何火聪
- 作品数：55 被引量：91H指数：6
- 供职机构：福建医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学核科学技术农业科学更多>>
- 蕲蛇蛇毒中一种新型自降解抗凝血酶AA-ACA-I的纯化和表征(英文)被引量：1
- 2009年
- 利用嗜硫色谱和POROSHQ20离子交换色谱从蕲蛇蛇毒中纯化得到一种新型P-Ⅲ型蛇毒金属蛋白酶(snake venom metalloproteases SVMP)AA-ACA-I.该酶经SDS-PAGE测得分子量为47.6kD,含有链内二硫键,加DTT处理后,分子量为50.8kD,中性糖含量为3.5%,具有出血毒性和抗凝血活性.在70℃和pH9.0条件下保温60min,该酶会自降解成分子量30kD左右的新蛋白,降解得到的新蛋白抗凝血活性高于原蛋白.
- 潘剑茹何火聪周康靖汪少芸王中来饶平凡
- 关键词：抗凝血酶纯化
- shRNA沉默AnnxinA2基因对放射抗拒鼻咽癌细胞迁移和侵袭的影响
- 2017年
- 目的探讨sh RNA沉默Annxin A2基因对放射抗拒鼻咽癌细胞迁移和侵袭的影响。方法采用Fu GENE HD将Annexin A2 sh RNA转染放射抗拒的鼻咽癌CNE2(R743)细胞,q RT-PCR验证转染细胞中Annxin A2基因的表达,细胞划痕实验和Transwell实验观察下调Annxin A2基因表达及联合照射对鼻咽癌细胞迁移和侵袭的影响,Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶2(MMP2)蛋白的表达。结果转染组细胞Annexin A2基因的m RNA相对表达量为(0.25±0.17),较对照组的(1±0.00)和转染对照组的(0.96±0.06)明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞划痕实验显示,下调Annxin A2基因表达可抑制照射诱导的CNE2(R743)细胞的迁移能力(P<0.05)。Transwell实验结果显示,下调Annxin A2基因表达可抑制照射诱导的CNE2(R743)细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05)。Western blot结果表明,下调Annxin A2基因表达能抑制照射诱导的MMP2蛋白的表达上调(P<0.05)。结论下调Annxin A2基因表达能抑制照射诱导放射抗拒的鼻咽癌CNE2(R743)细胞的迁移和侵袭能力,可能与MMP2蛋白表达下调相关。
- 何火聪苏颖林可焴邹长棪陈超
- 关键词：鼻咽肿瘤放射抗拒
- 全长SOD2重组蛋白的可溶表达、纯化、稳定性与跨膜效应被引量：1
- 2017年
- 超氧化物歧化酶(SOD)家族是保护细胞免受正常代谢过程中产生的活性氧(ROS)毒性所必需的,含Mn2+离子的超氧化物歧化酶(Mn-SOD,SOD2)是其中最重要的一种。本研究合成了人源SOD2全基因序列,并将其插入带有GST的原核表达载体p GEX-4T-1中,成功构建了GST-SOD2融合蛋白表达质粒。然后,将重组质粒p GEX-4T-1-SOD2转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG在25℃下诱导表达融合蛋白,得到可溶性GST-SOD2融合蛋白,经GST亲和树脂纯化得到比活为1 788 U/mg的纯蛋白,分子量约为46 k Da。利用凝血酶切去GST标签后经肝素亲和柱纯化得到了电泳纯的SOD2重组蛋白,该蛋白分子量约为25 k Da,与SOD2全长序列的理论分子量相符,比活为2 000 U/mg。两种重组SOD2蛋白在生理条件下都具有良好的SOD活性,且都具有显著的跨膜能力(P<0.05)。这些工作为深入研究两种全长重组SOD2蛋白的结构与生物效应建立了基础。
- 潘剑茹陈莉娟何火聪苏颖王香玲李娴陈翠煌吴伦巧刘树滔
- 关键词：表达纯化稳定性
- 超氧化物歧化酶与阿米福汀对小鼠急性放射损伤预防作用的比较被引量：2
- 2012年
