顾全
- 作品数：13 被引量：43H指数：3
- 供职机构：广州金域医学检验中心有限公司更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家标准化管理委员会项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- PCR酶切分型快速鉴定土壤和环境水中军团菌的方法
- 本发明公开了一种PCR酶切分型快速鉴定土壤和环境水中军团菌的方法，包括设计一对引物和一种限制性内切酶、配制CTEN基因组DNA提取液、提取DNA、PCR扩增、电泳、酶切分析等步骤。基于16S rRNA基因序列中的一个嗜肺...
- 赵利伟胡朝晖朱庆义顾全
- 文献传递
- 荧光原位杂交技术在军团菌研究中的应用与进展被引量：2
- 2013年
- 军团菌是一种兼性胞内寄生菌，可引起人类军团菌病与庞蒂亚克热。目前已确认军团菌有58个种，70多个血清型，接近20个种有临床分离报道，其中嗜肺军团菌（Legionella phenomenon）为引起人类军团菌病的主要病原体。公共场所集中空调系统冷却水中极易滋生军团菌，而引起军团菌病的大规模暴发。军团菌作为一类苛养性致病菌，如何对其进行快速鉴定检测一直是微生物检验的难题。
- 顾全赵利伟朱庆义
- 关键词：军团菌荧光原位杂交
- 长滩军团菌的荧光原位杂交检测试剂盒
- 本发明提供了一种检测长滩军团菌的荧光原位杂交试剂盒，其包括探针[FITC]-5’-CGTCCTCAGACATCATCC(SEQ ID NO：1)。
- 朱庆义顾全胡朝晖严慧
- 文献传递
- 基于细菌16SrRNA基因的PCR扩增与测序分析在临床不常见菌鉴定中的应用被引量：28
- 2012年
- 目的探讨细菌16SrRNA基因的广谱PCR扩增与测序分析在临床分离的少见病原菌的鉴定及分类中的价值。方法收集2010年12月至2011年9月来自7家不同医院和机构，常规方法难以鉴定或具有特殊表型的少见菌48株，以及仪器法连续监测报警阳性、但二次传代无细菌生长的液体增菌培养瓶7个，采用细菌16S核糖体核糖核酸（rRNA）基因MicroSeq500试剂盒、通用引物27f-1492r、27f-1525r进行广谱PCR扩增及目的片段的基因测序。运用美国国立生物信息中心“基于局部比对算法的搜索工具（Blast）”，结合“具有法定分类学地位的原核生物名称目录（http：／／W^Ufir．bacterio．cict．fr／）”提供的分类学信息，比较待鉴定细菌与近缘种模式菌株基因序列的相似程度；参考美国临床与实验室标准化协会（CLSI）MM18-A的解释标准，以确定待鉴定细菌的种属及分类学位置。结果采用广谱PCR测定，7份假阳性血培养瓶中，2份扩增到细菌的16SrRNA基因，经序列分析鉴定均为肺炎链球菌。48株不同来源、不同种属的少见菌，均扩增到16SrRNA基因目的片段并成功测序，参考CLSIMM18-A的解释标准，35株（72．9％）直接鉴定到“种”，11株（22．9％）鉴定到“属”，另2株鉴定为可能的新属新种。进一步结合细菌的生化反应特征及其他管家基因序列分析结果，则可鉴定到“种”的细菌可增加到42株（87．5％），其中包括链杆菌、嗜二氧化碳噬纤维菌、玫瑰单胞菌、奴卡菌、弯曲菌、分枝杆菌等具有明确临床意义的少见菌，以及多株近十年内命名的新细菌，如小不动杆菌、富西亚分枝杆菌、黏液玫瑰单胞菌、Halomonasjohnsoniae等。此外，还发现了1个新亚型的胎儿弯曲菌。结论16SrRNA基因测序鉴定能明确提供细菌的遗传学信息，且无种属选择性，对临床少见菌、苛养菌、以及固体培养基不生长的�
- 陈茶屈平华顾全黄彬张伟铮穆小萍张磊陈默蕊王露霞鄂顺梅叶金艳唐小龙蓝锴罗强戴小波袁慧
- 关键词：聚合酶链反应细菌学技术
- 长滩军团菌荧光原位杂交探针的设计研究
- 2014年
