于浩
- 作品数：18 被引量：73H指数：4
- 供职机构：青岛农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程文化科学更多>>
- 菌株Alcaligenes sp.P156中一个新型烟酸羟化酶的克隆与功能验证
- 2022年
- 本研究预测naa cluster中的naaB基因负责催化烟酸到6-羟基烟酸的反应。通过对NaaB的蛋白序列进行分析,发现该酶含有三个亚基,分别由naaB_(L1)、naaB_(S)、naaB_(L2)基因编码,其中naaB_(L1)和naaB_(L2)分别编码2个含有钼辅因子结合结构的大亚基,naaB_(S)基因编码一个含有[2Fe-2S]簇的小亚基。本研究对naaB基因进行了克隆,将构建的重组质粒pME6032-naaB_(L1SL2)分别转化到无色杆菌(Achromobacter sp.)和大肠杆菌(Escherichia coli)中,通过HPLC和LC-MS检测验证了NaaB负责催化烟酸到6-羟基烟酸,并且在无色杆菌和大肠杆菌中NaaB均能够转化烟酸,这与之前报道烟酸羟化酶不能在大肠杆菌表达的结果不同,说明NaaB的基因编码和催化功能具有独特性。通过序列分析推测NaaB的这一特性可能跟该酶同时含有两个钼结合结构域的大亚基有关。
- 孙倩姝赵书雪徐康白洁于浩胡春辉
- 关键词：烟酸
- 几种典型扫描电镜生物样本制备被引量：31
- 2016年
- 总结了几种典型扫描电镜生物样本的制备方法。结果表明,分别采用牙签直接涂抹、在合适的溶剂中超声分散后用铜片和铜网捞取的方法,得到较好的粉末样品扫描电镜图像;微生物在液体或固体培养基中培养后,经戊二醛固定,乙醇脱水和冷冻干燥等处理过程;植物样品根据含水量的不同,选择合适的固定液和干燥方法对样品进行处理;动物样品采用双固定和临界点干燥的方法进行处理;均获得较为理想的扫描电镜图片。
- 胡春辉徐青孙璇于浩袁玉清
- 关键词：生物样品扫描电镜场发射
- 耐盐碱羊肚菌菌株筛选研究被引量：4
- 2020年
- 盐碱地耐盐作物的研究,对开发利用盐碱地,促进国民经济发展具有重要的战略意义。羊肚菌是珍稀食(药)用菌,已经实现人工栽培,具有投资小、易贮藏、产品价值高的特点,探索盐碱地栽培羊肚菌对盐碱地的可持续发展具有重要作用。试验从pH和NaCl浓度进行耐盐碱菌株的筛选,结果表明,文登菌株、2-4菌株、烟台菌株和51号菌株4种菌株品种中2-4菌株和文登菌株具有较强的适应性,与对照比较,盐碱地pH 7.50~8.50对2株菌株菌丝生长无显著影响;2株菌株均能在含有1.0%~5.0%NaCl浓度的培养基中生长,其中文登菌株的生长速率高于2-4菌株。研究结果可为耐盐碱菌株的育种及其栽培研究提供参考。
- 李树文徐丽丽徐丽丽郭立忠
- 关键词：羊肚菌盐碱地菌株筛选
- 利用荧光染色和流式细胞技术辅助卵孢小奥德蘑原生质体制备与再生研究被引量：4
- 2020年
- 本研究以卵孢小奥德蘑液体培养菌丝作为实验材料,利用单因子变量法探索研究了菌丝培养时间、酶浓度、酶解时间、酶解温度、稳渗剂类型对卵孢小奥德蘑原生质体制备的影响,并对原生质体再生培养基进行选择和优化。通过荧光染色,利用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪对原生质体的制备过程、得率和活力进行研究。结果表明,将卵孢小奥德蘑菌丝在液体培养基中培养5d收集菌丝体,以甘露醇作为渗透压稳定剂,在溶壁酶浓度2%、30℃条件下酶解5h,获得的原生质体得率最高,达2.0×107个/mL;通过流式细胞仪分析,约57.69%的原生质体细胞为活细胞;在RM培养基中再生效果最好,再生率为(0.103±0.025)%。研究结果可以为卵孢小奥德蘑育种与食用菌原生质体制备再生提供研究基础。
