孔登
- 作品数：22 被引量：54H指数：5
- 供职机构：潍坊医学院更多>>
- 发文基金：山东省中医药科技发展计划项目国家自然科学基金山东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学自动化与计算机技术更多>>
- 融合蛋白ScFv(3G11)-mms13在大肠杆菌中的表达及鉴定
- 2013年
- 目的构建抗Ⅳ型胶原酶单链抗体基因ScFv与磁小体膜蛋白基因mms13融合基因的原核表达载体pET30a(+)-ScFv-mms13,在大肠杆菌中诱导表达并对融合蛋白进行初步鉴定。方法 PCR扩增融合基因ScFv-mms13,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后克隆入原核表达载pET30a(+)质粒,构建重组表达质粒。将重组质粒导入大肠杆菌DH5a中,利用PCR、酶切筛选鉴定重组菌株。用异丙基疏代半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,通过改变IPTG浓度、诱导时间优化表达条件。表达产物经SDS-PAGE电泳和Western blot法进行鉴定。结果重组质粒经PCR、酶切、测序证实重组质粒pET30a(+)-ScFv-mms13构建成功。SDS-PAGE电泳结果分析表明诱导菌株在43kDa左右处有明显异源蛋白表达,且确定了在IPTG终浓度为0.2mmol/L、诱导时间为6h时为表达稳定。对表达蛋白进行定位分析确定表达蛋白主要以包涵体形式存在,部分存在于可溶细胞质中。Western blot结果实证该表达产物可与His-tag抗体发生特异性结合,提示为目的融合蛋白。结论成功构建pET30a(+)-ScFvmms13表达载体并表达获得目的融合蛋白。
- 邢秋翠孔登纪国强杨柳青王小柯崔楠
- 关键词：SCFV蛋白表达SDS-PAGEWESTERNBLOT
- 基于创新人才培养的药物分析实践教学体系被引量：7
- 2016年
- 为充分发挥药物分析实践课程体系在药学专业创新型人才培养中的重要作用,教学中践行"一中心、二阶段、三层次"药物分析实践教学模式,开展多门专业课程相融合的综合性实验及以过期药品检验为代表的创新设计性实验。通过实践教学改革,夯实了学生的基本实验技能,提高了学生对整体知识框架的把握能力,培养了学生的科研素质和创新意识。
- 王晓红段煜孔登
- 关键词：药物分析实践教学教学模式
- 单核苷酸距离多态性比较核酸序列进行物种分类的方法
- 本发明提出了一种单核苷酸距离多态性比较核酸序列进行物种分类的方法，包括如下步骤：S10：对DNA序列或者RNA序列上的每个核苷酸进行编号；S20：计算DNA序列或者RNA序列上相邻同种核苷酸的距离；S30：统计每种核苷酸...
- 孔登王晓红
- 文献传递
- 脐静脉内皮细胞低密度种植构建组织工程血管
- 2008年
- 背景:种子细胞来源不足是组织工程研究领域的难题之一,如何充分有效的利用有限的种子细胞,是一个值得深入研究的课题。目的:拟验证脐静脉内皮细胞低密度种植于脱细胞猪动脉支架实现血管内皮化的可行性。设计、时间及地点:观察性实验,于2006-10/2007-04在潍坊医学院生物化学实验室完成。材料:取新鲜猪颈动脉制备脱血管支架;新鲜脐带由潍坊人民医院产科提供,用于内皮细胞的分离和培养。方法:十二烷基硫酸钠和脱氧胆酸钠联合处理获取脱细胞猪动脉支架。0.1%胶原酶灌注获取脐静脉内皮细胞,光镜和免疫组织化学鉴定。分别将细胞以2×105cm-2低密度和2×106cm-2高密度种植于支架,静态培养11d。主要观察指标:DAPI染色法连续观察内皮细胞在支架上的生长情况。第11天对支架进行苏木精-伊红染色,扫描电镜观察,ELISA检测2×105cm-2低密度和2×106cm-2高密度培养液纤维连接蛋白的表达。结果:脱细胞支架细胞成分完全去除,胞外基质保存完好;细胞呈梭形或多角形,核仁清晰,呈典型的铺路石样;免疫荧光检测可见细胞胞浆内有颗粒状红色阳性信号。采用DAPI法连续动态观察内皮细胞在支架上生长良好,贴壁较好;苏木精-伊红染色显示支架表面形成连续融合单层细胞;扫描电镜可见内皮细胞单层形成,细胞呈多角形,椭圆形。低密度种植的培养液中纤维连接蛋白的表达量较高密度种植的高,分别为(121±7.93)μg/106个细胞和(78.20±3.21)μg/106个细胞,两者相比,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:脐静脉内皮细胞低密度种植于脱细胞猪动脉支架不仅可以实现血管内皮化,而且利于增强内皮细胞和细胞外基质黏附力,提高贴壁细胞的抗应切力。
- 孙洪亮孔登肖琳蔡文娣黄焕生耿秀芳
- 关键词：纤维连接蛋白
- mms13、ScFv(3G11)及其融合基因在大肠杆菌中的表达
- 目的构建蛋白表达载体pET30a(+)-mms13、pET30a(+)-ScFv和pET30a(+)-ScFv-mms13,将其转入E.coli Rosetta诱导蛋白表达。对表达条件进行优化,并对表达蛋白进行定位分析,...
