丁长才
- 作品数：5 被引量：13H指数：3
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金广东省教育部产学研结合项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 非促分裂haFGF对H_2O_2损伤的人RPE细胞的保护作用被引量：4
- 2008年
- 目的研究非促分裂人酸性成纤维细胞生长因子（nm-haFGF）对H2O2损伤的人视网膜色素上皮（RPE）细胞的保护作用。方法利用H2O2建立人RPE细胞氧化损伤模型,采用MTT法检测RPE细胞的存活率,核染色观察RPE细胞的核形态,流式细胞仪检测RPE细胞死亡率以及Western blot检测bcl-2的表达。结果nm-haFGF预处理可以提高H2O2损伤的REP细胞的存活率;nm-haFGF质量浓度在0-10mg/L的范围内,RPE细胞存活率从67.4%上升至92%;nm-haFGF刺激后,RPE细胞的bcl-2表达增加。结论nm-haFGF对H2O2氧化损伤RPE的细胞具有保护作用,并在一定范围内呈质量浓度依赖性。其保护机制可能是通过bcl-2的增加而产生抗凋亡作用。
- 湛敏黄亚东丁长才张敏静朱德勇苏志坚
- 关键词：视网膜色素上皮细胞
- 非促分裂酸性成纤维细胞生长因子抑制由放线菌素D诱导的Balb/c3T3细胞的凋亡
- 2006年
- 目的探讨非促分裂酸性成纤维细胞生长因子(nmaFGF)对放线菌素D(ActD)诱导Balb/c3T3成纤维细胞凋亡的保护作用。方法利用放线菌素D诱导3T3细胞凋亡的模型,将实验分为空白对照组、ActD处理组和nmaFGF处理组,采用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪两种分析方法测定nmaFGF对3T3细胞凋亡的影响。并利用Western免疫印迹检测nmaFGF作用于3T3细胞后Akt信号通路中p-Akt分子的表达。结果空白对照组的凋亡率为1.53%;ActD处理组3T3细胞发生明显的细胞凋亡,凋亡率为33.83%;而nmaFGF处理组的细胞凋亡受到显著抑制,凋亡率分别下降到18.97%,15.17%和12.83%,凋亡下降率分别为14.86%,18.66和21.00%。Western半定量检测结果显示,在0.1～10μg/ml的浓度下,随着nmaFGF剂量的增加,p-Akt的表达水平有所增加,3T3细胞的凋亡率随之下降。结论nmaFGF可以通过AKT途径显著抑制由放线菌素D诱导的Balb/c成纤维细胞的凋亡。
- 吴志玲苏志坚李校堃宋江南李文君肖健丁长才
- 关键词：BALB/C3T3成纤维细胞AKT凋亡
- 一种抗菌肽和aFGF融合蛋白的构建和表达被引量：6
- 2006年
- 利用PCR技术扩增出带有凝血酶Xa因子切割位点的天蚕素蜂毒素杂合肽和aFGF的融合基因,插入大肠杆菌表达载体pET-3c中,构建出表达质粒pET-aF-CM,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,氨苄青霉素抗性筛选重组转化子。IPTG诱导4h后,以包涵体形式表达的融合蛋白约占菌体总蛋白的17%。将包涵体溶解后透析复性,并利用肝素亲和层析纯化,得到电泳纯的融合蛋白。Western blot分析表明,该蛋白能与aFGF抗体产生免疫反应。MTT法检测显示,融合蛋白具有促3T3Bal/b细胞分裂活性,其比活为1.471×106IU/mg。利用凝血酶Xa因子裂解融合蛋白,可以获得抗菌肽和含凝血酶Xa因子裂解序列的aFGF蛋白。分子筛回收含杂合抗菌肽,抑菌活性检测表明其对大肠杆菌K12D31具有明显抑菌活性。微量稀释法检测结果表明,回收的抗菌肽对大肠杆菌DH5α、大肠杆菌K12D31、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和绿脓杆菌的MIC分别达6.25μg/ml、10μg/ml、2.5μg/ml、1.25μg/ml、0.625μg/ml和5μg/ml。
- 丁长才苏志坚王艳萍周权男李校堃
- 关键词：人酸性成纤维细胞生长因子融合蛋白
- 融和蛋白GST-SUMO-MT在大肠杆菌中的表达、纯化及其活性研究被引量：3
- 2007年
- 将编码融合蛋白GST-SUMO-MT的DNA片段连接到大肠杆菌表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-GS-MT并转化到大肠杆菌Origami(DE3)中。20℃,1mmol/L的IPTG诱导20h后,获得分子量约为43kDa的融合蛋白,表达量占菌体上清总蛋白的38.4%。利用谷胱甘肽交联琼脂糖(glutathionesepharose4B)凝胶柱和SephardexG-25分子筛联用可以得到纯度为95%以上的融合蛋白,得率约为70mg/L。该融合蛋白可与GST抗体产生阳性反应。融合蛋白GST-SUMO-MT可以显著提高宿主对Cd2+、Zn2+和Cu2+离子聚积的能力,其耐受能力比对照组分别提高4.2倍、4倍及1.6倍。此外,原子吸收光谱法测定,每分子GST-SUMO-MT可以结合2～3个Cd2+离子。
- 黄亚东苏烨丁长才张敏静李校堃苏志坚
- 关键词：金属硫蛋白融合蛋白纯化
- 杂合肽CAME^m诱导鼻咽癌细胞凋亡的作用
- 2006年
- 目的研究杂合肽(cecropinA-melittinhybridpeptidemutant,CAMEm)对鼻咽肿瘤细胞的诱导调亡作用。方法选取鼻咽癌CNE2细胞株为靶细胞,3T3细胞为正常细胞,以MTT比色法和Hoechest33342染色法,应用流式细胞仪和DNA凝胶电泳观察CAMEm对CNE2细胞的诱导调亡作用,检测杂合肽对CNE2细胞和3T3细胞生长抑制作用的时效和量效关系。结果与对照组相比,当5mg/LCAMEm作用12h时,抑制率升高,P<0·05;125mg/LCAMEm作用12h时,抑制率显著升高,P<0·01。0·5mg/L的CAMEm作用12h时,可以观察到调亡小体的产生;0·5、5、10和25mg/LCAMEm诱导CNE2细胞的调亡率分别达14·60%、17·42%、21·80%和36·10%,诱导调亡作用与剂量和时间呈明显正相关。CAMEm对3T3细胞没有显著影响。结论杂合肽CAMEm对CNE2细胞株具有明显诱导调亡作用,而且对正常细胞没有显著杀伤作用。
- 丁长才湛敏苏志坚李校堃吴志玲
- 关键词：蜂毒肽细胞凋亡鼻咽肿瘤
