余丹丹
- 作品数：11 被引量：15H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划上海市浦江人才计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 猪乙型脑炎病毒SH0601株基因组序列分析及全长cDNA的构建被引量：8
- 2008年
- 目的对猪源乙型脑炎病毒SH0601株进行全序列测定与分析,以了解该株病毒的遗传特征,并构建全长cDNA克隆。方法将猪源JEV SH0601株基因组RNA分5段进行RT-PCR并克隆入pCRⅡ-Blunt-TOPO和pBluescript载体中,测定了全长cDNA序列。根据cDNA克隆酶切图谱分析,将5个片段先后克隆入pBluescript中构建JEV全长基因组cDNA。根据E蛋白基因序列对SH0601株进行了遗传分型。结果序列分析表明:SH0601株基因组全长10977nt,与GenBank中的Beijing-1、P3、SA14和SA14-14-2株基因组全长相比,在3′NTR的10701nt处多一碱基"G",与上述4株病毒的全长核苷酸的同源率都达97.2%以上,而与国外猪源分离株KV1899和JEV/sw/Mie/41/2002全长核苷酸的同源率仅达88.7%,但SH0601株与6株病毒的全长氨基酸同源率均达97.0%以上。以E蛋白基因序列对SH0601作进化分析,该分离株属基因型Ⅲ型。结论SH0601株属于乙型脑炎病毒基因Ⅲ型。在高拷贝质粒pBluescript中可构建稳定的乙型脑炎病毒全长cDNA克隆。
- 郑浩余丹丹孙志高飞袁世山
- 关键词：乙型脑炎病毒病毒基因组全长CDNA克隆
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒嵌合感染性克隆的构建和应用被引量：5
- 2008年
- 高致病性猪蓝耳病近年来在我国广泛流行,目前尚无高效疫苗用于该病的防制。本研究以PRRSV弱毒感染性克隆-pAPRRS作为主要骨架,将高致病性猪蓝耳病病毒江西分离株(JX143)的主要结构蛋白基因(ORF4-7)以及3′UTR区域替换入pAPPRS相应编码区域,构建了pSX12(ORF4-7-3′UTR)、p5NX12(ORF5-7-3′UTR)以及p56N12(ORF5-6)三个PRRSV全长嵌合克隆。经DNA转染Marc-145细胞后拯救出嵌合病毒,并对拯救病毒进行了病毒生物学特性的分析;选取拯救病毒v56N12(ORF5-6)和vSX12(ORF4-7-3′UTR)免疫29日龄猪进行免疫原性试验,结果表明,以v56N12免疫后抗体水平相对较低,故免疫原性相对较差;而vSX12病毒免疫后14d血清ELISA抗体达到阳性值(IDEXXELISA值s/p≥0.4),免疫后28d中和抗体效价从原来的1:5以下上升到1:15以上,说明vSX12具有良好的免疫原性并可进行免疫监测;免疫后28d以强毒JX143株攻毒,结果vSX12免疫组未见发病,而未免疫攻毒对照组全部发病并有1头死亡,vSX12免疫猪攻毒后病毒血症持续6d后消失,而对照组攻毒后至少持续13d,说明vSX12可对高致病性猪蓝耳病提供有效的免疫保护。本研究构建的三个嵌合病毒为开发同时抗经典和变异株PRRSV感染的二价疫苗,以及探寻高致病性猪蓝耳病病毒的毒力因子奠定了基础。
- 李祥健张建武吕健余丹丹姚火春袁世山
- 关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征高致病性猪蓝耳病感染性克隆嵌合病毒候选疫苗
- 高致病性猪蓝耳病病毒重组质粒和遗传工程疫苗
- 本发明提供了一种高致病性猪蓝耳病病毒重组质粒的构建方法，以及根据该重组质粒构建的遗传工程疫苗及构建方法。根据蓝耳病病毒基因相对保守区的序列设计多对引物，分段扩增蓝耳病病毒基因序列，并依次连接到合适的载体中，获得猪蓝耳病病...
- 袁世山吕健李祥健张建武余丹丹孙志高飞韦祖樟庄金山谭涛郑海红谭菲菲刘长龙陆嘉琦丛雁芳王小敏郑浩
- 文献传递
- 猪蓝耳病病毒反向遗传操作及应用
- 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)是套式(或巢状)病毒目(Nidovirales)动脉炎病毒科(Arteriviridae)的成员，目前对该类病毒复制的调控机制知之甚少。我国06年以来所暴发的所谓“猪高热综合症”对...
