陆田田
- 作品数：12 被引量：30H指数：3
- 供职机构：广东医学院更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 人肥大细胞羧肽酶分泌型真核表达载体的构建被引量：1
- 2008年
- 目的:构建人肥大细胞羧肽酶(hMC-CP)分泌型真核表达载体pcDNA3.1/CP。方法:用免疫球蛋白κ链的信号肽序列置换hMC-CP自身的信号肽序列,设计并合成引物,以hMC-CP基因为模板,扩增带有分泌信号肽的hMC-CP基因,DNA测序鉴定正确后,将PCR扩增产物定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1,通过酶切和DNA测序进行鉴定。结果:琼脂糖凝胶电泳显示PCR扩增出一条特异条带,酶切鉴定和序列测定结果表明大小为1269bp的DNA片段插入表达载体。结论:成功构建了hMC-CP分泌型真核表达载体,为进一步制备真核表达的重组hMC-CP奠定了基础。
- 陆田田陈章权
- 关键词：信号肽
- 鼠抗人肥大细胞羧肽酶截短体抗体的制备与鉴定
- 2008年
- 目的建立检测人肥大细胞羧肽酶(hMCCP)的双抗体夹心ELISA法,以hMCCP截短体免疫小鼠,制备鼠源性多克隆抗体。方法PCR法扩增hMCCP-N118基因片段,克隆至pET28原核表达载体,转化大肠杆菌Rosseta(DE3)。用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白的表达,用Ni2+-NTA凝胶亲和层析纯化目的蛋白。用纯化重组蛋白免疫小鼠,制备抗hMCCP-N118抗体。间接ELISA测定抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性。结果hMCCP截短体在大肠杆菌中高效表达,用纯化的重组蛋白免疫小鼠,获得了鼠抗hMCCP-N118抗体,效价达1∶6 400,该抗体能特异结合hMCCP。结论成功地制备了效价高、特异性好的鼠抗hMCCP截短体抗体。
- 陈章权陆田田黄震梁晓东
- 关键词：小鼠
- 自然杀伤T细胞配基的研究进展被引量：3
- 2009年
- 自然杀伤T细胞（NKT）在抗感染、抗肿瘤及自身免疫病中起保护作用，NKT细胞配基对NKT细胞的激活起关键作用。近年来NKT细胞配基的分离、鉴定、结构与功能研究取得了较大进展，本文就已鉴定的内源性和外源性NKT细胞配基的结构及其生物学功能研究进展予以综述。
- 陆田田黄震陈章权
- 关键词：CD1D自然杀伤T细胞配基
- 橡胶延长因子基因的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：2
- 2008年
- [目的]制备橡胶延长因子重组蛋白及其多克隆抗体。[方法]用RT-PCR法扩增橡胶延长因子(rubber elongation factor,REF)编码区基因,将其克隆到原核表达载体pDEST17中,转化大肠杆菌BL21-AI,用L-阿拉伯糖诱导重组蛋白的表达,并采用亲和层析法纯化重组蛋白,以之为免疫原免疫小鼠制备多克隆抗体,并用ELISA和W estern blot对抗体效价和特异性进行鉴定。[结果]高效表达和纯化了橡胶延长因子重组蛋白,用其免疫家小鼠,获得了高效价的特异性多克隆抗体,W estern blot检测显示该抗体可识别胶乳中的天然橡胶延长因子。[结论]成功获得橡胶延长因子重组蛋白,制备了效价高、特异性好的鼠抗橡胶延长因子抗体,为进一步橡胶延长因子及其他橡胶粒子膜蛋白的生物学功能研究奠定了基础。
- 陈章权吴坤鑫梁晓东黄震陆田田
- 关键词：基因抗体
- 鼠抗人肥大细胞类糜蛋白酶N端片段抗体的制备与鉴定
- 2008年
- 目的:在大肠杆菌中表达人肥大细胞类糜蛋白酶(hMCC)N端片段(hMCC-N),并制备其鼠源性多克隆抗体。方法:通过PCR法扩增hMCC-N端基因片段,将其克隆至pMAL-c2x原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白的表达,通过Amylose树脂亲和层析纯化目的蛋白,以纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备鼠抗hMCC-N端片段多克隆抗体,并以间接ELISA测定抗体效价,以Westernblot鉴定抗体的特异性。结果:PCR扩增得到360bp的hMCC-N端基因片段,克隆入表达载体pMAL-c2x,构建了与标签蛋白麦芽糖结合蛋白基因融合表达载体pMAL-c2x/hMCC-N,融合蛋白在大肠杆菌中得到了稳定表达,并经亲和层析,纯化出可溶性的重组蛋白,用其免疫小鼠,获取了鼠抗hMCC-N端片段的多克隆抗体,ELISA结果显示效价达1∶12800,Westernblot分析表明该抗体能特异结合hMCC。结论:成功地制备了效价高、特异性较强鼠抗hMCC-N端片段抗体,为进一步建立hMCC的ELISA检测方法打下了良好的基础。
- 陈章权黄震梁晓东陆田田
- 关键词：肥大细胞糜蛋白酶抗体
- 重组人psoriasin蛋白的制备与鉴定
