刘润忠
- 作品数：9 被引量：14H指数：2
- 供职机构：厦门大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省自然科学基金国家基础科学人才培养基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 快速点突变的优化方法被引量：1
- 2008年
- DNA传统的快速点突变方法即"一步突变法"虽然可使DNA产生突变,但效率不高.市场上出售的快速点突变试剂盒,其突变效率可达80%以上,然而价钱昂贵.本文论述的快速点突变方法,在传统的"一步突变法"基础上做了改进,通过对引物突变点5′端序列Tm值的确定,使引物设计变得简单,初学者可轻松完成DNA的定点突变,而且大大降低了成本,适用于对大量DNA进行定点突变试验.试验结果表明:这种经过改良的方法突变率为96.22%,可为研究人员的试验带来便利,是一种值得推广的新方法.
- 王荣浩陈瑞川刘润忠
- 关键词：PCKPFU酶切分析
- 原生质体紫外诱变选育可利用廉价碳源的高产油新菌株被引量：5
- 2014年
- 【目的】研究并建立利用原生质体紫外诱变技术选育可利用廉价碳源发酵的高产油新菌株的方法。【方法】采用1.5%蜗牛酶和1.0%纤维素酶混合液水解去除细胞壁得到2A00015(近平滑假丝酵母,Candida parapsilosis)的原生质体,将其放于紫外灯下诱变及再生壁培养,筛选获得可利用廉价碳源发酵的高产油酵母,并采用气相色谱质谱联用法(GC-MS)测定其脂肪酸组成。【结果】突变效果最好的突变菌株2A00015/25用葡萄糖发酵培养7 d后,其生物量、油脂产率和产油量分别为17.77 g/L、58.12%和10.32 g/L,较原始菌株分别提高了12.45%、23.32%和38.68%;利用废糖蜜发酵培养,其生物量、油脂产率和产油量分别为18.54 g/L、49.44%和9.17 g/L,较原始菌株分别提高了9.09%、21.16%和32.18%。利用废糖蜜培养其产油效率虽低于利用葡萄糖培养,但从环境保护及原材料成本的角度考虑,用废糖蜜作为碳源发酵培养产生油脂更具优势。诱变菌株利用废糖蜜发酵后产生油脂经检测含有8种脂肪酸,其脂肪酸组成与植物油近似,其中不饱和脂肪酸含量占脂肪酸总量的82.4%。【结论】通过利用原生质体紫外诱变技术,成功选育出一株新的可利用廉价碳源的高产油海洋菌株,产油率达到49.4%,提高了21.2%。
- 胡艳丽钟添华产竹华刘润忠骆祝华叶德赞
- 关键词：原生质体紫外诱变废糖蜜
- nPKC-PKD3信号传导途径介导Prostratin活化HIV-1转录
- 2014年
- 采用HIV-LTR-Luc稳定细胞株分析其荧光素酶活性,研究Prostratin活化潜伏的艾滋病毒的分子机制.实验结果表明:随药物浓度升高和处理时间延长,Prostratin能明显激活HIV-1转录.采用PKC抑制剂拮抗nPKC活性,能有效阻断Prostratin对HIV-1的激活;反之,过表达nPKC能激活HIV-1转录.最后,敲低PKD3高效拮抗Prostratin激活的HIV-1转录.因此,nPKC-PKD3信号途径参与Prostratin活化HIV-1转录,从而激活潜伏的艾滋病毒.本研究为开发新的抗艾滋病药物筛选模型提供了可靠的理论依据.
- 王会平刘敏刘润忠
- 关键词：转录活化HIV-1
- 线性与分枝状聚乙烯亚胺介导基因体外转染的比较与研究被引量：1
- 2008年
- 聚乙烯亚胺(PEI)是一类新兴的阳离子多聚物非病毒载体,可缩聚DNA分子形成颗粒并转入真核细胞进行表达.本文选用分子量750 ku分枝状PEI与分子量25 ku线性PEI转染增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因于HeLa细胞,并对这两种PEI的转染效率进行比较.利用MTT法检测比较线性PEI与分枝状PEI的细胞毒性.通过凝胶阻滞实验比较两种PEI结合DNA能力.最后利用肝素介导释放实验比较两者在形成PEI/DNA复合物后释放DNA的能力.研究结果表明:线性PEI转染效率优于分枝状PEI,且随PEI/DNA质量比的增加而升高,而分枝状PEI则相反;两种PEI细胞毒性在一定范围内相近;分枝状PEI结合DNA能力略强于线性PEI;但是分枝状PEI释放DNA的能力远小于线性PEI.这可能导致DNA在细胞内无法从PEI/DNA复合体上释放出来,从而影响转录的正常进行,最终导致分枝状PEI转染效率下降.