- 目的设计一条特异性的长滩军团菌荧光原位杂交探针,并验证其特异性与敏感度,初步建立长滩军团菌的荧光原位杂交检测法。方法以长滩军团菌16S rRNA特异性位点设计杂交探针。在数据库中对探针序列进行特异性检验,优化反应条件,以军团菌标准菌株和环境分离菌株验证探针的特异性,并以模拟水样验证探针灵敏度。结果生物信息学分析表明,设计的探针LEG long序列与长滩军团菌16S rRNA序列完全配对,与其他军团菌种均存在1个碱基以上的错配。菌株验证实验证明LEG long探针可与长滩军团菌的标准菌株和环境分离株特异性杂交,与其他军团菌种和非军团菌属菌株无杂交信号。探针检测灵敏度可达1.49×103 CFU/ml。结论本研究设计的探针LEG long可用于长滩军团菌的高特异性和高灵敏度检测。
- 顾全胡朝晖赵利伟范晓姗严慧朱庆义
- 关键词：荧光原位杂交探针
- 海珠区集中空调冷却塔水嗜肺军团菌及rpoB基因分型分析
- 2014年
- 目的了解广州市海珠区公共场所集中空调冷却塔水的嗜肺军团菌污染状况。方法随机抽样采集36家公共场所集中空调冷却塔水85份,通过血清学凝集试验、实时荧光PCR技术对嗜肺军团菌菌株进行鉴定及rpoB基因测序分型分析。结果采集集中空调冷却塔水85份,分离得到嗜肺军团菌23株,阳性率27.1%,血清型别多样,以LP1和LP6型为主,分别占检出株数的34.8%(8/23)和26.1%(6/23),以rpoB基因序列分型得到种属鉴定结果。结论广州市海珠区集中空调系统嗜肺军团菌污染较严重,血清型别多样化,rpoB基因分型具有地区特异性。
- 李映霞顾全吴琪黄芳许少洪曾雅
- 关键词：集中空调嗜肺军团菌菌型分析RPOB
- 弹回引物鉴定军团菌属与嗜肺军团菌被引量：1
- 2015年
- 目的：设计一种弹回引物荧光PCR方法鉴定军团菌属和嗜肺军团菌。方法通过分析军团菌16S rRNA基因序列，采用生物信息学方法设计引物，优化实验条件，对方法的特异性、灵敏度进行评估，并对186株环境军团菌分离株与15份环境水样进行鉴定。结果经弹回引物检测，军团菌属菌株在85℃～86℃处有扩增子熔解峰，嗜肺军团菌在71℃处有探针结合区熔解峰，非军团菌未检测到熔解峰。弹回引物对标准菌株DNA与模拟水样灵敏度分别为1 ng／μl与（1×10^3～1×10^4）／ml。弹回引物对环境分离株验证实验中，成功鉴定了186株军团菌和44株嗜肺军团菌；对15份环境水样直接检测，检出12份军团菌属阳性水样与4份嗜肺军团菌阳性水样。结论弹回引物荧光PCR方法可用于军团菌属和嗜肺军团菌的鉴定，具有较高的特异性与灵敏度。
- 柳朔怡屈平华顾全
- 关键词：军团菌嗜肺军团菌荧光PCR
- 人工水和自然水环境中嗜肺军团菌mip基因分型
- 2014年
- 目的比较人工水体与自然水体环境中军团菌的mip基因差异。方法将2003-2008年间广州和新会两市水样中分离的121株嗜肺军团菌分为人工与自然水体环境分离株两组,分别对其mip基因进行系统进化树重建,基因多态性分析,分子方差分析与中性检验,并比较两种分离来源菌株的mip基因差异。结果 121株嗜肺军团菌mip基因按分离环境来源不均匀地分布在系统进化树的拓扑分支。人工水体环境分离株共有8个等位基因型,以等位基因1型为优势群,比例55.36%,自然水体环境分离株有11个等位基因型,以等位基因28型为优势群,比例40%。人工水体环境分离株的核苷酸多态性与平均核苷酸差异大于自然水体环境分离株。分子方差分析结果显示两种环境分离株mip基因差异占总体差异的14.43%。中性检验证明人工水体环境分离株的mip3′末端处,Tajima检验P<0.05,D值显著大于0。而自然环境分离株在此区域未见显著性差异。结论嗜肺军团菌mip基因在人工与自然水体环境分离株之间存在显著差异,这种差异可能来源于人工水体环境对嗜肺军团菌种群大小的影响或平衡选择作用。
- 顾全胡朝晖严慧赵利伟范晓姗朱庆义
- 关键词：嗜肺军团菌基因多态性
- 长滩军团菌的荧光原位杂交检测方法
- 本发明提供了一种检测水体或土壤中长滩军团菌的荧光原位杂交检测方法，包括使用探针[FITC]-5’-CGTCCTCAGACATCATCC(SEQ ID NO：1)进行荧光原位杂交检测。
- 顾全胡朝晖朱庆义严慧
- 文献传递
- PCR酶切分型检测军团菌试剂盒及其应用
- 本发明为公开了一种PCR酶切分型检测军团菌试剂盒，包括PCR反应液、酶切反应液、阴性对照及阳性对照。采用一对军团菌特异引物扩增16S rRNA基因上的区域，在该扩增片段存在一个嗜肺军团菌特异的酶切位点，通过一个PCR-酶...
- 朱庆义胡朝晖赵利伟顾全
- 文献传递
