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核转录因子-κB C-Rel亚基克隆及C-Rel/P65/P50对猪伪狂犬病毒在BHK21细胞上增殖的影响: 细胞核因子-κB (Nuclear factor κappa B)是一种较特殊的转录调节因子,普遍存在于真核细胞内,对宿主先天性免疫反应及细胞增殖、分化和凋亡起到关键的调节作用。细胞核转录因子-κB可以通过调控相关靶基因...; 付梦瑾; 关键词：C-REL 克隆转录时相猪伪狂犬病毒; 文献传递

猪细小病毒PK-15细胞适应株的培育及增殖特性被引量：8: 2013年; 为了研究猪细小病毒不同接毒方式的增殖规律及在不同细胞的病毒含量差异。本实验利用PK-15细胞对猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)分离株进行适应性培养。针对PPV的NS1基因设计特异性引物,建立实时荧光定量PCR方法。利用该方法检测PPV分离株同步和分步接毒的病毒含量,绘制一步生长曲线;同时检测PPV在HeLa、MDBK、PK-15、ST、F81、BHK-21和Marc-145细胞上的增殖特性。结果显示,PPV分离株盲传至12代产生CPE,继续传代培养10代仍能产生稳定的细胞病变,成功培育出PK-15细胞适应株。一步生长曲线显示,分步接毒的病毒含量高于同步接毒,而增殖周期短于同步接毒;PPV在不同细胞的增殖结果显示,各细胞开始出现CPE的时间依次为PK-15、ST、HeLa和MDBK,病毒含量高低依次是ST、PK-15、MDBK和HeLa,而不能在F81、BHK-21和Marc-145细胞上增殖。本实验首次利用荧光定量PCR方法成功分析PPV不同接毒方式的增殖规律及不同细胞的增殖特性,为PPV基础研究和疫苗生产提供资料。; 吴云飞朱玲徐志文付梦瑾陈蕾阳爱国郭万柱; 关键词：猪细小病毒实时荧光定量PCR

猪A群轮状病毒和C群轮状病毒以及猪星状病毒多重RT-PCR同时检测方法的建立及应用被引量：11: 2014年; 为建立同时快速检测猪A群轮状病毒(GARV)、猪C群轮状病毒(GCRV)和猪星状病毒(AstV)的三重RT-PCR检测方法,根据GenBank中公布的序列进行病毒基因区同源性分析,然后使用Primer Premier 5.0软件分别设计了GARV、GCRV的VP6基因和AstV的ORF2基因特异性引物,预期扩增片段的大小分别为229、166和410bp。在这3种病毒单项RT-PCR技术的基础上,建立了GARV、GCRV和AstV的多重RT-PCR检测方法,并用该方法检测30份四川省仔猪腹泻粪样。结果显示,GARV、GCRV、AstV的阳性检出率分别为26.7%、13.3%、16.7%,本方法与这3种病毒的单项RT-PCR检测结果的符合率分别为100%、100%、83%,整体符合率达94.3%,特异性为100%。结果表明,本试验建立的多重RTPCR检测方法具有特异、快速、准确的特点,可用于GARV、GCRV和AstV的同时检测。; 杨文宇周远成韩燕陈蕾廖春燕付梦瑾季洪伟蔡雨涵朱玲徐志文郭万柱; 关键词：多重RT-PCR

猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及增殖规律被引量：18: 2013年; 为了研究猪流行性腹泻病毒（PEDV）的生长规律，利用Vero细胞从四川腹泻仔猪小肠内容物中分离得到1株病毒，经RT—PCR检测、序列比对、病毒理化试验与微量中和试验证实该分离株为猪流行性腹泻病毒，命名为SC—P，以该毒株经口接种28日龄仔猪，5d后出现明显临床症状。以SC—P分离株感染Vero细胞，收集不同时间的细胞上清，利用建立的PEDV荧光定量检测方法对不同时间点样品中病毒RNA进行定量分析，绘制PEDV的一步生长曲线。结果显示，细胞外的病毒RNA含量呈S形曲线增长，感染后第2～6小时，病毒RNA含量的增长较慢，第6～24小时呈对数增长，第24～72小时增长速度减缓，维持在较高水平，进入稳定期。表明PEDV感染Vero细胞，病毒在细胞内增殖到达一定数量以后，便逐步向胞外释出。; 付梦瑾朱玲吴云飞唐蕊涵徐志文郭万柱; 关键词：猪流行性腹泻病毒

