刘如恩
- 作品数：89 被引量：279H指数：9
- 供职机构：中日友好医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省教育厅科学研究基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学机械工程更多>>
- EGFP基因修饰大鼠胚胎中脑神经干细胞的建立被引量：1
- 2010年
- 目的建立增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因修饰大鼠胚胎中脑神经干细胞。方法以质粒pEGFPN1转染培养第三代的大鼠胚胎中脑神经干细胞(mNSCs),经G418筛选后,分别进行nestin免疫细胞化学鉴定和诱导分化后β-Ⅲ-tubulin、GFAP、CNPase免疫细胞化学鉴定。结果 EGFP在基因转染12 h后开始表达,24 h后明显增加,48 h达到高峰,经G418筛选1月后有阳性克隆形成,EGFP基因修饰不影响大鼠胚胎mNSCs的增殖与分化。结论成功建立EGFP基因修饰大鼠胚胎mNSCs,为进一步开展帕金森病的细胞移植治疗研究奠定基础。
- 邓兴力杨智勇宋晓斌蔡山李智高王永刚刘如恩冯忠堂
- 关键词：中脑神经干细胞基因转染
- GDNF基因修饰的骨髓基质干细胞分泌物对多巴胺能神经元的营养作用
- 2004年
- 目的:克隆GDNF基因并修饰骨髓基质干细胞,观察该工程细胞分泌物对多巴胺能神经元的营养作用。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法从新生小鼠大脑皮层细胞克隆出GDNFcDNA片断,以pECPP-Cl为载体导入骨髓基质干细胞,制备稳定表达GDNF基因的MSCs工程细胞,收集并浓缩MSCs和GDNF’基因修饰的MSCs工程细胞的条件培养液,通过MTT、倒置显微镜和免疫组织化学的方法观察MSCs和GDNF基因修饰的MSCs工程细胞分泌物对多巴胺能神经元的营养作用。结果:MSCs和GDNF基因修饰的MSC工程细胞分泌物均能促进多巴胺能神经元的存活和生长,MSCs工程细胞作用更强。结论:成功构建了GDNF基因修饰的MSCs工程细胞,该细胞对多巴胺能神经元有明显营养保护作用,在帕金森病治疗中可能有重要价值。
- 姜晓兵赵洪洋周凤刘如恩周伟张建国
- 关键词：胶质细胞源性神经营养因子干细胞多巴胺能神经
- EGFP在EGFP/GDNF融合基因修饰骨髓基质干细胞中的示踪作用被引量：5
- 2004年
- 目的 探索增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)能否作为标记基因追踪胶质源性神经生长因子(GDNF)基因修饰的骨髓基质干细胞 (MSC)在体内外的存活、生长、分化和表达外源目的基因的情况。方法 应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法从新生小鼠大脑皮质细胞克隆出GDNFcDNA片断 ,连入pEGFP C1载体 ,构建表达EGFP和GDNF融合蛋白的质粒并转染MSC ,将稳定表达EGFP GDNF基因的细胞株植入小鼠纹状体。用荧光显微镜和免疫组织化学的方法在体内外观察MSC。结果 成功制备EGFP GDNF融合基因修饰的MSC工程细胞 ,免疫组织化学方法检测显示GDNF呈强阳性 ,在体内外MSC工程细胞均发出明亮的绿色荧光 ,并且绿色荧光可反映细胞形态学变化。结论在EGFP GDNF融合基因修饰的MSC工程细胞中EGFP可作为标记基因同时标记GDNF和MSC。
- 姜晓兵赵洪洋周凤刘如恩周伟张建国
- 关键词：胶质细胞源性神经营养因子干细胞增强型绿色荧光蛋白
- RNA干扰真核表达载体pEGFP-H1介导的血管内皮生长因子shRNA治疗人胶质瘤的实验研究被引量：14
- 2005年