- 余冰菲张垲陈瑞川刘润忠
- 关键词：聚乙烯亚胺转染效率
- β-分泌酶与二价阳离子耐受蛋白CUTA存在相互作用
- 2008年
- 淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)沉积是阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)的重要病理特征之一。Aβ是由淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)经β-分泌酶(BACE)和γ-分泌酶水解产生的,因此BACE1在AD的形成过程中发挥重要作用。为了进一步研究BACE1的作用机制,以BACE1胞内段构建诱饵蛋白用酵母双杂交方法筛选与之相互作用的蛋白质。结果得到了二价阳离子耐受蛋白(divalent cation tolerant protein,CUTA)的阳性克隆,β-半乳糖苷酶实验表明CUTA和BACE1胞内片段存在相互作用。构建了两者全长基因的表达载体,证明二者在哺乳动物细胞中同样可以相互作用。CUTA可能涉及铜的代谢动力学及乙酰胆碱酯酶(AchE)的膜锚定,而铜的代谢失衡和AchE水平与AD发病密切相关。实验结果为BACE生物学功能和AD发病机制的研究提供了条件。
- 侯海波易雪莲周爱娜张云武许华曦洪水根刘润忠
- 关键词：淀粉样蛋白阿尔茨海默病Β-分泌酶Γ-分泌酶
- 荧光定量检测细胞绿色荧光蛋白技术的建立与应用被引量：5
- 2008年
- 绿色荧光蛋白是在生化与分子生物学研究领域中普遍使用的一种基因表达报告系统显色物.对于细胞内绿色荧光蛋白表达水平的定量检测,目前尚缺乏一套准确?简便?易行的技术.本文以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,用分子量为25 ku的线性聚乙烯亚胺介导进入HeLa细胞并表达.利用多功能酶标仪测定细胞裂解液的荧光强度,结果显示:这种新方法测定的荧光强度能很好反映细胞中EGFP的蛋白表达水平,并在短时间内完成对EGFP表达水平的定量检测.该方法简单有效,且不依赖于大型仪器设备,具有较高的准确性与灵敏度,在实际应用中简便可靠,具有推广应用的意义.
- 张垲余冰菲陈瑞川刘润忠
- 关键词：绿色荧光蛋白HELA细胞
- 用酵母双杂交系统筛选与PEN-2蛋白胞内端相互作用的蛋白
- PEN-2蛋白(Presenilin enhancer protein 2)是一种与阿尔茨海默氏症(Alzheimer's Disease,AD)密切相关的蛋白.PEN-2在γ-分泌酶的组装和成熟中扮演重要的角色,它对于...
- 程鹏黄秀梅刘润忠洪水根许华曦
- 关键词：阿尔茨海默氏症Γ-分泌酶酵母双杂交
- 文献传递
- 用酵母双杂交系统筛选与PEN-2蛋白胞内端相互作用的蛋白被引量：2
- 2007年
- γ-分泌酶复合体对β-淀粉蛋白前体蛋白(Beta-amyloid precursor protein,βAPP)的水解是生成β-淀粉蛋白(Aβ)的关键步骤,在阿尔茨海默氏症(Alzhei mer′s disease,AD)的病理发生中起着重要作用.PEN-2蛋白(Presenilin enhancerprotein 2)是γ-分泌酶的一个重要组分,在γ-分泌酶的组装和成熟中扮演重要的角色.此外,PEN-2还具有促进神经细胞存活和防止细胞凋亡的作用.为了进一步研究PEN-2的生理功能,以PEN-2为诱饵蛋白用酵母双杂交系统筛选与之有相互作用的蛋白,发现PCBP4和GRK5肽段可结合PEN-2,并在酵母体系用β-半乳糖苷酶报告基因验证了它们的相互作用.这些结果表明PCBP4和GRK5可能影响PEN-2的正常生理功能,并且有可能在阿尔茨海默氏症的形成中起着一定的作用.
- 黄秀梅程鹏刘润忠张云武洪水根许华曦
- 关键词：阿尔茨海默氏症酵母双杂交
- 早老素1与热休克蛋白70同源蛋白羧基端相互作用蛋白
- 2008年
- 目的探讨早老素（PS1）蛋白突变体在阿尔茨海默病（AD）发生中的作用和PS1蛋白的正常生理功能及分子伴侣蛋白热休克蛋白70同源蛋白羧基端相互作用蛋白（CHIP）的相互作用。方法采用酵母双杂交系统筛选与PS1蛋白相互作用的蛋白。在构建pGBKT7-PS1-C203诱饵质粒和含全长CHIP的pACT2-CHIP质粒表达载体后，用β-半乳糖苷酶活性测定法检测两者的相互作用；然后转染哺乳动物细胞293T，用Co-IP和Western blot法测试其相互作用。结果获得了一个能与PS1蛋白相互作用的蛋白，即CHIP，并通过β-半乳糖苷酶活性测试、免疫共沉淀进一步证实了PS1和CHIP相互作用的特异性。结论CHIP既可以和分子伴侣蛋白相互作用，本身又具有泛素连接酶活性，可调控蛋白的折叠和降解，PS1与CHIP相互作用的证实，有助于阐明机体泛素-蛋白酶体系统对PS1的调控和进一步阐明AD的病理机制。
- 刘润忠易雪莲霍淑芳扬悦侯海波张云武洪水根许华曦
- 关键词：早老素1热休克蛋白质类
