吴红玉
- 作品数：50 被引量：131H指数：6
- 供职机构：第二军医大学附属长海医院消化内科更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划连云港市卫生局科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人胰腺癌编码SUFU蛋白的新剪接体
- 2013年
- 目的分析人胰腺癌组织和细胞中Hedgehog信号通路主要成员SUFU蛋白的剪接体。方法用反转录和3’cDNA末端快速扩增（3’RACE）法扩增suppresseroffused（SUFU）片段，测序发现一个新的外显子，应用RT—PCR方法扩增全长含新外显子的SUFU（nSUFU）。采用脂质体法将nSUFU及SUFU转染SWl990细胞，应用蛋白质印迹法检测SWl990细胞及胰腺癌组织新剪接体编码的蛋白质的表达。结果通过3’RACE法的第二轮巢式PCR扩增产物约600bp，经测序并将其序列与NCBI网站Blast序列对比分析发现，在SUFUmRNAisoforml（NM_016169．3）的第10外显子和第11外显子之间插入了一个长为126bp的新外显子。通过对SWl990细胞的验证，包含新外显子的完整的新剪接体片段长约1400bp。转染nSUFU的SWl990细胞强表达nSUFU蛋白，胰腺癌组织既表达SUFU蛋白，又表达nSUFU蛋白。结论人类胰腺癌组织和细胞中存在一种新的可以编码SUFU蛋白的剪接体。
- 徐清满晓华高军李兆申龚燕芳吴红玉金晶
- 关键词：胰腺肿瘤HEDGEHOG信号通路剪接体SUFU
- 胰腺癌组织中PTCH蛋白免疫组化检测被引量：7
- 2005年
- 目的:分析胰腺癌组织中Hedgehog信号转导通路的PTCH分子异常表达情况及其临床意义。方法:收集20例手术切除的胰腺癌及癌旁胰腺组织石蜡标本,利用EnVision免疫组化法分别检测癌组织和癌旁胰腺组织PTCH的表达情况,并统计分析其阳性率与肿瘤大小、分化程度及转移的相关性。结果:20例胰腺癌中PTCH阳性表达11例(55%),20例癌旁胰腺组织中无阳性表达病例;PTCH阳性率与肿瘤分化程度呈正相关(P<0.05),与肿瘤的大小、淋巴及远处转移无关。结论:PTCH异常表达与胰腺癌分化程度显著相关,高分化肿瘤组织中其表达率较高,检测其表达有助于胰腺癌的诊断。
- 邵建国许国铭屠振兴高军龚燕芳许爱芳满小华吴红玉金晶
- 关键词：胰腺肿瘤PTCH
- RNA干扰组蛋白去乙酰化酶1对人胰腺癌细胞增殖、凋亡的调控机制研究被引量：8
- 2010年
- 目的观察沉默组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)基因对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。方法胰腺癌PaTu8988细胞株分为空白对照组(不予任何处理)、阴性对照siRNA组(予以30nmol/L阴性siRNA)、siRNA1组(予以15nmol/LHDAC1siRNA)和siRNA2组(予以30nmol/LHDAC1siRNA)。siRNA转染48h后,用相对实时定量RT-PCR法和West-ernblotting检测HDAC1基因表达情况;相对实时定量RT-PCR法检测细胞增殖凋亡相关基因p21、Bcl-2、Bax的表达;WST-8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡变化。结果转染HDAC1siRNA48h后人胰腺癌PaTu8988细胞中HDAC1mRNA表达量在siRNA1组和siRNA2组分别为46.1%±6.1%和32.3%±1.4%,均显著低于空白对照组(100.0%±3.4%)和阴性对照siRNA组(87.4%±28.3%,P<0.05)。Westernblotting显示HDAC1蛋白表达量亦明显下降,以siRNA2组表达量最低(P<0.05)。WST-8法检测显示4组细胞存活率分别为100%±17.1%、87.1%±5.0%、68.7%±4.7%、61.6%±2.0%,siRNA1组和siRNA2组与其他各组相比差异显著(P<0.05)。流式细胞术检测显示上述4组胰腺癌细胞凋亡率分别为4.20%±0.95%,4.59%±1.26%,10.09%±1.36%,11.19%±6.07%,与空白对照组和阴性对照siRNA组相比,siRNA1组和siRNA2组凋亡率显著增高(P<0.05)。siRNA1组和siRNA2组p21、BaxmRNA相对表达量明显高于其他各组(P<0.05),而Bcl-2mRNA相对表达量明显低于其他各组(P<0.05)。结论HDAClsiRNA能特异、有效地抑制人胰腺癌PaTu8988细胞HDACl的表达,同时抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡,其机制可能与上调p21、Bax表达,下调Bcl-2表达有关。
