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甲基营养菌M.sp.MB200中serA基因功能初探被引量：1: 2014年; serA基因编码3-磷酸甘油酸脱氢酶(PGDH),此酶在合成L-丝氨酸的第一步起催化作用。利用质粒pCM80分别与野生型基因serA、缺失了C末端ACT功能域的突变基因serA△77构建了重组体表达菌MB200/pCM80serA和MB200/pCM80serA△77。通过分析发现野生型基因重组表达菌的PGDH酶活受L-丝氨酸浓度影响较大,当反应体系中的L-丝氨酸浓度为40μmol/L时,酶活减少了约1/3;缺失了ACT功能域的基因表达菌的PGDH酶活基本不变,不受L-丝氨酸浓度的影响。进一步在静息细胞反应条件下,对重组菌和野生菌株MB200进行发酵产L-丝氨酸的研究,实验发现MB200/pCM80serA产L-丝氨酸的量为13.6mg/mL,MB200/pCM80serA△77产L-丝氨酸的量为16.8 mg/mL,而野生型菌株M.sp MB200的产量为6.4 mg/mL,重组菌的L-丝氨酸产量都有所提高,且MB200/pCM80serA△77的产量提高更多。结果证实了甲基营养菌MB200中serA基因与产L-丝氨酸具有反馈抑制关系,为进一步解除反馈抑制并发酵产L-丝氨酸奠定了基础。; 蒋琼马晟周侃李献唐咸来李俊芳张敏申佩弘; 关键词：SERA L-丝氨酸

甲基营养菌MB200与L-丝氨酸耐受性相关基因的克隆及其serA基因的初步研究: 甲基营养菌被定义为“能够利用包含一个或多个碳原子但不含碳碳键的低碳复合物生长的一类微生物”,它的代谢途径特殊且应用广泛,因此研究该类菌的代谢与调节机制无论从理论上还是实际应用上都具有重要的意义。实验所用的菌株甲...; 周侃; 关键词：甲基营养菌 MB200 L-丝氨酸耐受性 SERA 重组菌; 文献传递

甲基营养菌Methylobacterium sp.MB200中与L-丝氨酸耐受性相关基因的克隆与分析被引量：1: 2011年; 甲基营养菌MB200,能利用非C-C键低碳化合物生长并合成L-丝氨酸,对L-丝氨酸耐受浓度低,提高其在静息细胞反应系统中对L-丝氨酸的耐受能力可更好的提高L-丝氨酸的产量。利用质粒转座子pTnMod-RKm'构建了甲基营养菌MB200的突变体库,往培养基中添加20 mg/mLL-丝氨酸对突变体库中的突变体进行平板筛选,共筛选到177株耐受L-丝氨酸的突变体,以10mg/mL的浓度梯度复筛,发现某些突变体能最高耐受40 mg/mL L-丝氨酸。分别提取突变体总DNA,用BamHI酶随机酶切后连接到克隆载体pMD18-T上,导入到大肠杆菌感受态细胞DH5α中,利用双抗性在(转座子抗性与T载体上的抗性)平板上挑取转化子,并提取质粒,酶切验证后进一步测序。共克隆到了17个基因,为提高甲基营养菌对L-丝氨酸的耐受能力提供了可研究的基因资源。; 周侃唐咸来蒋承建宋修鹏李俊芳田丹丹申佩弘; 关键词：METHYLOBACTERIUM 突变体 L-丝氨酸耐受性

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周侃