于坤
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 供职机构：安徽医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HLA-B*2704重链胞外功能区基因片段的克隆表达及其生物学功能的初步鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的:克隆及可溶性表达HLA-B*2704重链胞外功能区,并对其生物学功能进行初步鉴定。方法:以HLA-B位点全长cDNA为模板,用PCR-SSP方法扩增HLA-B*2704重链胞外区cDNA,经测序鉴定后与pET32a可溶性原核表达载体构建其重组原核表达系统,并在大肠杆菌BL21中表达,采用Western印迹及微量淋巴细胞毒阻断实验初步鉴定该蛋白的特异性及其生物学特性。结果:扩增出HLA-B*2704重链胞外功能区cDNA片段,构建的HLA-B*2704 cDNA-pET32a可溶性原核表达载体可在大肠杆菌BL21表达系统中得到较好表达,表达量约占菌体总蛋白的40%;通过Western印迹鉴定了表达蛋白的特异性;通过微量淋巴细胞毒阻断实验发现该重组蛋白具有生物活性并可特异性阻断HLA-B27阳性细胞的微量淋巴细胞毒反应。结论:在大肠杆菌中表达了具有生物学活性的HLA-B*2704重链胞外功能区,为强直性脊柱炎的机理研究及特异性阻断药物的筛选提供了实验基础和新的靶标。
- 于坤袁方代东发梁飞刘楠赵晓郝玉娜奚永志孙玉英
- HLA-B* 2705分子结构对其在原核细胞可溶性表达影响的研究
- 2013年
- 目的研究人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-B* 2705分子结构对其在原核细胞可溶性表达的影响。方法采用RT-PCR法将HLA-B* 2705基因的全长、胞外区和α1、α2功能区分别进行克隆并连接到pET-32a(+)表达载体。经IPTG诱导表达,并经超声破碎、层析和透析纯化蛋白,再经体外微量细胞淋巴毒反应检测蛋白质活性。结果成功构建3种pET-32a(+)表达载体,经IPTG诱导后,HLA-B* 2705基因全长和胞外区主要以包涵体的形式表达,可溶性蛋白的量较低;而α1和α2功能区则以高效可溶性形式表达,通过体外微量细胞淋巴毒实验证实,HLA-B* 2705的α1和α2功能区可溶性蛋白可与HLA-B27抗体特异性结合,并成功阻断补体介导的细胞毒作用。结论α1和α2功能区能够在原核细胞中高效表达可溶性蛋白,并具有蛋白功能,而HLA-B* 2705基因全长和胞外区主要以包涵体的形式表达,表明蛋白质的大小和空间结构对于其可溶性表达具有重要影响。
- 代东发袁方于坤梁飞刘楠龙娟赵晓奚永志孙玉英
- 关键词：分子结构可溶性表达包涵体
- 强直性脊柱炎生物治疗的现状及新进展
- 2013年
- 强直性脊柱炎是一种以脊柱病变为主的慢性病,累及骶髂关节,引起脊柱强直和纤维化,造成不同程度的眼、肺、肌肉、骨骼病变,属自身免疫性疾病。强直性脊柱炎的致病机制仍未完全明了,但在治疗方面,生物治疗策略取得了可喜的新经验,生物药物展现出良好的应用前景。
- 于坤奚永志孙玉英
- 关键词：强直性脊柱炎肿瘤坏死因子生物治疗单克隆抗体
- HLA-B27拮抗肽真核表达载体的构建、表达及其生物学活性的初步研究
- 强直性脊柱炎(ankylosingspondylitis,AS)是一种严重危害人类身体健康和生存质量,并严重影响劳动力的慢性全身性自身免疫性疾病,其起病隐匿,病程长,最终导致患者丧失活动能力,甚至致残。迄今AS的病因尚不...
- 于坤
- 关键词：拮抗肽真核表达载体生物学活性
- 文献传递