- 高道键徐岷张玉琦李雅洁满晓华吴红玉金晶
- 关键词：胰腺肿瘤RNA干扰细胞增殖
- 超声内镜探头引导下乙醇瘤内注射治疗胰腺癌的实验研究被引量：4
- 2013年
- 目的探讨超声内镜探头引导下乙醇瘤内注射治疗胰腺癌的疗效。方法原位胰腺癌裸鼠20只随机表法随机分为2组，实验组行95％乙醇注射治疗，对照组注射生理盐水，比较治疗前及治疗后24h血清淀粉酶变化。分别于治疗前及治疗后第7天行超声内镜探头测量肿瘤大小，计算相对肿瘤体积和相对肿瘤增殖率。光学显微镜下观察治疗前及治疗1周后肿瘤组织病理改变。结果与治疗前相比，实验组治疗后24h血清淀粉酶出现轻度增高[（2873．5±958．9）U／L比（2004．3±402．0）U／L，P〉0．05]，但与对照组治疗后24h的[（2066．1±396．6）U／L]比较，差异无统计学意义（P=0．061）。实验组治疗后第7天相对肿瘤体积明显低于对照组[（0．45±0．08）比（1．25±0．06），P〈0．01）]，相对肿瘤增殖率为36％。治疗1周后实验组病理组织学显示肿瘤坏死变性严重，有大面积凝固性坏死；而对照组仅见少量坏死。结论95％乙醇瘤内注射可造成肿瘤坏死，在裸鼠原位胰腺癌模型中有一定的治疗效果。
- 张文颖吴红玉郭杰芳郭妍刘晓龚艳芳高军金震东李兆申
- 关键词：胰腺癌内窥镜超声检查乙醇注射动物实验
- MHCⅡ类转激活因子基因的重组腺病毒载体的构建
- 2009年
- 目的构建含有主要组织相容性复合物（major histocompatibility complex，MHC）Ⅱ类分子激活物（CⅡTA）基因的重组腺病毒载体。方法回收CⅡTA的PCR产物插入pUC57中，用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切，U—Gene凝胶回收纯化3300bp目的基因片段。用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切质粒载体pShuttle—GFP—CMV，用T4DNA连接酶将上述目的基因片段与pShunle—GFP—CMV片段连接，得到穿梭质粒pShuttle—GFP—CMV—CⅡTA，并经KpnⅠ单酶切及测序鉴定。Ⅰ—CeuⅠ／Ⅰ—SceⅠ双酶切处理，回收目的片段，将pAdxsi载体片段和插入片段进行酶连接，得到腺病毒质粒pAdxsi—GFP—CⅡTA，经XhoⅠ酶切鉴定后转染HEK293细胞并培养出毒。扩增、纯化重组腺病毒AdCⅡTA，并测定病毒滴度。结果重组穿梭质粒pShuttle—GFP—CMV—CⅡTA经KpnⅠ单酶切及测序分析，证实与GeneBank中公布的小鼠CⅡTA（NM_007575）序列完全相符。重组腺病毒pAdxsi—GFP—CⅡTA构建成功后在HEK293细胞中包装产生的重组腺病毒AdCⅡTA对HEK293细胞有致病作用。经多次重复感染并纯化后，病毒滴度达2．0×10^11PFU／ml。结论含小鼠CⅡTA基因的重组腺病毒已成功构建。
- 张敏敏杨骅金晶吴红玉李兆申
- 关键词：胰腺肿瘤基因基因疗法
- 胰腺癌中GLI1、PTCH1 mRNA的表达及其与临床指标相关性分析被引量：3
- 2010年
- 目的 检测胰腺癌组织中GLI1、PTCH1 mRNA的表达情况,探讨其临床意义.方法 应用实时荧光定量PCR方法检测35例胰腺癌组织及27例癌旁正常胰腺组织中GLI1、PTCH1 mRNA的表达,并分析它们与相关临床指标的关系.结果 胰腺癌组织GLI1 mRNA相对表达量为1.12～3.65,中位数为1.19;PTCH1 mRNA相对表达量为1.82～4.36,中位数为2.36.癌旁正常胰腺组织的GLI1 mRNA相对表达量为0.23～2.76,中位数为0.87;PTCH1 mRNA相对表达量为1.11～2.17,中位数为0.58.癌组织GLI1、PTCH1 mRNA的表达量均显著高于癌旁正常胰腺组织（P＜0.05）,且GLI1 mRNA与PTCH1 mRNA的表达水平呈正相关（r=0.532,P＜0.05）;GLI1 mRNA的表达水平与胰腺癌的分化程度及淋巴结转移相关（P＜0.05）.结论 GLI1、PFCH1基因参与胰腺癌的发生;GLI1的表达与胰腺癌的侵袭及淋巴结转移有关.