- 徐丽丽王菲胡春辉郭立忠于浩
- 关键词：原生质体制备原生质体再生荧光染色流式细胞术
- Box-Behnken响应面法优化荷叶离褶伞液体发酵培养基
- 2023年
- 为了优化菌丝培养基以期提高菌丝生物量和氨基酸产量,以荷叶离褶伞菌丝体为试验材料,以生物量和氨基酸含量为指标,利用Box-Behnken响应面法优化液体发酵培养基。试验结果表明:液体发酵最优培养基配方为马铃薯200 g/L、葡萄糖25 g/L、麸皮7.75 g/L、KH 2PO 41.5 g/L、MgSO 41.62 g/L;每100 mL液体培养基可得菌丝体生物量为1.096±0.025 g,菌球大小均匀、菌球浓密,且优化后的菌丝体总氨基酸含量提高了23.9%,子实体总氨基酸含量高达17.06%。优化培养基可用于荷叶离褶伞液体发酵工厂化生产。
- 于亚宁邱田美侯杰于浩王鑫民高霞康莉莉李丽珍刘鹏徐丽丽
- 关键词：荷叶离褶伞菌丝体氨基酸
- 羊肚菌细菌性病害病原菌的分离鉴定
- 2022年
- 通过筛选患病羊肚菌子实体,获得3株病原菌。通过侵染采摘的羊肚菌子实体,发现假单孢菌属(Pseudomonas)菌株YDJ-1对羊肚菌子实体的生长存在威胁。当用YDJ-1菌液浇灌羊肚菌子实体周围土壤,培养至第6天,发现有10%羊肚菌子实体出现了菌柄发红、变软等细菌病害的病症,当培养至14 d时,发现有40%的羊肚菌出现发病状况,子实体菌柄呈红褐色、有水渍,子实体基本不生长,均为羊肚菌幼菇;未发病的60%子实体,生长畸形、菌柄膨大,进一步说明菌株YDJ-1可抑制羊肚菌的生长。该研究对羊肚菌栽培过程中防御细菌性病害有一定的指导意义。
- 张晨晓赵书雪曹田田张燕娇郭立忠于浩
- 关键词：羊肚菌栽培细菌病害侵染
- 产碱杆菌Alcaligenes sp.P156中龙胆酸1,2-双加氧酶GdoP的研究
- 2019年
- 龙胆酸是芳香族化合物微生物降解的核心代谢产物,龙胆酸降解研究对于芳香族化合物的降解研究具有重要意义。龙胆酸1,2-双加氧酶是催化龙胆酸降解的关键酶。本研究利用双加氧酶催化保守结构域在产碱杆菌P156的基因组上通过多序列比对找到一个龙胆酸双加氧酶基因gdoP;利用分子生物学技术对该基因进行异源表达;并利用重组蛋白对酶学性质和动力学参数进行测定。酶学性质研究表明,GdoP催化反应的最适pH为7.5,最适温度为40℃。GdoP是一个Fe2+依赖型双加氧酶,含有Fe2+离子结合结构域。Fe2+离子能够明显促进GdoP酶活,Cu2+、Cd2+离子对GdoP的酶活有明显抑制。以龙胆酸为底物,GdoP的Km值和Vmax值分别为641μmol/L和23.9U/mg。GdoP具有较强的底物特异性,能够催化龙胆酸开环生成3-马来酰丙酮酸,不能催化5-氨基水杨酸、水杨酸和1-羟基-2-萘酸的转化。本研究系统的研究了龙胆酸1,2-双加氧酶GdoP的酶学性质,有助于更好的研究芳香族化合物的微生物降解过程。
- 胡春辉王菲郭立忠于浩
- 关键词：基因表达酶学性质
- 膨大弯颈霉中与Bmt生物合成相关的PKS基因功能研究
- 2023年