- 2008年
- 目的制备鉴定人psoriasin重组蛋白,为其作用机制的深入研究奠定基础。方法PCR法扩增人psoriasin基因,克隆至pET28原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)。用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,用Ni2+-NTA凝胶亲和层析纯化目的蛋白,用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot法对重组蛋白的相对分子质量、纯度和免疫原性进行分析。结果psoriasin编码区基因扩增得到一306 bp特异条带,BLAST分析显示碱基无突变,阅读框架正确;SDS-PAGE显示纯化出相对分子质量为14 kD的重组psoriasin,纯度>95%;Western blot显示该重组蛋白能与抗人psoriasin单克隆抗体发生特异性反应。结论psor-iasin重组蛋白成功制备,该蛋白具有较好的免疫活性,可用于进一步的研究。
- 陈章权梁晓东陆田田黄震
- 关键词：PSORIASIN纯化
- 兔抗人肥大细胞羧肽酶抗体的制备与鉴定被引量：10
- 2007年
- 目的:以原核表达的人肥大细胞羧肽酶(hMC-CP)免疫家兔,制备兔抗hMC-CP多克隆抗体并进行鉴定。方法:在大肠杆菌中诱导表达重组hMC-CP,经Ni-NTA-Agarose柱层析纯化后,以其为免疫原制备兔抗hMC-CP多抗,并以间接ELISA测定抗体效价,以Western blot鉴定抗体的特异性。结果:成功地表达并纯化了hMC-CP,以纯化的重hMC-CP组免疫家兔成功制备了兔抗hMC-CP抗体,ELISA结果显示效价达1∶6 400,Western blot分析表明该抗体能特异结合hMC-CP。结论:以纯化的重组hMC-CP为免疫原,成功地制备了效价、特异性较强兔抗hMC-CP抗体,为进一步建立简便的hMC-CP检测方法及进一步研究hMC-CP生物学功能打下了良好的基础。
- 陈章权何素辉陆田田何天文何韶衡
- 关键词：抗体
- 人肥大细胞类糜蛋白酶基因的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定被引量：5
- 2007年
- 目的:克隆人肥大细胞类糜蛋白酶cDNA,并进行原核表达,制备重组蛋白免疫家兔,制备兔抗类糜蛋白酶多克隆抗体。方法:用RT-PCR技术克隆类糜蛋白酶cDNA,用Gateway技术构建表达载体,以大肠杆菌为宿主,用L-阿拉伯糖诱导重组肥大细胞类糜蛋白酶的表达,经Ni-NTA-Agarose柱层析纯化后,以其为免疫原制备兔抗类糜蛋白酶多抗,并以间接ELISA测定抗体效价,以Westernblot鉴定抗体的特异性。结果:成功地克隆了人肥大细胞类糜蛋白酶cDNA,并在大肠杆菌BL21-AI中表达成功,用纯化的重组类糜蛋白酶为免疫原,免疫家兔制备了兔抗类糜蛋白酶抗体,ELISA结果显示效价达1:12800,Western blot分析表明该抗体能特异结合类糜蛋白酶。结论:以纯化的重组类糜蛋白酶为免疫原,成功地制备了效价及特异性较高的兔抗类糜蛋白酶抗体,为进一步建立简便的类糜蛋白酶检测方法及研究类糜蛋白酶生物学功能奠定了良好的基础。
- 陈章权黄震何天文陆田田梁晓东何韶衡
- 关键词：抗体
- CD1d分子的结构与功能被引量：2
- 2008年
- CD1d是CD1家族中的一员,其结构类似MHCI类分子,主要表达于抗原提呈细胞、肝细胞和肠道上皮细胞等细胞表面。CD1d分子提呈糖脂抗原,在抗原装载、胞内运输及其加工处理等方面独具特色,并在感染性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤等疾病的发生发展过程中具有重要作用。
- 陆田田黄震陈章权
- 关键词：CD1D抗原提呈
- 兔抗人CD1d分子α3结构域抗体的制备与鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的:制备兔抗人CD1d分子α3结构域(hCD1d-α3)多克隆抗体。方法:PCR法扩增出人hCD1d-α3编码区基因,将其克隆入原核表达载体pET28中,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白的表达,用Ni2+-NTA Agarose亲和层析法纯化重组蛋白,以之为免疫原免疫家兔,制备多克隆抗体,并用ELISA、Western blot及免疫组织化学法检测抗体。结果:成功构建了hCD1d-α3原核表达载体pET28/h CD1d-α3,高效表达并纯化hCD1d-α3蛋白,间接ELISA检测所制备抗体的效价为1∶6400,Western blot显示该抗体能与hCD1d特异结合,免疫组织化学法检测结果表明该抗体识别人小肠组织中的天然hCD1d。结论:通过制备重组hCD1d-α3蛋白为免疫原,免疫家兔,成功地制备了效价高、特异性好的抗hCD1d-α3多克隆抗体。
- 陈章权黄震梁晓东何天文陆田田
- 关键词：CD1D抗体