- 袁世山余丹丹谭菲菲刘长龙袁海峰丛雁芳韦祖樟孙志高飞吕键王小敏庄金山李祥健张建武郑海红
- 关键词：猪蓝耳病猪蓝耳病病毒反向遗传操作分子生物学
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5/6和ORF6/7重叠区的分离(人工)改造病毒的构建及鉴定被引量：2
- 2008年
- 为了研究重叠序列在病毒繁殖周期中所起的作用以及更好地操作感染性克隆,将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆ORF间(ORF5/6和ORF6/7)重叠区域分离并插入酶切位点,成功构建两个突变的全长质粒,随后进行了病毒拯救和复制分析。结果表明:(1)两个全长质粒均能够进行病毒拯救,并产生明显细胞病变;(2)突变病毒具遗传稳定性;(3)病毒空斑形态及生长曲线与亲本毒株近似。表明PRRSVORF间重叠碱基的安排方式对病毒的感染性是非必需的,获得的两株突变病毒为进一步研制PRRSV基因标识疫苗、研究PRRSV各编码蛋白功能奠定了基础。
- 余丹丹孙志王金勇袁世山
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒感染性反向遗传操作
- 高致病性猪蓝耳病病毒重组质粒和遗传工程疫苗
- 本发明提供了一种高致病性猪蓝耳病病毒重组质粒的构建方法，以及根据该重组质粒构建的遗传工程疫苗及构建方法。根据蓝耳病病毒基因相对保守区的序列设计多对引物，分段扩增蓝耳病病毒基因序列，并依次连接到合适的载体中，获得猪蓝耳病病...
- 袁世山吕健李祥健张建武余丹丹孙志高飞韦祖樟庄金山谭涛郑海红谭菲菲刘长龙陆嘉琦丛雁芳王小敏郑浩
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白编码基因重叠区的分离
- 通过将PRRSV感染性克隆ORF间(ORF1/2、ORF4/5、ORF5/6、ORFl6/7和ORF7/3’UTR)重叠区域拉开并插入酶切位点等反向遗传操作，构建了一系列突变的全长质粒，随后进行了病毒拯救和复制分析。结果...
- 余丹丹孙志王金勇袁世山
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒感染性编码蛋白
- 文献传递
- PRRSV感染性克隆5′非翻译区序列缺失突变分析
- 2009年
- 在PRRSV感染性克隆pCBC2的基础上,通过突变PCR获得了病毒基因组5′UTR系列缺失的全长突变体克隆:pCBCM1、pCBCM3、pCBCM5、pCBCM7、pCBCM9、pCBCM45、pCBCM69、pCBCM100,随后将上述突变体体外转录成RNA之后转染MARC-145细胞,进行病毒感染性、复制和转录分析,以鉴定特定的缺失区的调控功能。结果显示,病毒5′UTR起始的第1个碱基是保持病毒感染性非必需的核苷酸;前45个碱基对病毒基因组的复制是非必需的。Northern-Blot结果显示pCBCM1亚基因组mRNA可以进行高效率的转录,而其余突变体的亚基因组转录受到严重抑制。由此证明,PRRSV 5′UTR的完整性对病毒意义重大,碱基的少量以及大部分缺失会对病毒产生极大的影响。
- 高飞姚火春王金勇余丹丹袁世山
- 关键词：感染性克隆体外转录缺失突变反向遗传系统
- 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒结构蛋白的反向遗传研究
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是世界养猪业的主要威胁之一。PRRSV的靶细胞是作为免疫系统主要成员的肺泡巨噬细胞(Porcine Alveolar Macrophage,PAM),因此感染猪多呈免疫抑制,对多病原混...
- 袁世山韦祖樟谭菲菲田德斌李燕华丛雁方余丹丹孙利厂庄金山孙志
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒结构蛋白的反向遗传研究
- @@猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是世界养猪业的主要威胁之一。PRRSV的靶细胞是作为免疫系统主要成员的肺泡巨噬细胞(Porcine Alveolar Macrophage，PAM)，因此感染猪多呈免疫抑制，对多病...
- 袁世山孙志韦祖樟谭菲菲田德斌李燕华丛雁方余丹丹孙利厂庄金山
- 关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒结构蛋白免疫系统
- 文献传递
