黄超
- 作品数：10 被引量：18H指数：2
- 供职机构：中国热带农业科学院热带生物技术研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项海口市重点科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生理学化学工程更多>>
- hGH-双精氨酸C肽人胰岛素原基因的克隆表达及纯化研究被引量：1
- 2009年
- 旨在提高基因重组人胰岛素在大肠杆菌中表达的稳定性及表达包涵体蛋白的复性水平。在人胰岛素原N端前融合人生长素N端的一段序列来充当前导肽,同时将C肽设计为两个精氨酸,分10段合成长链寡核苷酸链,利用重叠延伸PCR技术(SOE PCR)扩增得到该基因片段。与表达载体PET-30a连接,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的融合蛋白采用Ni-NTA亲和层析纯化,纯化后的蛋白经复性、冻干等步骤后用胰蛋白酶,羧肽酶B双酶切再过DEAE Sepharose FastFlow阴离子交换柱,收集洗脱峰。对制备所得的胰岛素用SDS-PAGE,Western blot进行性质鉴定,及皮下注射小鼠测定生物活性。结果显示,目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了表达,表达产物以不溶性包涵体形式纯在,约占大肠杆菌总蛋白的30%。经Ni-NTA亲和层析得到的重组蛋白纯度为85%,DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换纯化得到单组分胰岛素。Western Blot显示制备所得的胰岛素具有胰岛素免疫原性,皮下给药注射小鼠活性测定表明具有明显的降血糖活性。获得了一种高效生产基因重组人胰岛素的方法,为研究胰岛素类似物奠定了前期基础同时也为今后探索胰岛素的非注射给药途径提供了原料。
- 胡兵黄超李文静邓柳红肖苏生张春发
- 关键词：重叠延伸PCR融合蛋白表达纯化活性测定
- 基于琼脂糖堆叠凝胶的蛋白电泳分离方法
- 本发明属生物技术领域，涉及一种基于琼脂糖堆叠凝胶的蛋白电泳分离方法，先配置凝胶缓冲液、电泳缓冲液，制作顶层胶盒，然后高浓度琼脂糖堆叠凝胶下层凝胶灌制、琼脂糖堆叠凝胶上层凝胶灌制，最后利用琼脂糖堆叠凝胶进行电泳分离蛋白。本...
- 仝征王丹黄超常丽丽彭存智徐兵强
- 文献传递
- 海南五指山美洲商陆抗病毒蛋白PAP-Ⅰ基因的原核表达及活性验证被引量：1
- 2016年
- 提取春季海南五指山美洲商陆叶片总RNA,利用RT-PCR技术获得c DNA,再根据Genbank上公布的PAP-Ⅰ基因序列设计引物扩增PAP-Ⅰ基因,并连接到p^(ET)-30a载体上进行表达,表达的产物以不溶的包涵体形式存在,经过变性、镍柱亲和层析纯化,纯化后的重组蛋白经过Western Blot验证表明该基因得到了正确表达,利用柱上循环复性后的重组PAP-Ⅰ蛋白经麦胚提取物转录/翻译偶联系统验证具有抑制蛋白质合成的活性。
- 黄超张丽丽邓柳红张春发
- 关键词：美洲商陆抗病毒蛋白原核表达
- 尖孢镰刀菌Six1d启动子的克隆及其在真菌分泌表达载体构建中的应用
- 2023年
- 前期研究中构建的真菌分泌表达载体p74HSP-EGFP可在真菌中表达目标蛋白,在真菌侵染并定殖植物的过程中分泌目标蛋白到植物中,从而验证目的基因的功能,但p74HSP-EGFP载体中驱动目的基因表达的毒素基因(toxin A,ToxA)启动子不是尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense, Foc)自身的启动子。为能在Foc中更有效地表达其自身基因,本研究从尖孢镰刀菌1号生理小种(Foc1)中克隆到高丰度表达的木质部分泌蛋白基因(secreted in xylem 1d, Six1d)的启动子,来替换p74HSP-EGFP载体中的ToxA启动子,并将新构建的真菌分泌表达载体命名为pSix1d74HSPG。为比较2个分泌载体的表达效率,本研究进一步将p74HSP-EGFP和pSix1d74HSPG载体转化尖孢镰刀菌热带4号生理小种(Foc TR4),获得的转化菌株分别在钾盐液体培养基(KK)中振荡培养5 d后,检测分泌到胞外的EGFP荧光强度和EGFP蛋白的表达量。结果显示,pSix1d74HSPG中Six1d启动子驱动的EGFP表达强度能够达到p74HSP-EGFP中ToxA启动子驱动的1.6~1.7倍,说明pSix1d74HSPG载体可代替p74HSP-EGFP载体在Foc中更高效分泌表达目的蛋白,为香蕉枯萎病抗感病分子机理研究提供重要的实验工具。
- 彭存智常丽丽王丹黄超徐兵强仝征
- 关键词：香蕉枯萎病分泌表达载体
- 一种高浓度琼脂糖电泳凝胶的制备方法及其应用
- 本发明属生物技术领域，涉及一种高浓度琼脂糖电泳凝胶的制备方法及其应用，将缓冲液、琼脂糖混合配置琼脂糖溶液，在蒸汽环境中于高温高压条件下进行溶解，得到琼脂糖溶胶，将玻璃板灌胶器预热后注入琼脂糖溶胶，插入梳子，室温下冷却凝固...
