叶一舟
- 作品数：45 被引量：374H指数：11
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- 纤溶酶原激活物抑制物-1基因转导对肾小球系膜细胞外基质积聚的影响被引量：21
- 1999年
- 目的 利用体外基因转染技术使纤溶酶原激活物抑制物 1(PAI 1)基因过表达 ,直接观察局部PAI 1对大鼠系膜细胞外基质 (ECM)积聚的影响 ,解析ECM积聚的分子机制。方法 以绿色荧光蛋白 (GFP)为报告基因 ,构建PAI 1/GFP融合基因真核表达载体 ,利用脂质体将外源PAI 1cDNA导入体外培养的大鼠系膜细胞。在活细胞状态下 ,动态观察外源基因的表达。用Northern杂交、ELISA方法检测大鼠系膜细胞纤维连接蛋白 (FN)、层连蛋白 (LN)及IV型胶原表达。结果 PAI 1基因转染后 ,转染组大鼠系膜细胞中的培养上清PAI活性明显增高 ,到 2 4小时达最高值 ( 8.16± 0 .62 )IU/ml,与对照组 ( 2 .2 7± 0 .19)IU/ml相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。同时基因转染组FN( 0 .5 1±0 0 3 )、LN( 1.2 6± 0 .0 7)及Ⅳ型胶原 ( 0 .98± 0 .0 8)水平均较对照组明显增高 (P <0 .0 5 )。结论 首次建立了系膜细胞PAI 1的过度表达体系 ,证实细胞过度表达PAI 1可以直接导致ECM的积聚。局部PA/PAI活性的变化可能是调节系膜细胞ECM积聚与降解的重要因素。
- 于志恒陈香美廖洪军叶一舟傅博
- 关键词：肾小球膜PAI-1
- 血管紧张素转化酶抑制剂减轻肾小球硬化机制的探讨被引量：85
- 1998年
- 目的探讨血管紧张素转化酶抑制剂对肾小球细胞外基质产生和降解的作用。方法用５／６肾切除的方法诱导大鼠肾小球硬化模型并给予血管紧张素转化酶抑制剂苯那普利（６ｍｇｋｇ－１／ｄ）治疗６周，观察了大鼠血压、蛋白尿和残余肾组织的病理改变以及用免疫组化和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｚ印迹杂交的方法检测了纤维连接蛋白沉积和血管紧张素Ⅱ１Ａ（ＡＴ１Ａ）受体、纤溶酶原激活物抑制物－１（ＰＡＩ－１）及转化生长因子β（ＴＧＦβ）基因的表达。结果苯那普利治疗能明显降低５／６肾切除大鼠血压、尿蛋白排泄和减轻肾脏的病理改变，并且减少了残余肾组织中纤维连接蛋白的沉积以及降低了ＡＴＩＡ受体、ＰＡＩ－１和ＴＧＦβ基因的表达。结论通过抑制ＰＡＩ－１和ＴＧＦβ基因的表达，苯那普利减少了细胞外基质的产生并促使其降解，这可能是血管紧张素转化酶抑制剂减轻肾小球硬化的重要途径之一。
- 陈香美李岩李文歌赵淑珍叶一舟
- 关键词：肾小球硬化血管紧张素转化酶抑制剂
- 人纤溶酶原激活物抑制物1转基因小鼠的建立
- 2000年
- 目的 建立人纤溶酶原激活物抑制物１（ＰＡＩ－１）转基因小鼠。方法利用构建的高效真核表达载体ｐＣＡＧＧＳ－ＰＡＩ－１，制备注射用ＤＮＡ。以显微注射法将目的ＤＮＡ注入小鼠受精卵，再将受精卵移植到受体母鼠，制备转基因小鼠。经鼠尾组织ＤＮＡ提取、ＰＣＲ筛选、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、ＤＮＡ序列测定对转基因小鼠进行鉴定。结果对获得的２９只小鼠经ＰＣＲ筛选、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析、ＤＮＡ序列测定，得到了２只整合了人ＰＡＩ－１ ｃＤＮＡ的转基因小鼠。在刚出生的转基因小鼠尾部及后肢发现出血性改变，免疫组织化学观察到在肾脏局部ＰＡＩ－１表达稍有增高。结论本研究中，我们建立了人ＰＡＩ－１基因转基因小鼠，为进一步研究ＰＡＩ－１在肾脏疾病中调控细胞外基质降解的机制提供了动物模型，为研究利用抗凝、促纤溶疗法治疗慢性肾炎奠定了基础。