- 环孢霉素A是一种主要由膨大弯颈霉Tolypocladium inflatum产生的环肽类次级代谢产物,临床上被广泛用作免疫抑制剂,其合成需要特殊底物(4R)-4-[(E)-2-butenyl]-4-methyl-L-threonine(Bmt),但目前相关Bmt的研究很少。基因敲除实验证实Bmt的生物合成需要一个聚酮合酶(polyketosynthase,PKS)基因(simG)参与,并推测其功能为合成Bmt的前体化合物羧酸分子3(R)-hydroxyl-4(R)-methyl6(E)-octenoic acid(B1)。本研究通过在同为虫生真菌的球孢白僵菌Beauveria bassiana中异源表达simG,以证明该基因的功能。通过克隆获得了较大基因simG,利用根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导方法将该基因转化到球孢白僵菌中,通过基因检测和半定量RT-PCR筛选出目标基因表达量高的菌株,获得4株simG高表达菌株。将其发酵培养后,利用LC-MS检测发酵产物,发现在simG高表达菌株中存在与B1分子量相同的产物峰。本研究进一步证明了simG负责化合物B1的合成,是Bmt合成的关键基因。本研究进一步加深了对环孢霉素的生物合成机理的认识,为构建Bmt高产的工程菌株提供理论支撑,有望从解决底物来源角度促进环孢霉素生产效率的提高。
- 杨秀青李丝竹徐康刘美洁郭立忠于浩
- 关键词：环孢霉素BMT生物合成异源表达
- Arthrobacter sp.2PR降解2-羟基吡啶动力学及降解特性研究被引量：2
- 2017年
- 从辽河口石油污染土壤中筛选到一株能够以2-羟基吡啶作为唯一碳源、氮源和能源进行生长的菌株2PR,基于形态学观察、16S rRNA基因序列分析鉴定菌株2PR属于节杆菌属(Arthrobacter)。菌株2PR生长和降解2-羟基吡啶的最适条件是30℃,pH为7.0。当2-羟基吡啶初始浓度为6.0mg/ml时,120h菌株2PR对2-羟基吡啶的降解效率为94.48%,初始2-羟基吡啶浓度为8.0mg/ml时,156h的降解效率为89.21%。对2-羟基吡啶降解动力学过程进行模拟,结果显示菌株2PR生长和降解过程符合logisitic模型,该模型为环境中2-羟基吡啶的生物降解提供了理论参考。休止细胞反应和中间代谢产物检测表明,菌株2PR在降解2-羟基吡啶的过程中生成了蓝色化合物4,5,4',5'-tetrahydroxy-3,3'-diazadiphenoquinone-(2,2')。推测该菌株降解2-羟基吡啶的途径可能是首先由双加氧酶催化生成2,3,6-三羟基吡啶,后者会自发形成蓝色中间代谢产物,2,3,6-三羟基吡啶发生开环反应,最终被完全降解。菌株2PR是已报道菌株中2-羟基吡啶耐受能力和降解能力最强的菌株,在污染物生物修复方面具有广阔的应用前景。
- 胡春辉徐青于浩
- 关键词：微生物降解动力学
- 6-羟基-3-琥珀酰吡啶单加氧酶HspB的结构研究
- 2015年
- 在蛋白晶体结构难以获得的情况下,通过设计突变体来获取6-羟基-3-琥珀酰吡啶单加氧酶Hsp B的结构信息。首先获取Hsp B蛋白的同源序列并进行比对,之后对Hsp B蛋白进行同源建模和从头建模,并与底物2,5-二羟基吡啶(HSP)进行对接模拟;通过分子模拟、序列比对和参考同源蛋白晶体三种方式,设计并构建Hsp B酶的25个突变体;通过突变体的表达纯化和酶动力学常数测定来研究Hsp B的结构性质。根据实验结果,推测FAD的正确结合在稳定Hsp B蛋白结构中具有重要的作用,同时推测底物HSP和辅酶NADH处于同一活性中心并与不同位点相互作用。吡啶衍生物是极具工业价值的化合物,生物催化法是合成吡啶衍生物的有效途径,而吡啶衍生物的生物催化研究较少,通过考察突变体的性质,推测了Hsp B的部分结构信息,为此类吡啶单加氧酶的工业改造和应用奠定了基础。
- 李鹏鹏于浩许平唐鸿志
- 关键词：突变体结构信息
