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链霉菌分化关键基因——whiG在大肠杆菌的克隆和高表达被引量：1: 1995年; whiG结构基因翻译起始位点邻近的序列区域被改造了6个碱基。利用聚合酶链式反应(PCR)扩增了该基因,序列分析验证了改造后的整个DNA序列,并定向克隆到大肠杆菌高效表达载体pET11c的T7噬菌体10启动子的下游,转化可被IPTG诱导产生T7 RNA聚合酶的受体菌株——大肠杆菌BL21(DE3)。诱导后的重组菌株,经蛋白提取,SDS-PAGE结果表明whiG在大肠杆菌中获得了高效表达,其表达量约为不溶性蛋白总量的20％。经抗体制备,Western杂交证明了高效表达的产物确是whiG的编码产物——σ^(whiG)。whiG基因被亚克隆到链霉菌的表达质粒载体pIJ6021,转化天蓝色链霉菌孢子形成缺陷突变株C71后,使其能恢复孢子的形成,进一步证明了改造后的whiG基因的生物学功能。; 谭华荣田宇清杨海花吴畏董可宁K F ChaterM J Buttner; 关键词：链霉菌分化大肠杆菌基因表达克隆

圈卷产色链霉菌分化及其特性的研究被引量：14: 1994年; 链霉菌分化的分子生物学研究是一个饶有兴趣并富有挑战性的世界前沿研究课题.在原核生物的分化研究中,主要以枯草杆菌(Bacillus subtilis)作为模式系统,但枯草杆菌的生命周期尤其是分化过程远比链霉菌简单,不象链霉菌有基质菌丝、气生菌丝、菌丝螺旋和孢子分隔那样的发育分化过程[1].在真核生物中也有分化研究的报道,如构巢曲霉、酵母等.由于真核生物的基因结构比原核生物复杂得多,弄清分化中基因调控的关系就更加困难.因此,选用链霉菌作分化研究的材料有其独一无二的优越性.国际上有关链霉菌的分子生物学研究,近年来主要以链霉菌的抗生素生物合成基因和链霉菌的分化基因两个大的方面作为研究的热点和主攻方向,并展开了一些开拓性的研究.; 谭华荣吴畏田宇清杨海花宋幼新董可宁黄喜平宋大康; 关键词：链霉菌分化

链霉菌分化调控启动子——P_(TH4)和P_(TH270)的体内转录研究: 1997年; 天蓝色链霉菌分化调控启动子P_(TH4)和P_(TH270)被分别亚克隆到链霉菌启动子探针载体pIJ4083后,构建的重组质粒被命名为pIJ4470和pIJ4471.当pIJ4470和pIJ4471转化天蓝色链霉菌的白色分化阻断突变株(C85,C70,C71,C17和C119)后,通过pIJ4083上儿茶酚加氧酶报告基因的表达可知启动子的活性.从构建的重组菌株中进行了总RNA的提取.用同位素标记P_(TH4)和P_(TH270)的5’-端制备成了探针,以不同来源的RNA为模板与制备的探针分别进行了DNA-RNA杂交.S1 mapping的结果表明,来自C85/pIJ4470,C85/pIJ4471,C70/pIJ4470,C70/pIJ4471及C17/pIJ4470,C17/pIJ4471菌株的RNA杂交后都给出了较强的阳性杂交信号,而来自C71/pIJ4470,C71/pIJ4471菌株的RNA杂交未出现阳性信号,来自C119/pIJ4470与C119/pIJ4471菌株的RNA杂交后有弱的信号.上述结果表明启动子P_(TH4)和P_(TH270)的转录依赖于链霉菌分化关键基因whiG,部分依赖于分化基因whiH,而不依赖于分化基因whiA,whiB及whiI.; 谭华荣田宇清杨海花吴畏董可宁K.F.Chater; 关键词：分化

链霉菌发育调控启动子——P_(TH270)对细胞分化的影响被引量：1: 1997年; 在原核生物发育分化的分子生物学研究中,以枯草杆菌为模式系统进行了许多研究,但其生命周期特别是分化过程比较简单,不象链霉菌有基质菌丝、气生菌丝、菌丝分隔形成多细胞,然后断裂形成单孢子的过程。链霉菌的这一性状与真核生物丝状真菌的分化相似。因此在原核生物中,链霉菌是研究分化基因表达调控的良好模式材料,为在时空上研究发育分化基因的多水平调控提供了有利条件。链霉菌的发育调控启动子(P_(TH270))是国际上首先克隆的两个启动子之一。一些研究结果表明该启动子依赖于链霉菌分化关键基因——whiG。虽然该启动子的序列已被测定,启动子的-10区和-35区已被精确定位,但该启动子在链霉菌发育分化中是如何调控的,当它以高拷贝数的形式存在时对细胞内含物的组份有何影响,这种影响怎样与分化关联,这些都是有待解决的重要问题。; 谭华荣杨海花田宇清吴畏ChaterK.F.; 关键词：链霉菌发育细胞分化

与链霉菌发育分化有关的启动子——P_(TH4)的调控研究被引量：1: 1997年; 依赖于天蓝色链霉菌分化关键基因——whiG的发育调控启动子(P_(TH4))所控制的下游基因被克隆了,用双脱氧链终止法进行了双链测序.结果表明在1597bp的DNA片段中含有一个完整的开读框架(ORF).在计算机的蛋白文库比较中未找到与该基因产物同源的已知蛋白,可能是一个新的蛋白产物.用基因破坏的策略初步研究了该基因的生物学功能,发现该基因的破坏影响了放线紫红素的产生,即与天蓝色链霉菌放线紫红素的生物合成有关.这进一步证明启动子——P_(TH4)在链霉菌分化中的多级调控作用.; 谭华荣杨海花田宇清吴畏董可宁K.F.Chater; 关键词：链霉菌分化发育

天蓝色链霉菌孢子形成的关键基因——whiG的诱导表达: 1995年; 与链霉菌分化有关的whiG结构基因已亚克隆到链霉菌表达载体pAK203的tipA启动子下游.该启动子能被硫链丝菌素诱导.whiG基因的诱导表达不仅可使天蓝色链霉菌孢子形成缺陷突变株C71恢复产生孢子的能力,而且也能使天蓝色链霉菌野生型菌株J1501和变铅青链霉菌TK54的孢子形成更为丰满.Western杂交也进一步证实了诱导表达后whiG基因产物——σ^(whiG)产量的增加.这为依赖于σ^(whiG)RNA多聚酶的发育调控启动子体外转录的研究提供了有利条件.; 董可宁杨海花田宇清吴畏谭华荣; 关键词：链霉菌天蓝色链霉菌孢子形成基因表达细菌

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