冀霞
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：山西医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金太原市科学技术发展计划项目山西高校科技研究开发项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽促K562细胞凋亡作用及其机制研究被引量：2
- 2012年
- 目的观察家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽对K562细胞核和线粒体膜电位及K562细胞凋亡蛋白半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的影响,进而探讨家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽是否可以影响线粒体膜电位及促进K562细胞凋亡。方法首先采用Hoechst33258荧光标记法,将家蝇3龄幼虫峰5、峰8组分作用于K562细胞,用荧光显微镜检测K562细胞核荧光强度的变化;其次采用荧光探针罗丹明123标记K562细胞,在激光扫描共聚焦显微镜下观察K562细胞中罗丹明123荧光强度,以细胞内荧光强度表示线粒体膜电位大小;最后用caspase-3检测试剂盒和酶标仪测定K562细胞caspase-3的含量。结果采用Hoechst33258荧光标记法,用荧光显微镜观察到家蝇3龄幼虫峰5、峰8组分作用于K562细胞后部分细胞核的荧光强度增强,说明其可以引起K562细胞发生凋亡;用罗丹明123标记,激光共聚焦显微镜观察发现,家蝇3龄幼虫峰5、峰8组分作用组的K562细胞荧光强度值明显低于对照组(t1=21.30,t2=196.23,P<0.05),说明家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽可以使K562细胞线粒体膜电位降低;峰5、峰8组分作用组caspase-3的含量明显高于对照组(t1=146.92,t2=189.56,P<0.05),说明3龄幼虫抗肿瘤肽可以促进K562细胞发生凋亡。结论家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽峰5、峰8组分对K562细胞核具有损伤作用,可以引起K562细胞发生凋亡,作用机制是通过降低K562细胞线粒体膜电位,激活caspase-3,扰乱其生理功能,促使其凋亡。
- 赵瑞君樊宏英程璟侠冀霞焦丽萍贾琳
- 关键词：荧光标记法线粒体膜电位半胱天冬氨酸蛋白酶-3凋亡
- 登革2型病毒E蛋白基因的酵母表达
- 2017年
- 为研究登革病毒与蚊虫相互作用的分子机制,本研究对DENV-2的E蛋白基因进行了毕赤酵母分泌表达。首先,经RT-PCR方法克隆DENV-2的E蛋白基因,将克隆的基因与表达载体pPICZaB连接以构建表达重组子;并经酶切、PCR、测序筛选实验鉴定正确重组子。然后,重组子经氯化锂法转化毕赤酵母菌KM71H获得转化子;经抗生素、表型鉴定、PCR筛选得到Muts型的多拷贝转化子。最后,经甲醇诱导基因表达,Western-blotting方法鉴定蛋白表达情况及最佳表达时间。本研究对DENV-2的E蛋白成功进行了分泌表达,并且确定其表达最佳发酵时间为96 h;为进一步研究登革病毒与蚊虫相互作用的分子机制奠定了基础。
- 刘美德刘美德冀霞杨正国罗森赵瑞君赵瑞君
- 关键词：登革2型病毒E蛋白分泌表达毕赤酵母
- 利用T7噬菌体cDNA文库筛选登革2型病毒与白纹伊蚊相互作用基因
- 目的：
1.从白纹伊蚊体内提取总RNA，分离纯化出mRNA，反转录成双链cDNA并将其转接入T7噬菌体，利用T7噬菌体构建白纹伊蚊cDNA文库，并鉴定文库是否符合文库构建标准。
2.培养C6//36细胞，利用...
- 冀霞
- 关键词：白纹伊蚊登革2型病毒病毒纯化相互作用蛋白
- 文献传递
- 白纹伊蚊T7噬茵体展示cDNA文库的构建
- 2012年
- 为筛选白纹伊蚊与相关蚊媒病毒相互作用的基因，本文构建了白纹伊蚊Aedes albopictusT7噬菌体展示eDNA文库，分离与纯化白纹伊蚊mRNA，所得mRNA经反转录合成双链cDNA后，在双链cDNA末端加上定向EcoRI／HindIn接头使其两端分别带EcoRI和Hind11I黏性末端；接着用MiniColumn纯化收集300bp以上的双链cDNA片段连接于T7 Select 10—3b载体；经体外包装后，以BLT5403为受体菌构建1v7噬菌体展示cDNA文库。所建文库的库容量经测定为1．7×10’pfu／mL，扩增后文库滴度为2．5×10^（15）pfu／mL。对从原始文库中随机挑取的50个噬菌斑进行PCR鉴定，重组率为95％以上；阳性克隆片段长度分布在200～2000bp，其中有90％的插入片段大于300bp。本文所构建的白纹伊蚊T7噬菌体展示cDNA文库，满足cDNA文库的基本要求，可以用于筛选白纹伊蚊与相关蚊病毒相互作用的基因。
- 冀霞赵瑞君刘美德赵彤言
- 关键词：白纹伊蚊