- 本研究建立了小鼠全身放疗的损伤模型,以比较预给药超氧化物歧化酶(SOD)和阿米福汀对小鼠放射治疗损伤的防护效果。C57BL/6小鼠用6 Gy X射线进行全身一次性照射,在放射后24 h处死,测定小鼠外周血红、白细胞数量,胸腺指数和脾脏指数,以及肝脏抗氧化活力。结果表明:与放疗对照组相比,放疗前给药SOD组对放疗鼠的外周血白细胞数量和胸腺指数有显著的保护作用,使之分别增加66.7%和19.1%。测得放疗前给药阿米福汀对放射鼠的外周血白细胞数量和脾脏指数有显著的保护作用,使之分别增加106.9%和22.6%。此外,与放疗对照组相比,放疗前给药SOD对放疗鼠的肝脏抗氧化能力也有显著提高,可使肝脏的MDA水平下降12.7%,SOD活力增加10.8%,T-AOC活力增加45.0%,放疗前给药阿米福汀可使放疗鼠肝脏的MDA水平下降22.3%。
- 潘剑茹郑光进何火聪吴君心苏颖刘树滔饶平凡
- 关键词：超氧化物歧化酶小鼠
- X线照射、顺铂及X线照射+顺铂对CC趋化因子受体7表达的影响
- 2018年
- 目的探讨X线照射、顺铂及放疗+顺铂对CC趋化因子受体7(CCR7)表达的影响。方法不同剂量X线单次照射SW480细胞、SPC-A1细胞和CNE-2细胞后,用Western blot法检测细胞中CCR7的表达变化;比较8 Gy单次X线照射组与2 Gy·d^(-1)连续照射6 d组SPC-A1细胞中CCR7表达的差异;观察不同浓度顺铂给药24 h和48 h后CNE-2细胞中CCR7表达的变化;比较2 Gy X线照射、不同浓度顺铂和不同浓度顺铂+2 Gy X线照射对CNE-2细胞中CCR7表达的影响。结果 1)单纯X线照射SW480细胞:2 Gy和10 Gy照射24 h后,SW480细胞中CCR7的表达高于0 Gy组,且随照射剂量的增加而增加(P均<0.05);与10 Gy组比较,20 Gy组的CCR7表达没有进一步增加(P>0.05);照射48 h后,各剂量组CCR7的表达较0 Gy组增加,但2 Gy、10 Gy、20 Gy组之间比较差异均无统计学意义(P均>0.05);2)单纯X线照射SPC-A1细胞:CCR7在SPC-A1细胞中的表达不随X线照射时间、照射方式及剂量的变化而变化(P均>0.05);3)单纯X线照射CNE-2细胞:照射24 h和48 h后,各剂量组CCR7的表达均较0 Gy组增加,差异均有统计学意义(P均<0.05);但相同时间2 Gy、10 Gy、20 Gy组之间比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。各剂量组照射48 h后CCR7表达均较照射24 h后明显增加,差异均有统计学意义(P均<0.05);4)8 Gy单次X线照射与2 Gy·d^(-1)连续照射6 d这2种照射方式对CCR7无影响,CCR7的表达不随照射方式和照射时间的变化而变化(P均>0.05);5)不同治疗方案对CNE-2细胞CCR7表达的影响:与2 Gy·d^(-1)连续照射6 d组及相同浓度顺铂组比较,0.8μg·mL^(-1)顺铂+2 Gy组和20μg·mL^(-1)顺铂+2 Gy组CCR7的表达下降,差异均有统计学意义(P均<0.05)。0.032μg·mL^(-1)顺铂+2 Gy组、0.8μg·mL^(-1)顺铂组+2 Gy组、20μg·mL^(-1)顺铂+2 Gy组3组CCR7的表达两两比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 X线照射可增加SW480细胞和CNE-2细胞CCR7的表达,但对SPC-A1细胞CCR7表达无影响;顺铂能够增加CNE-2细胞中
- 郭爱华苏颖何火聪李金銮杨百华吴晨斌蒋伟平吴君心
- 关键词：趋化因子受体7X线照射顺铂
- GRP78在鼻咽癌组织的表达及其临床意义
- 目的探讨葡萄糖调节蛋白GRP78蛋白表达与鼻咽癌临床特征及预后的关系。方法随机选取2012年2月至2012年7月福建省肿瘤医院初诊鼻咽癌患者的治疗前鼻咽肿瘤活检组织标本107例,中位年龄47岁,全部病例鼻咽部组织均经病理...
- 何火聪苏颖林可焴陈超邹长棪潘剑茹
- 文献传递
- 构建鼻咽癌CNE-2细胞高表达β-catenin的实验模型
- 目的 构建真核表达载体pcDNA3.1/β-catenin,转染鼻咽癌CNE-2细胞并观察 β-catenin的表达.Wnt信号传导途径不恰当的激活参与多种人类癌症的发病,研究表明β-catenin是Wnt信号转导通路中...