- 孔登王小柯邢秋翠陈永付新华王守训
- 关键词：AMB-1单链抗体融合基因WESTERNBLOT
- 氨基酸距离多态性比较蛋白质序列进行物种分类的方法
- 本发明提出了一种氨基酸距离多态性比较蛋白质序列进行物种分类的方法，包括如下步骤：S10：对蛋白质序列上的每个氨基酸进行编号；S20：计算蛋白质序列上相邻同种氨基酸之间的距离；S30：统计相邻同种氨基酸的不同距离在每条蛋白...
- 孔登陈永王晓红
- Sandwich教学法在药物分析课程教学中的应用被引量：3
- 2015年
- 药物分析是药学及相关专业一门重要的专业课程,知识面广但内容枯燥。文章介绍了Sandwich教学法在我校药物分析理论和实验课教学中的应用实践及体会。考试成绩分析和问卷调查结果表明,Sandwich教学法实现了教学的有效性,适应应用型人才培养目标,在药物分析教学中是一种值得推广的好方法。
- 王晓红段煜孔登
- 关键词：传统教学法药物分析
- 产地和生长年限对银杏叶中多糖和黄酮含量的影响被引量：8
- 2016年
- 目的:比较不同产地和生长年限银杏叶中多糖和黄酮类成分含量的差异。方法:对采集的16组银杏叶样品采用苯酚硫酸法测定多糖含量,HPLC法测定黄酮含量。结果:在不同产地,相同生长年限的银杏叶样品中,以安徽亳州产银杏叶中多糖含量最高,山东郯城银杏叶中黄酮含量最高;随着生长年限的增加,银杏叶中的多糖和黄酮含量亦逐年增加,其中多糖含量变化于14年趋于稳定,黄酮含量于10年后即增长缓慢。结论:不同产地和生长年限银杏叶中多糖及黄酮含量存在较大差异,银杏叶的药材质量受自然环境、来源、生长年限等因素影响。
- 王晓红孙延龙李万忠孔登
- 关键词：银杏叶多糖黄酮
- 氨基酸距离多态性比较蛋白质序列进行物种分类的方法
- 本发明提出了一种氨基酸距离多态性比较蛋白质序列进行物种分类的方法，包括如下步骤：S10：对蛋白质序列上的每个氨基酸进行编号；S20：计算蛋白质序列上相邻同种氨基酸之间的距离；S30：统计相邻同种氨基酸的不同距离在每条蛋白...
- 孔登陈永王晓红
- 文献传递
- 生物化学实验教学改革的思考与探索被引量：6
- 2010年
- 生物化学是一门重要的医学基础学科,如何提高教学质量、培养学生的创新能力,始终是医学院校培养学生的重点内容。通过生物化学实验教学方法进行反思,采取以学生为主体的研究型实验教学方法,改革实验教学,建立全新的教学理论与方法体系,培养学生的创新能力,提高实验教学质量。
- 杨晓云谭宁孔登王守训
- 关键词：生物化学实验教学质量
