- 2005年
- 猪链球菌Ⅱ型是导致许多国家猪链球菌病的主要病原,自90年代晚期江苏发生猪链球菌Ⅱ型感染 以来已成为我国引起人畜共患病的一种重要的新病原菌。最近在四川省部分地区发生了不明原因的猪源人畜 共患病,且具有较高的死亡率。我们从病死猪的病料中成功分离到三株猪链球菌分离株,经革兰氏染色、生化试 验、血清凝集试验和PCR鉴定,最终证实为猪链球菌Ⅱ型。通过对其毒力因子进行鉴定,结果发现MRP和EF 均为阳性。进一步的药敏试验证实:分离菌株对氨苄青霉素、先锋霉素Ⅵ、羧苄青霉素、复方新诺明、头孢肤肟 等抗菌药高度敏感。
- 刘华雷王君玮赵永刚赵云玲范伟兴陈义平王志亮
- 关键词：毒力因子MRPEF分离株生物学特性
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒双基因多组合DNA疫苗的构建被引量：1
- 2009年
- 本实验根据PRRSV结构蛋白的特性和IFNγ及IL-2这两种细胞因子的特性,构建表达PRRSVGP4-GP5、GP5-M、GP5-N、GP5-IFNγ、GP5-IL-2、N-IFNγ、N-IL-2的重组质粒。这些重组质粒在真核细胞中得到了表达。用这些真核表达质粒可以免疫小猪,通过检测其对猪体免疫应答的诱导能力和接种后动物对PRRSV的抵抗力来对基因疫苗的效能进行研究,以期筛选到有效的基因疫苗并为今后进一步的研究提供思路和理论基础。
- 赵永刚薛强周艳君仇华吉萨仁高娃童光志申之义
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒基因免疫重组质粒
- 小反刍兽疫病毒F蛋白抗原位点的克隆与表达
- 2009年
- 目的表达小反刍兽疫F蛋白的抗原位点用于检测与预防。方法用DNAStar分析小反刍兽疫的抗原位点,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中PPRV的F基因的抗原位点并克隆到原核表达载体PET-28b中,最后用PCR、酶切和测序分析对重组质粒进行鉴定;将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中,经ITPG诱导表达PPRVF基因的抗原位点;用SDS-PAGE和Western-Blotting分析抗原位点蛋白的表达。结果将RT-PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段;对重组质粒PET-28b-F35-111(pZLW013)、PET-28b-F143-485(pZLW014)和PET-28b-F323-485(pZLW015)酶切后,均出现与预期相符的片段;DNA测序表明插入的片段的序列与小反刍兽疫F基因的抗原位点序列分别完全一致,其大小分别为251bp、1053bp和514bp;将重组表达的蛋白经SDS-PAGE和West-ern-Blotting分析,证明小反刍兽疫抗原位点F35-111没有表达、抗原位点F143-485和F323-485得到表达。结论成功表达了PPRVF基因的两段抗原位点蛋白,为日后检测与预防工作奠定了基础。
- 赵永刚田晓灵宋厚辉王志亮吴树清
- 关键词：小反刍兽疫病毒F基因原核表达抗原位点
- 人-猪链球菌2型2005四川分离株的鉴定和耐药特性研究
- 本文对四川省资阳、内江等地猪群和人暴发的急性败血型链球菌感染进行了分析，确诊为猪链球菌2型感染，菌株命名为SSsc0501。对分离的菌株SSsc0501进行了药物敏感性实验，为该病的防控提供了重要技术依据。
- 王君玮王志亮赵永刚赵云玲郑东霞范伟兴刘华雷
- 关键词：猪传染病猪链球菌
- 2018-2020年国际马病疫情概况及防控思考被引量：1
- 2021年
- 为了解近3年来国际马病疫情发生情况,分析流行趋势,本研究根据农业农村部国际疫情动态信息,归纳总结了2018—2020年国际马病疫情流行情况,拟为未来我国马病防控提供参考。疫情分析结果显示,近3年来国际马病疫情发生频繁,其中马流感、西尼罗热河、非洲马瘟、西尼罗河热等马类疫情发生较多。我国尚未报告的西尼罗河热、非洲马瘟等疫病对我国有较高的输入风险。此外,不能忽视西尼罗河热、马鼻疽等人兽共患病对于公共卫生安全的影响。建议应根据疫病流行形势的变化,及时调整相应防控措施。
- 赵明赵永刚戈胜强张严琦马帅吴晓东王志亮
- 关键词：马流感西尼罗河热