核转录因子-kBC-Rel亚基克隆及C-Rel/P65/P50对猪伪狂犬病毒在BHK21细胞上增殖的影响: 细胞核因子-1κB(Nuclear factorκappa B)是一种较特殊的转录调节因子，普遍存在于真核细胞内，对宿主先天性免疫反应及细胞增殖、分化和凋亡起到关键的调节作用。细胞核转录因子-κB可以通过调控相关靶基因的...; 付梦瑾; 关键词：转录时相猪伪狂犬病毒; 文献传递

一例猪繁殖与呼吸综合征的实验室诊断: 2011年; 2011年10月,四川邛崃某猪场发生了一种以经产母猪流产、死产、产木乃伊胎、死胎及弱仔为主要特征的疾病。为确定病原,剖解2头病死仔猪,采集肺脏、脾脏组织,混合研磨提取组织总RNA,以实验室建立猪蓝耳病病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)核酸检测方法进行这2种病原的RT-PCR检测;采集小脑组织以酚氯仿法提取组织总DNA,进行伪狂犬病毒(PRV)PCR检测。结果显示CSFV与PRV均为阴性,PRRSV变异株和经典株均为阳性。诊断为猪蓝耳病变异株与经典株混合感染。; 孙贤刚付梦瑾朱玲; 关键词：猪蓝耳病 RT-PCR

猪核转录因子C-Rel亚基的克隆及PRV体外感染PK-15细胞对C-Rel转录时相的影响被引量：3: 2014年; 核转录因子κB是普遍存在于真核细胞中的转录调节因子,其信号通路在细菌、病毒感染宿主致病过程中起关键作用,直接调控宿主先天性免疫反应及细胞增殖、分化和凋亡,它的异常活化可能是PRV感染导致免疫抑制的重要原因。为进一步了解NF-κB C-Rel亚基序列特征及PRV对C-Rel mRNA转录时相的影响,本试验采用RT-PCR从猪外周血淋巴细胞中扩增NF-κB C-Rel ORF,获得阳性质粒后测序,进行相关生物信息学分析;运用实时荧光定量PCR技术对PRV感染PK-15细胞后不同时期C-Rel mRNA的转录水平进行定量分析。序列分析结果表明:所扩增猪C-Rel亚基ORF长1 773bp,编码590aa;猪C-Rel核苷酸序列与不同动物的C-Rel核苷酸序列相似性较高;大部分位于细胞核内(76.0%),无信号肽及跨膜区。荧光定量结果表明:与对照组相比,感染后0~4h,C-Rel转录水平下调,2和4h差异显著(P<0.05);4~12h,快速上调,12h达到转录高峰(P<0.01);12h后逐渐下降,24~120h,维持在较低水平,其中36h差异极显著(P<0.01),48、72和120h差异显著(P<0.05)。本研究推断PRV感染早期较弱的先天性免疫应答可能与C-Rel活化水平低下有关。; 付梦瑾朱玲周远成杨文宇李新琼徐志文; 关键词：C-REL 转录时相

猪环曲病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：4: 2013年; 根据GenBank中猪环曲病毒（porcine torovirus,PToV）N基因的保守序列,设计合成1对针对PToV的特异性引物,建立了基于SYBR GreenⅡ检测PToV的实时荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法能很好地将PToV与猪伪狂犬病病毒、猪嵴病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、A群猪轮状病毒、猪瘟病毒、沙门菌和大肠杆菌区分开来,特异性强。检测PToV的N基因在8.65×101~8.65×108拷贝/μL范围内有很好的线性关系,其扩增相关系数为0.998 9,扩增产物的熔解曲线分析只有1个单特异峰。所建立的实时荧光定量RT-PCR方法组内变异系数为0.29%~1.30%,组间变异系数为0.45%~1.80%,重复性较好。利用该方法对采集自四川部分地区的43份临床样品进行检测,实时荧光定量RTPCR检出13份阳性样品,与常规PCR检测方法的阳性符合率为100%。结果表明建立的实时荧光定量RT-PCR方法特异性较强、灵敏度高,可用于该病的临床检测和流行病学调查。; 周璐周远成魏浩澈付梦瑾刘骁季洪伟朱玲徐志文郭万柱; 关键词：SYBR 实时荧光定量RT-PCR

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付梦瑾

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