- 刘述文陈香美叶一舟
- 关键词：纤溶酶原激活物抑制物1转基因小鼠慢性肾炎
- 糖基化终末产物对肾小球系膜细胞表达纤溶酶原激活物抑制物1的影响被引量：15
- 1997年
- 探讨非酶促糖基化终末产物是否影响肾小球系膜细胞降解肾小球细胞外基质的丝氨酸蛋白酶－纤溶酶原激活物抑制物１（ＰＡＩ－１）基因表达和生物学活性。方法用体外制备的非酶促糖基化牛血清白蛋白（ＡＧＥ－ＢＳＡ）作用人肾小球系膜细胞２４小时和４８小时，观察对细胞增殖、纤维连接蛋白分泌、ＰＡＩ－１基因表达和生物学活性的作用。结果ＡＧＥ－ＢＳＡ抑制肾小球系膜细胞增殖，促进纤维连接蛋白分泌，上调ＰＡＩ－１生物学活性。ＡＧＥ－ＢＳＡ作用系膜细胞２４小时后，ＰＡＩ－１基因表达显著增加（０．６５％±０．０８％，对照０．４５％±０．０６％，Ｐ＜０．０５）；４８小时后ＰＡＩ－１基因表达增加更趋显著（０．９２％±０．１０％，对照０．５１±０．０８，Ｐ＜０．０１）。结论非酶促糖基化终末产物增加肾小球系膜细胞ＰＡＩ－１基因表达和生物学活性，参与了肾小球细胞外基质积聚和肾小球硬化的病理生理过程。
- 邓义斌陈香美叶一舟李才王凡
- 关键词：肾小球系膜细胞PAI-1肾小球疾病
- 纤溶酶原激活物抑制物-1/绿色荧光蛋白融合基因表达载体的构建及其在系膜细胞的表达被引量：5
- 1999年
- 目的 以绿色荧光蛋白（ Ｇｒｅｅｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ， Ｇ Ｆ Ｐ） 为报告基因，构建纤溶酶原激活物抑制物１（ Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒｉｎｈｉｂｉｔｏｒ１ ， Ｐ Ａ Ｉ１） 与 Ｇ Ｆ Ｐ融合基因的真核表达质粒，在活细胞状态下观察 Ｐ Ａ Ｉ１／ Ｇ Ｆ Ｐ融合蛋白在大鼠系膜细胞中表达 。方法 利用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ） 技术，从含有编码人类 Ｐ Ａ Ｉ１（ｈ Ｐ Ａ Ｉ１） 全长ｃ Ｄ Ｎ Ａ 序列的质粒ｐ Ｕ Ｃ１９ Ｐ Ａ Ｉ１ 中扩增出ｈ Ｐ Ａ Ｉ１ 的编码区全长ｃ Ｄ Ｎ Ａ 序列，定向克隆至真核表达载体ｐ Ｃ Ｍ Ｘ Ｇ Ｆ Ｐ。利用脂质体为转染载体，将表达质粒转染至体外培养的大鼠系膜细胞。利用 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交、 Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹、荧光显微镜直接观察以及纤维蛋白平板等方法检测 Ｐ Ａ Ｉ１／ Ｇ Ｆ Ｐ融合基因在大鼠系膜细胞的表达。结果 转染组大鼠系膜细胞 Ｐ Ａ Ｉ１ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达、细胞培养上清 Ｐ Ａ Ｉ１ 活性均较对照组明显增高。大鼠系膜细胞表达的融合蛋白 Ｐ Ａ Ｉ１／ Ｇ Ｆ Ｐ 对尿激酶型纤溶酶原激活物（ｕ Ｐ Ａ） 有明显的抑制活性，并能在荧光显微镜下激发绿色荧光。?
