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针刺对脑源性神经营养因子在脊髓Ⅱ板层可塑性中表达的影响被引量：19: 2002年; 采用免疫组化和原位杂交技术 ,探讨了针刺促进脊髓板层可塑性过程中脑源性神经营养因子及其 m RNA表达的变化。结果显示 :针刺侧备用背根节的脑源性神经营养因子及其 m RNA阳性中 (4 2～ 5 7μm)、小 (<42 μm)型神经元的百分数有所增加 (P<0 .0 5 ) ;脊髓板层的脑源性神经营养因子的阳性神经膨体密度明显增多 (P<0 .0 1)而阳性神经元百分数无变化 (P>0 .0 5 ) ;针刺后脊髓板层未见脑源性神经营养因子 m RNA的杂交信号。提示针刺促进脊髓板层可塑性可能与背根节中。; 王廷华吴良芳廖德阳周雪陈彦红刘苏A.Takeda; 关键词：针刺脑源性神经营养因子

部分去背根猫备用背根节和脊髓Ⅱ板层NT-3及其mRNA的表达变化被引量：20: 2002年; 采用免疫组化和原位杂交技术探讨了部分去背根猫备用背根节 (L6 )和 L3、L5脊髓 II板层 NT-3及其 m RNA的表达变化。结果发现 ,正常组 NT-3及其 m RNA阳性产物主要分布于背根节的大型神经元和少数中、小型神经元。部分去背根后 ,3 d和10 d两时相 NT-3 m RNA大型神经元阳性数明显减少 ,而 NT-3阳性大型神经元数术后 10 d时方明显减少 (P<0 .0 1) ;NT-3及其 m RNA阳性小型细胞数在术后两时相均较正常组者增多 (P<0 .0 1) ;而在中型神经元只有 NT-3阳性神经元数有增加。相对地 ,在脊髓板层 ,两时相 NT-3阳性神经元及胶质细胞百分数均较正常者明显增加 (P<0 .0 1) ,且以 3 d组者为最明显 ,但均未见 NT-3 m RNA阳性信号。结果表明 ,部分去背根不仅导致背根节各类神经元中 NT-3的表达发生了变化 ,且对板层 NT-3阳性神经元及胶质细胞数量也有明显影响。提示 NT-3可能在脊髓; 王廷华吴良芳廖德阳周雪陈彦红刘苏A.Takeda; 关键词：部分去背根备用背根节 NT-3 MRNA

成年猫备用背根节内神经营养素-3对节内神经元的神经营养作用被引量：5: 2004年; 目的　探讨成年猫部分去传入后备用背根节内神经营养素 - 3对节内神经元的神经营养作用。方法　切断 L1 、L3、L5和 L7背根 ,术后第 7d摘取 L2 、L4 和 L6 背根节做分离细胞培养 ,对正常背根节、备用背根节和备用背根节加抗体封闭 3个实验组中神经元存活、突起生长等情况进行观察比较。结果　备用背根节组存活细胞和细胞微团数目以及神经突起长度均明显高于正常组和抗体封闭组。结论　备用背根节内神经营养素 - 3对节内神经元有维持存活、促进突起生长的作用。; 章为周雪王廷华王特为刘苏陈思秀欧可群; 关键词：备用背根节神经营养素-3 成年猫

胎鼠大脑皮质神经元的体外培养及鉴定被引量：13: 2004年; 为了建立SD大鼠大脑皮质神经元的分离、培养及免疫细胞化学鉴定技术,本研究通过分离孕15 d SD胎鼠大脑皮质组织,经机械吹打后,加入含有5％马血清、5％小牛血清的MEM培养基接种在24孔培养板中进行原代培养,并于第3 d在培养基中加入阿糖胞苷抑制胶质细胞的生长,于第9 d将细胞固定后采用免疫细胞化学技术检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达。结果表明从孕15 d SD胎鼠大脑皮质分离的神经元纯度高,生长旺盛,形态典型,90％以上表达NSE免疫阳性。该结果提示我们建立的培养大鼠大脑皮质神经元的方法易于标准化操作,结果稳定,值得推广应用。; 罗湘颖杨志敏王廷华刘苏赵匡彦; 关键词：大脑皮质神经元胎鼠 NSE 免疫阳性胶质细胞免疫细胞化学

备用背根猫脊髓源性神经营养活性物质的初步分离及生物活性检测: 1997年; 本研究组对脊髓可塑性研究已证实，切除猫部分背根后，保留的背根（备用报）纤维可则侧支出芽代偿被切断的传入纤维，并与其靶区（背角）重建突触联系。用电泳和体外培养等方法亦发现备用背根猫去传入侧脊髓背角组织提取液中一些蛋白质的含量发生了变化，而且其促神经突起生长的作用增强。在以上研究的基础上，我们采用凝胶过滤层析方法，分离提取液中对神经突起生长有促进作用的相关蛋白质。实验采用成年雄性家猫30只，切除一侧T10～L1，L3～L5，L7～S2背根节，保留L2和L5背极为备用背根。术后五天取手术侧和非手术侧T9～S3节段脊髓背角组织，分别匀浆、离心后，所得上清液即为提取液。提取液经SephadexG－200凝胶过滤层析后，获得三个主峰，分别收集手术侧和非手术侧三个峰值处的洗脱液，透析、冻干，用再改良的悬滴培养法进行生物活性检测。结果发现：手术侧背角提取液中第二峰值洗脱液促鸡胚背根节神经突起生长的作用明显张于非手术侧者（Pwto．01），在加入量为50ug／ml时，促神经突起生长作用最强。本研究结果为进一步分离纯化该神经营养活性物质奠定了基础。; 刘苏吴良芳保天然; 关键词：脊髓源性神经营养活性物质生物活性

