WNT(wingless-type MMTV integration site family)蛋白是一类分泌性糖蛋白家族,Wnt5a为非经典Wnt蛋白的典型代表,在各种器官的发育中发挥重要作用。为了探索东亚三角涡虫Dj Wnt5a基因在涡虫胚胎不同发育阶段中的表达和功能,利用RT-PCR(reverse transcription PCR)和RACE(rapid-amplification of c DNA ends)技术克隆并分析了Dj Wnt5a c DNA的表达。结果表明,Dj Wnt5a基因由1 523 bp组成,编码371个氨基酸,其中含有23个保守的半胱氨酸结构域。利用MAGE 5.2构建进化树分析发现,东亚三角涡虫与地中海涡虫的Wnt5a聚群,并位于两侧对称动物的基部,可能是Wnt5a的原始类型。利用整体原位杂交技术分析Dj Wnt5a基因的表达,结果显示,Dj Wnt5a基因在涡虫发育的第三阶段开始表达,主要集中在胚胎咽及胚带;随着胚胎发育直至完全孵化出幼虫,Dj Wnt5a基因逐步在神经原基和中枢神经系统表达。由此推断,东亚三角涡虫Dj Wnt5a基因在涡虫胚胎发育时,参与神经原基的形成和分化,是涡虫胚胎神经发育必不可少的基因之一。
本试验旨在探讨环境内分泌干扰物双酚A(BPA)对涡虫抗氧化酶(SOD,CAT,GPx)的活性及相关基因表达的影响。采用不同浓度的BPA处理涡虫48 h,然后测定抗氧化酶活性,并应用半定量RT-PCR技术探讨相关基因的变化。在BPA胁迫下,SOD活性呈现上升趋势、CAT活性表现出了先上升后下降的趋势,GPx活性总体上变化不大。随BPA浓度的增加,Dj SOD m RNA表达量上升,并呈现剂量-反应关系,Dj CAT及Dj GPx m RNA表达量也呈现出明显的上调现象,但变化趋势并不同于酶活性。BPA诱导涡虫的氧化应激反应,改变抗氧化酶SOD、CAT基因的转录水平。