- 目的 构建针对血管内皮生长因子(VEGF)的短发夹环RNA(shRNA)质粒(pEGFPH1 /VEGF),观察其在体内和体外对胶质瘤细胞株U251生长的抑制作用。方法 应用PCR构建携带绿色荧光蛋白(EGFP)基因的RNA干扰真核表达载体pEGFP- H1,并利用该载体介导VEGFshRNA。用阳离子脂质体转染U251细胞,通过荧光显微镜和流式细胞仪观察EGFP的表达,用RT- PCR检测VEGFmRNA的表达,以酶联免疫吸附实验(ELISA)检测培养液中VEGF蛋白的含量。同时筛选转染pEGFP- H1和pEGFP- H1 /VEGF的U251稳定细胞株,制备裸鼠U251细胞移植瘤模型,观察肿瘤生长情况。结果 与空载体转染组相比, pEGFP- H1 /VEGF对VEGF的抑制率达77. 9%。对照组和pEGFP -H1组裸鼠肿瘤重量分别为1 .7g±0 4g和1 .5g±0 .7g,体积分别为1573mm3 ±330mm3 和1430mm3 ±382mm3,两组之间重量和体积差异均无统计学意义(P>0 .05 ),而pEGFP- H1 /VEGF组肿瘤重量为0 .5g±0 .4g,体积为401mm3 ±272mm3,与对照组比较差异有统计学意义(P<0. 01)。结论 pEGFP H1介导的VEGFshRNA能有效抑制U251细胞中VEGF的表达,并在体内抑制肿瘤生长。
- 姜晓兵赵洪洋周凤刘如恩张方成赵甲山
- 关键词：血管内皮生长因子介导真核表达载体RNA干扰短发夹环RNA
- 伽玛刀对受压迫猫视神经电生理学的影响被引量：1
- 2005年
- 目的探讨引起受压迫的猫视神经电生理学变化的最小伽玛刀剂量。方法制作20只猫视神经压迫动物模型,模型制成后2个月,随机分为5组,每组4只,1组作为对照,其余4组分别接受10、11、12、13 Gy伽玛刀的照射,照射后分别于3 d、1周、半个月、1、2、3、4、5个月进行电生理监测。结果10 Gy组在伽玛刀照射后1周内有电生理的变化,这种变化在半个月时有所恢复,随着时间的延长逐渐恢复。11 Gy以上组在伽玛刀照射后出现了不可逆电生理学的异常变化,这种变化随着时间的延长而加重。结论10 Gy可引起受压迫的猫视神经电生理学的可逆性变化,11 Gy可引起视神经不可逆的放射性损伤。
- 刘如恩赵洪洋姜晓兵朱贤立
- 关键词：伽玛刀视神经电生理学放射剂量分次
- 伽玛刀照射对猫视神经电生理学变化的影响
- 2006年
- 目的探讨不同剂量下伽玛射线照射后视神经电生理学的变化特点。方法20只猫随机分为5组,每组4只,1组作为对照,其余4组分别接受10Gy、11Gy、12Gy和13Gy伽玛刀的照射,分别于照射后3d、1周、半个月、1个月、2个月、3个月、4个月及5个月进行电生理监测。结果10Gy组电生理学没有变化,11Gy组在照射后1周出现了电生理学的变化,主要表现为潜伏期的延长,这种变化在半个月时有所恢复,随着时间的延长基本恢复正常。12Gy以上伽玛射线照射后出现了明显的电生理学异常变化,主要表现为潜伏期的延长和振幅的缩短,这种变化随着时间的延长而加重。结论引起视神经电生理学的变化特点与伽玛射线剂量有关,小剂量的伽玛射线可引起可逆性的变化,主要表现为潜伏期的延长。大剂量的伽玛射线可引起不可逆的视神经放射性损伤,这种损伤随着时间的延长逐渐加重,主要表现为潜伏期的延长和振幅的减小,随着时间的延长,振幅的减小更加明显。
- 刘如恩赵洪洋姜晓兵朱贤立
- 关键词：伽玛刀视神经电生理学
- 伽玛刀对猫不同形态视神经病理学影响研究被引量：1
- 2005年