新生大鼠海马源性神经干细胞的分离培养及其向胆碱能神经元定向诱导分化研究(英文)被引量：3: 2005年; 本研究目的是从新生SD大鼠海马分离、培养神经干细胞并诱导其向胆碱能神经元方向分化。利用含b FGF(20ng/ml)和B27的无血清DMEM/F12培养基培养新生SD大鼠海马分离的具有自我更新和多向分化能力的细胞群,用免疫细胞化学技术检测巢蛋白(nestin),并于分化后分别检查特异性成熟神经细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞的标记抗原β微管蛋白(Tuj1 )、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和半乳糖脑苷脂(Galc)的表达;用鸡胚骨骼肌提取液,诱导神经干细胞向胆碱能神经元方向分化。结果显示:从海马分离的细胞群具有自我更新能力,表达nestin,分化成熟后的细胞表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原;与对照组3. 9%相比,鸡胚骨骼肌提取液可以诱导这些细胞中的9. 6%分化成为胆碱能神经元。提示分离的细胞具有自我更新能力和多向分化潜能,是中枢神经系统的干细胞;在加有鸡胚骨骼肌提取液的培养基诱导下,能向胆碱能神经元方向分化。; 罗湘颖杨志敏宋晓斌刘苏赵匡彦冯忠堂王廷华; 关键词：细胞培养胆碱能神经元分化免疫细胞化学

新生大鼠中枢神经系统不同区域细胞生长的形态学比较研究被引量：1: 2006年; 目的分离培养新生sD大鼠的中枢神经系统不同区域细胞并观察其生长情况．方法分离出生后1～3dSD大鼠大脑皮质、小脑皮质、海马、脑室下区、脑干、脊髓细胞，加入含有10％小牛血清的DMEM／F12培养基进行培养，在倒置相差显微镜下观察其生长情况并进行对比研究，于第10天将细胞固定后采用免疫细胞化学技术检测特异性神经元抗原NSE和特异性星形胶质细胞抗原GFAP的表达．结果经观察和免疫细胞化学鉴定后发现各区域均有神经元和星形胶质细胞生长至第10天，细胞生长旺盛，神经元胞体呈三角形或椭圆形，体积较大，四周晕光明显，神经突起多而粗大，分枝互成网络；星形胶质细胞细胞核为椭圆形，常偏于胞体的一侧，胞突丰富，分支多．结论我们培养成活了新生SD大鼠中枢神经系统各区域细胞．对比研究了各区域细胞的生长情况．并鉴定了各区域中的神经元和星形胶质细胞．; 刘佳罗湘颖杨志敏王廷华刘苏赵匡彦; 关键词：中枢神经系统星形胶质细胞免疫细胞化学

小鼠胚胎干细胞在半横断猫脊髓损伤后急性期移植的实验研究: 2006年; 目的探讨猫脊髓半横断损伤后急性期移植小鼠胚胎干细胞后存活、迁移及对功能的影响.方法胚胎干细胞移植前进行培养诱导和记数绿色荧光蛋白标记的胚胎干细胞.取成年健康猫6只(正常移植组和半横断移植组,每组各3只),其中半横断组实施脊髓半横断手术.正常组和半横断组同时移植带有绿色荧光小鼠胚胎干细胞,7 d后灌注取材并行脊髓组织切片后,在倒置荧光显微镜下观察干细胞存活及迁移情况和对行为功能的影响.结果绿色荧光蛋白标记的胚胎干细胞的阳性率为38%,半横断移植组未见到荧光细胞,正常移植组可看到荧光细胞并迁移一段距离.结论小鼠胚胎干细胞能在成年猫的脊髓存活、迁移.但半横断脊髓损伤组未见荧光细胞,提示炎症急性期不利于移植的干细胞存活或者免疫排斥反应导致干细胞死亡.; 祁海军王廷华吴庆英刘苏JOHN W.McDonald; 关键词：脊髓半横断损伤胚胎干细胞

再改良的悬滴培养法及其在鸡胚背根节体外培养中的应用: 1997年; 作者应用再改良的悬滴培养方法，培养鸡胚背根节。将Hamburger35期鸡胚腰段背很节分别种植于涂有鼠尾胶原的48孔组织培养板孔中，每扎加入培养液100VI，翻转培养板，使背根节和培养液滴悬挂在培养孔内。再将培养板置入加有一定量Hanks平＠I盐溶液的玻璃缸中，密封缸周绿，将其放入37C恒温箱中培养。利用NaHCO。和H对的作用能释放CO。以及水份受热蒸发产生相对湿度，从而在缸内建立相当CO。孵箱的细胞生长环境。本方法是在本研究组改良悬滴培养法的基础上作了进一步改进，改进后的方法操作更为简便，更能节约大量人力、物力和时间，并且由于每批各实验组间所培养的背根节都生长在同一培养板的环境中，保证了实验的同步及培养条件的完全一致。我们应用本法进行了二十余次实验，共种植了1000余个背根节，对经凝胶过滤层析和高效液相色谱技术分离的备用背根描脊髓背角提取液各组份进行了生物学活性检测，确定了有活性的组份及其有效作用的最低剂量。结果表明本方法是体外培养鸡胚背报节的一种简便可靠、省时、省力的好方法。; 刘苏吴良芳保天然李秀群; 关键词：鸡胚背根节体外培养

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刘苏

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