- 仝征彭存智常丽丽王丹黄超徐兵强
- 文献传递
- 盐芥叶片应答盐胁迫的蛋白质组学分析被引量：4
- 2022年
- 盐芥是研究耐盐机理的模式植物。为从蛋白质水平揭示盐芥响应盐胁迫的分子机制,本研究采用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术对不同NaCl浓度处理7 d的盐芥叶片进行差异蛋白质组学分析。结果表明,盐芥叶片中共鉴定到4607个蛋白质,其中281个蛋白质的表达丰度显著增加,95个蛋白质的表达丰度显著降低。盐胁迫差异表达蛋白质的KEGG代谢通路和蛋白质互作网络分析结果表明,促进植株光合作用可帮助盐芥适应低盐环境;抑制叶绿素和支链氨基酸合成、调控应激反应基因的表达是盐芥应对中盐环境的重要因素;而有效清除活性氧、提高渗透物质积累量和增加能量供应可能是盐芥耐受高盐环境的关键。本研究结果为揭示盐芥应答盐胁迫的分子响应机制提供了理论基础。
- 常丽丽彭存智王丹仝征黄超徐兵强
- 关键词：盐芥盐胁迫差异蛋白质ITRAQ
- 分光光度法测定蛹虫草子实体中硒的含量被引量：1
- 2012年
- 建立了氯酸钾-盐酸苯肼-变色酸分光光度法测定蛹虫草子实体中硒含量的方法,并对其精密度、准确度进行研究。在测定范围内,该方法的线性相关系数R2=0.9991,加标回收率为92%～96%,硒含量相对标准偏差是1.8%,该方法用于蛹虫草子实体中硒含量的测定,结果良好,操作方便,成本低,为富硒蛹虫草菌株筛选和生产上的应用提供了简便易行的硒含量检测方法。
- 邓柳红唐权罗明武黄超张春发
- 关键词：蛹虫草催化光度法硒
- 一种高浓度琼脂糖电泳凝胶的制备方法及其应用
- 本发明属生物技术领域，涉及一种高浓度琼脂糖电泳凝胶的制备方法及其应用，将缓冲液、琼脂糖混合配置琼脂糖溶液，在蒸汽环境中于高温高压条件下进行溶解，得到琼脂糖溶胶，将玻璃板灌胶器预热后注入琼脂糖溶胶，插入梳子，室温下冷却凝固...
- 仝征彭存智常丽丽王丹黄超徐兵强
- 紫万年青的核型分析被引量：11
- 2010年
- 本文采用直接敲片法制作紫万年青植物染色体标本,通过体细胞染色体计数确定其染色体数目为12条,核型分析表明紫万年青植物染色体总长度为57.35μm,全组染色体平均长度9.56μm,其核型公式为K(2n)=12=3m+3Sm。同时通过观察、测量发现其染色体绝对长度变异范围为11.36～7.72μm,其相对长度组成为2n=12=6M2+6M1;最长染色体与最短染色体之比为1.47:1,臂比的变异范围为1.01～2.56,臂大于2的染色体占全组染色体的33.33%,属于"2A"类型。另一方面,间期附加核型特征确定紫万年青属于复杂染色中心型。本研究将对紫万年青植物的起源、系统演化及品种改良等提供必要的细胞遗传学依据。
- 王胜张春发邓柳红易小平肖苏生胡兵黄超庄南生
- 关键词：染色体核型
- 基于琼脂糖堆叠凝胶的蛋白电泳分离方法
- 本发明属生物技术领域，涉及一种基于琼脂糖堆叠凝胶的蛋白电泳分离方法，先配置凝胶缓冲液、电泳缓冲液，制作顶层胶盒，然后高浓度琼脂糖堆叠凝胶下层凝胶灌制、琼脂糖堆叠凝胶上层凝胶灌制，最后利用琼脂糖堆叠凝胶进行电泳分离蛋白。本...
- 仝征王丹黄超常丽丽彭存智徐兵强