- 于志恒陈香美廖洪军叶一舟付博
- 关键词：PAI-1绿色荧光蛋白系膜细胞肾小球
- 肾小球内皮细胞凋亡与细胞外基质表达被引量：3
- 1996年
- 用不加生长因子的无血清培养方法诱导人肾小球内皮细胞凋亡。结果显示，培养４８ｈ后无血清培养组内皮细胞的ＤＮＡ电泳呈现凋亡细胞典型的“梯形结构”条带；同时用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法发现，凋亡内皮细胞纤维连接蛋白的蛋白质和基因表达均明显增高。提示肾小球内皮细胞的凋亡紊乱可能与肾小球硬化时细胞外基质的积聚有关，为揭示肾小球肾炎及肾小球硬化的发生和转归提供了理论依据。
- 王建中陈香美徐启河傅博于力方廖洪军叶一舟
- 关键词：肾小球肾炎细胞凋亡纤维连接素
- 原位末端转移酶地高辛标记法检测凋亡细胞被引量：1
- 1997年
- 采用地高辛原位末端标记法（ＩｎＳｉｔｕＥｎｄＬａｂｅｌｉｎｇ，ＩＳＥＬ），建立了Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ细胞的原位检测体系。结果显示：小鼠胸腺细胞在体外培养８ｈ时，台盼兰拒染率为９４％～９５％，地塞米松刺激的胸腺细胞ＤＮＡ电泳呈典型的“梯形条带（Ｌａｄｄｅｒｐａｔｅｒｎ）”，ＩＳＥＬ标记的细胞阳性率为７４．４％，未经地塞米松刺激和未经培养直接标记的胸腺细胞阳性率分别为２８．６％和１０．２％。
- 叶一舟廖洪军董柯程庆砾陈香美
- 关键词：细胞凋亡末端转移酶原位标记
- 低分子量肝素降低肾衰模型大鼠IV型胶原蛋白的表达
- 2003年
- 探讨在肾小球硬化过程中 ,低分子量肝素治疗对细胞外基质和凝血酶受体表达的影响 ,用 5 6肾切除的方法诱导大鼠局灶节段性肾小球硬化模型并给予低分子量肝素治疗 2 0周 ,通过RT PCR和免疫组化法观察低分子量肝素对 5 6肾切除大鼠残肾组织中IV型胶原、凝血酶受体基因表达的影响。低分子量肝素治疗能显著降低 5 6肾切除大鼠蛋白尿、血肌酐、血脂和减轻肾组织的病理改变程度 ,并且显著下调IV型胶原、凝血酶受体mRNA表达。结果提示低分子量肝素可能通过影响凝血酶受体mRNA表达 ,减轻肾小球重塑过程中细胞外基质的异常代谢、沉积。
- 王文新石晓云周伟陈香美叶一舟师锁柱
- 关键词：低分子量肝素肾衰细胞外基质凝血酶受体
- 大鼠肾组织中AT_(1A)mRNA的原位杂交检测
- 1997年
- 大鼠肾组织中ＡＴ１ＡｍＲＮＡ的原位杂交检测师锁术陈香美叶一舟瘳洪军程庆砾我们用血管紧张素Ⅱ受体１亚型（ＡＴ１Ａ）探针原位杂交观察了大鼠肾组织中的ＡＴ１ＡｍＲＮＡ的分布，希望为地高辛标记ＲＮＡ探针原位杂交的广泛应用及ＡＴ１Ａ的进一步研究提供一定的实验依...
- 师锁术陈香美叶一舟瘳洪军程庆砾
- 关键词：原位杂交检测地高辛标记肾组织MRNA肾间质
- AT2受体基因敲除后对小鼠肾脏中TGFβ表达的作用被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨血管紧张素Ⅱ2型(AT2)受体基因敲除后对肾组织中转化生长因子β(TGFβ)的作用,揭示AT2受体基因缺失后导致肾脏损伤的机制。方法:检测了3～24月龄野生型(AT2+/+)和AT2受体基因敲除(AT2-/-)两种小鼠血浆中血管紧张素Ⅱ活性,以及肾组织中血管紧张素Ⅱ1型(AT1)受体、TGFβ和纤维连接蛋白(FN)的基因表达,并观察了12～21月龄的AT2-/-小鼠经过AT1受体拮抗剂缬沙坦治疗(30mg/kg/日)3个月后肾组织中TGFβ和FN的mRNA表达改变。结果:(1)随着小鼠月龄的增长,在21和24月龄时,AT2-/-小鼠血浆中血管紧张素Ⅱ的活性显著高于同龄AT2+/+小鼠。(2)在15～24月龄时,AT2-/-小鼠肾组织中AT1受体、TGFβ和FN的mRNA表达明显增强,显著高于同龄的AT2+/+小鼠和3月龄的AT2-/-小鼠,而在AT2+/+小鼠各月龄组中,肾组织中AT1受体、TGFβ和FN的mRNA表达水平则未见明显改变。(3)12～21月龄的AT2-/-小鼠经AT1受体拮抗剂缬沙坦治疗后,肾组织中TGFβ和FN的mRNA表达水平与同龄未治疗的AT2-/-小鼠比较有显著降低。结论:AT2受体基因敲除后导致的肾脏损伤可能与AT1受体的功能增强,以及引起的TGFβ表达增强、细胞外基质产生增多有关。
- 李文歌叶一舟付博陈香美
- 关键词：肾脏转化生长因子Β纤维连接蛋白
