卿家超
- 作品数：4 被引量：12H指数：3
- 供职机构：西南大学动物科技学院动物医学系更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金重庆市自然科学基金乌鲁木齐市科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪传染性胃肠炎病毒M、N基因重组杆状病毒的构建及其口服免疫小鼠诱导抗体水平测定被引量：3
- 2015年
- 利用RT-PCR方法扩增猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)M和N结构蛋白基因,将其分别克隆入载体FastBacTM Dual,获得转移质粒pFastBacTM Dual-M和pFastBacTM Dual-N,将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-M和Bacmid-N;在Cellfection作用下,将杆状病毒重组质粒转染昆虫细胞sf9,获得重组杆状病毒rBac-M和rBac-N。间接免疫荧光试验(IFA)检测表明,杆状病毒表达的M蛋白和N蛋白能够被特异性阳性血清识别,重组蛋白具有较好的反应原性。将重组杆状病毒rBac-M和rBac-N口服免疫小鼠,收集小鼠粪便检测抗TGEV sIgA抗体水平,采集血液检测血清中抗TGEV IgG。结果显示,重组杆状病毒(rBac-M和rBac-N)可诱导小鼠产生粘膜免疫和体液免疫应答。试验结果初步预示了杆状病毒经口服途径作为抗原递呈载体的可行性,也为开展TGEV口服免疫研究奠定了基础。
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- 关键词：M基因N基因口服免疫
- 猪传染性胃肠炎病毒样颗粒在杆状病毒表达系统中的体外组装被引量：1
- 2014年
- 利用RT-PCR方法扩增TGEV M、sM和N结构蛋白基因,分别将M、sM和N基因克隆入杆状病毒供体质粒pFastBacTMDual,获得转移质粒pFastBacTM Dual-M、pFastBacTM Dual-sM和pFastBacTM Dual-N,将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,经抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-M、Bacmid-sM和Bacmid-N,在Cellfection作用下,将杆状病毒重组质粒转染昆虫细胞sf9,获得重组杆状病毒rBac-M、rBac-sM和rBac-N。通过间接免疫荧光试验检测显示,重组蛋白在杆状病毒感染的sf9细胞中获得正确表达。将重组杆状病毒按照以下感染组合进行TGEV VLPs组装的研究:rBac-M、rBac-sM、rBac-N单独感染sf9细胞,rBac-M+rBac-N、rBac-M+rBac-sM联合感染sf9细胞。结果表明,rBac-M、rBac-M+rBac-sM、rBac-M+rBac-N感染的昆虫细胞可见类病毒样粒子,rBac-sM、rBac-N单独感染sf9细胞未见形成明显的病毒样颗粒。试验结果为进一步研究TGEV结构蛋白在病毒装配过程中的作用提供了理论依据。
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- 关键词：杆状病毒表达系统病毒样颗粒
- 猪传染性胃肠炎病毒M、sM基因重组杆状病毒的构建及病毒样颗粒的组装被引量：8
- 2013年
- 利用RT-PCR方法扩增猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）M和sM结构蛋白基因，将其分别克隆人载体pFastBac^TM Dual，获得转移质粒pFastBac^TM Dual-M和pFastBac^TM Dual-M-sM，将重组质粒转化至DHl0Bac感受态细胞，经抗性与蓝白斑筛选，获得杆状病毒重组质粒Bacmid-M和Bacmid-M-sM，在Cellfection作用下，将杆状病毒重组质粒转染昆虫细胞sf9，获得重组杆状病毒rBac-M和rBac-M-sM。通过WesternBlot、间接免疫荧光试验（IFA）进行检测，结果显示：重组蛋白在杆状病毒感染的sf9昆虫细胞中获得正确表达。将重组杆状病毒rBac-M和rBae-M-sM分别感染sf9昆虫细胞，进行TGEV病毒样颗粒（VLPs）的体外组装试验。结果表明，M蛋白在sf9细胞内单独表达，M蛋白和sM在sf9细胞内共同表达，都可形成TGEV病毒样颗粒，而且病毒粒子大小不等，直径在61～101nm。试验结果为进一步研究TGEV结构蛋白在病毒装配过程中的作用提供了理论依据。
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- 关键词：M基因SF9细胞病毒样颗粒
- 猪传染性胃肠炎病毒核衣壳蛋白(N)在昆虫细胞中的表达及病毒样颗粒的观察被引量：3
- 2014年
- 利用RT-PCR方法扩增猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)核衣壳蛋白N基因,将其克隆入杆状病毒供体质粒pFastBacTMDual,pFastBacTMDual-N转入DH10Bac菌中进行同源重组,经三重抗性和蓝白斑筛选,得到重组质粒Bacmid-N,将其转染昆虫细胞sf9,获得重组杆状病毒rBac-N.通过间接免疫荧光试验检测显示,重组蛋白在昆虫细胞中得到表达.体外组装TGEV病毒样颗粒(VLPs)试验表明,rBac-N单独感染sf9细胞未见形成明显的病毒样颗粒,昆虫细胞内只观察到杆状病毒粒子.试验结果为探讨TGEV核衣壳蛋白在病毒装配过程中的作用提供了依据.
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- 关键词：N基因SF9细胞病毒样颗粒