- 郭杰芳高军李兆申龚燕芳金晶满晓华吴红玉
- 关键词：胰腺肿瘤肿瘤侵袭肿瘤转移
- 组蛋白去乙酰化酶1对人胰腺癌细胞增殖凋亡的影响被引量：3
- 2009年
- 目的观察沉默组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）基因对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖及凋亡的影响。方法培养胰腺癌PaTu8988细胞株，设空白对照组（未予任何处理）、阴性对照组[予30nmol／L阴性小干扰RNA（siRNA）]、HDACl低剂量组（予15nmol／LHDAC1s．RNA）和HDACl高剂量组（予30nmol／LHDAC1siRNA），siRNA转染48h后，分别采用相对实时定量PCR法和Western印迹法检测HDAC1基因在mRNA和蛋白水平的沉默效率，细胞计数试剂盒法检测siRNA干扰前、后细胞增殖变化，流式细胞技术检测干扰前、后细胞凋亡变化。结果转染HDAC1siRNA48h后，低剂量组和高剂量组人胰腺癌PaTu8988细胞中HDAC1mRNA表达率分别为46．1％±6．1％和32．3％±1．4％，均显著低于空白对照组（100．0％±3．4％）和阴性对照组（87．4％±28．3％），差异有统计学意义（P值均〈0．05）。空白对照组和阴性对照组HDAC1蛋白表达水平高于其余两组。空白对照组、阴性对照组、HDAC1低剂量组和HDAC1高低剂量组的细胞存活率分别为100．0％±17．1％、87．1％±5．0％、68．7％±4．7％和61．6％±2．0％，细胞凋亡率分别为4．20％±0．95％、4．59％±1．26％、10．09％±1．36％和11．19％±6．07％，空白对照组和阴性对照组与其余两组比较，差异均有统计学意义（P值均〈0．05）。结论HDAC1siRNA能特异、有效地抑制人胰腺癌PaTu8988细胞HDAC1表达，抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡。
- 高道键徐岷张玉琦杜奕奇高军龚燕芳吴红玉许国铭李兆申
- 关键词：胰腺肿瘤RNA干扰
- TLR4蛋白在胃癌组织中的表达及其与微血管密度的关系被引量：1
- 2012年
- 目的探讨Toll样受体4(TLR4)蛋白在胃癌发生、发展中的作用及机制。方法采用免疫组化法检测52份胃癌组织及30份正常胃组织标本中TLR4蛋白表达;采用CD34抗体标记微血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD)。分析TLR4蛋白表达、MVD与胃癌主要临床病理参数的关系。结果胃癌组织TLR4蛋白阳性率和MVD分别为76.9%和32.5±8.3,均显著高于正常胃黏膜(P<0.01);有淋巴结转移者TLR4阳性率显著高于无淋巴结转移者(P<0.05);TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期者TLR4蛋白表达率明显高于Ⅰ+Ⅱ期者(P<0.05)。MVD与肿瘤TNM分期、淋巴结转移及分化程度密切相关(P<0.01,P<0.05)。Spearman等级相关分析表明,TLR4蛋白表达与MVD呈显著正相关(P<0.01)。结论 TLR4蛋白表达与胃癌的发生发展密切相关,其机制可能为促进肿瘤血管生成。
- 孙运良满晓华吴红玉朱明
- 关键词：TOLL样受体4胃肿瘤胃癌CD34微血管密度
- 短发夹状RNA沉默GLI1基因对人胰腺癌细胞Panc-1生物学行为的影响
- 目的通过构建稳定转染 shRNA 表达质粒载体的人胰腺癌细胞 Panc-1-U6-GLI1,探讨 GLI1短发夹状 RNA(shRNA)载体对 Panc-1 GLI1基因的沉默作用及生物学效应。方法采用脂质体介导的方法将...
- 郭杰芳李兆申金震东高军龚燕芳吴红玉满晓华
- 文献传递
- 大黄对急性坏死性胰腺炎大鼠炎性介质表达的影响被引量：10
- 2011年
- 目的观察中药生大黄空肠灌注对急性坏死性胰腺炎（ANP）大鼠胰腺组织炎性介质表达的影响。方法sD大鼠33只，按完全随机法分为对照组、ANP组及生大黄治疗组，每组11只。胰胆管逆行注射3％牛磺胆酸钠溶液方法制备ANP模型，同时做空肠造瘘。生大黄组于造模后空肠灌入1g／ml生大黄煎液1ml／kg体重。造模36h后处死大鼠。取血测定淀粉酶活性；取部分胰腺组织常规病理检查；取部分胰腺组织抽提总mRNA，采用实时PCR方法测定胰腺组织IL-6、IL-8、TNF-αmRNA表达。结果造模后大鼠血淀粉酶活性明显升高，胰腺组织大片坏死、出血，大量炎细胞浸润，符合ANP改变。对照组胰腺组织IL-6、IL-8、TNF-αmRNA表达量分别为0．29±0．13、0．35±0．15、1．09±0．32：ANP组分别为2．23±0．49、2．26±0．51、5．24±0．59，均较对照组显著增加（P值均〈0．05）；生大黄组分别为0．974-0．30、1．02±0．34、2．59±0．36，均较ANP组显著减少，但仍显著高于对照组（P值均〈0．05）。结论生大黄空肠灌注治疗ANP大鼠可减少胰腺组织IL-6、IL-8、TNF-αmRNA的表达，从而减轻胰腺的病理损伤。
- 金晶高军吕顺莉刘枫龚燕芳满晓华吴红玉李兆申
- 关键词：胰腺炎急性坏死性白细胞介素6白细胞介素8