- 林可焴苏颖何火聪邹长楼陈超
- 关键词：真核表达载体Β-CATENIN鼻咽癌
- TAT蛋白转导结构域介导融合蛋白在小鼠活体的跨膜递送作用被引量：1
- 2010年
- 目的探讨跨膜递送短肽——TAT蛋白转导结构域(简称TAT)介导的与其融合的活性蛋白在活体的跨膜递送作用。方法以融合蛋白GST-TAT-GFP,GST-GFP-TAT和GST-GFP为研究模型蛋白,不经过蛋白质的变性处理、直接通过向小鼠腹腔注射和皮肤涂抹这两种含TAT的融合蛋白及作为对照的融合蛋白GST-GFP,一定时间作用后取体内器官和皮肤做冷冻切片,荧光显微镜检测这些融合蛋白的跨膜递送情况;并对分别融合在C端或者N端的TAT介导GFP在活体动物体内和皮肤的跨膜递送作用进行对比。结果腹腔注射实验结果表明,TAT可以介导不经过蛋白质的变性处理的融合蛋白GST-TAT-GFP和GST-GFP-TAT跨膜递送进入到小鼠的心脏、肝、肾、脾和肺,甚至脑组织;其中GST-GFP-TAT跨膜递送效率比GST-TAT-GFP更高。结构模拟分析提示GST-GFP-TAT与GST-TAT-GFP中的TAT的暴露情况不同可能是造成两种蛋白跨膜递送活性差异的重要因素。皮肤实验的结果则表明TAT不仅介导融合蛋白GST-TAT-GFP和GST-GFP-TAT进入小鼠表皮,而且使其进入小鼠皮肤的真皮层。结论 TAT可以跨膜递送不经过变性处理的融合蛋白进入小鼠皮肤和体内,递送效率可能与TAT的暴露程度相关;这些结果为在蛋白质疗法方面应用TAT提供了进一步的理论依据。
- 刘树滔何火聪陈菁傅蓉潘剑茹饶平凡
- 关键词：融合蛋白跨膜递送器官
- 蕲蛇蛇毒中一种新型金属蛋白酶AA-MP-I的纯化和表征被引量：3
- 2010年
- 本研究通过嗜硫色谱、Sephadex G-75、蓝胶和POROS HQ20离子交换色谱,从蕲蛇蛇毒中分离得到一种新组分AA-MP-I。该酶为分子量22.9kDa的单体蛋白,等电点为5.55,不含中性糖基,N端序列为STE-FQRYMEIVIVVDHSMVK,结果表明其为新型P-I型金属蛋白酶,对温度敏感,具有抗凝血活性,40℃下抗凝血活性最强,具有出血毒性,无磷脂酶A2活性。
- 潘剑茹何火聪刘枋饶平凡
- 关键词：蕲蛇蛇毒金属蛋白酶抗凝血
- β-catenin过表达鼻咽癌CNE2细胞模型的构建
- 2016年
- 目的构建β-catenin真核表达载体pc DNA3.1(+)/β-catenin并转染鼻咽癌CNE2细胞,检测β-catenin在CNE2细胞中的表达。方法反转录-聚合酶链式扩增反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增目的基因β-catenin,胶回收纯化后克隆至p GEM-T Easy载体,挑选阳性克隆,抽提质粒进行kpn I/xba I双酶切和PCR鉴定,用T4 DNA连接酶将目的基因β-catenin与真核表达载体pc DNA3.1/Hygro(+)连接,构建重组的真核表达载体pc DNA3.1(+)/β-catenin,转化感受态细胞DH5α,再次抽提质粒进行PCR、kpn I/xba I双酶切和测序鉴定,然后用Fu GENE HD将纯化的pc DNA3.1(+)/β-catenin转染入鼻咽癌CNE2细胞,经Hygromycin B筛选,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法(Western blot)验证转染细胞CNE2/β-catenin中β-catenin的表达。结果 PCR、双酶切及测序鉴定表明,成功构建了真核表达载体pc DNA3.1(+)/β-catenin;实时荧光定量PCR和Western blot检测表明,与未转染细胞CNE2比较,被转染的CNE2/β-catenin细胞能够上调目的基因β-catenin的表达(P<0.01)。结论成功构建真核表达载体pc DNA3.1(+)/β-catenin,并能在转染的CNE2/β-catenin细胞上调目的基因β-catenin的表达。
- 林可焴苏颖何火聪邹长棪陈超
- 关键词：鼻咽肿瘤真核表达载体Β-CATENIN细胞模型