- 目的探讨不同形态的视神经对伽玛射线的敏感性是否存在不同及引起不同形态视神经病理学变化的最小射线剂量。方法40只家猫随机分成压迫组和非压迫组,每组20只,压迫组应用显微开颅球囊压迫视神经,建立视神经压迫动物模型,模型建立后2个月,压迫组与非压迫组再分别随机分为5组,1组作为对照,其余4组分别接受10、11、12、13Gy的伽玛刀照射,照射后5个月,取病理,分别进行光镜及透射电镜观察。结果与对照组比较,压迫组和非压迫组10Gy组结构无明显的变化,非压迫组11Gy组光镜下结构出现轻微的变化,电镜下超微病理结构出现部分线粒体肿胀,压迫组光镜和电镜下的结构出现明显的变化。非压迫组12Gy组光镜及电镜下神经组织结构紊乱,广泛变性,压迫组的变化更为明显。非压迫组13Gy组神经组织结构严重紊乱,大部分髓鞘脱失、溶解,神经微丝疏松、溶解,线粒体普遍空泡化、溶解改变,压迫组髓鞘、神经微丝、线粒体普遍空泡化溶解改变。结论受压迫的视神经对伽玛射线的敏感性比正常的视神经增强,11Gy可引起受压迫视神经病理损伤的加重;引起正常视神经病理学质变的最小剂量为12Gy,随着剂量的增加对视神经的损伤加重。
- 刘如恩赵洪洋姜晓兵朱贤立赵沃华
- 关键词：伽玛刀视神经超微病理
- TOF-MRA影像在面肌痉挛显微血管减压术中的应用价值分析被引量：6
- 2016年
- 目的探讨术前时间飞越MRA（TOV-MRA）影像学在面肌痉挛显微血管减压术中的应用价值分析。方法陆军总医院附属八一脑科医院神经外科及杭州市萧山区第一人民医院神经外科自2013年1月至2013年8月采用显微血管减压术治疗的136例面肌痉挛患者，通过术前TOF．MRA影像学判断责任血管类型将患者分为椎动脉型面肌痉挛f44例）与小血管型面肌痉挛（92例），并根据术中所见回顾性分析2种类型面肌痉挛在显微镜下手术时间，预测手术难易程度、手术疗效及颅神经功能障碍发生率。结果术前TOF-MRA影像学特征同手术中所见椎动脉型与小血管型面肌痉挛相符：椎动脉型面肌痉挛显微镜下手术时间明显长于小血管型，比较差异有统计学意义（P〈0．05），预测椎动脉型面肌痉挛手术难度高于小血管型；而手术治愈率及缓解率比较差异无统计学意义（P〉0．05）；椎动脉型面肌痉挛术后颅神经功能障碍高于小血管型，比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论术前TOF—MRA影像学检查可判断面肌痉挛属于椎动脉型或小血管型及镜下手术时间，能预测手术难易程度、手术疗效及颅神经功能障碍发生率，对面肌痉挛的治疗有良好的指导意义．值得推广应用。
- 陈新治武广永顾水均宣宏飞司赟董伟峰芦明缪建庆谢仁龙刘如恩
- 关键词：面肌痉挛显微血管减压术责任血管
- 微血管减压术治疗面肌痉挛致术后听力障碍临床分析被引量：25
- 2007年
- 目的探讨微血管减压术(MVD)治疗面肌痉挛(HFS)术后听力障碍的因素及预防措施。方法面肌痉挛MVD后发生听力障碍的患者75例,采用电测听对听力进行检测。结果术后7d内听力下降组电测听示:B级20例,C级21例,D级10例,E级15例,F级9例。半年后听力正常组2例发生迟发性听力障碍,电测听为C级;听力下降组电测听复查示:A级13例,B级11例,C级19例,D级8例,E级15例,F级9例。结论引起MVD术后听力障碍因素复杂,多不可恢复,预防为主。
- 王建莉郭京刘如恩金国良
- 关键词：显微血管减压术面肌痉挛听力障碍
- 猫视神经压迫动物模型的建立被引量：14
- 2004年
- 目的 探讨制作与肿瘤压迫的神经生物学特性相近的视神经压迫动物模型。方法 采用家猫 ,显微开颅将球囊置于视交叉前下方 ,MR检查视交叉、视神经的形态学变化 ,经电生理检查PVEP监测视觉电生理的变化 ,光镜和电镜观察神经组织的病理及超微结构变化。结果 MR示视交叉有脱髓鞘改变 ;PVEP监测示潜伏期延长 ,振幅降低 ;光镜下示神经组织广泛脱髓鞘改变 ,胶质细胞增生 ;电镜下示髓鞘结构紊乱、脱失 ,神经丝疏松 ,线粒体肿胀 ,空泡化 ,有轴索髓鞘溶解。结论 本方法制作的视神经压迫动物模型 ,与肿瘤压迫所至的视神经损伤具有相近的生物学特性 ,是一种理想的模型。
- 刘如恩赵洪洋周伟姜晓兵李兴旺查运飞张建国朱贤立
- 关键词：动物模型组织学
