孔莉
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：江苏大学基础医学与医学技术学院更多>>
- 发文基金：浙江省科技计划项目江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 杆状病毒GP64表面展示元件与L-天冬酰胺酶Ⅱ融合表达的初步试验被引量：1
- 2015年
- GP64是Ⅰ型杆状病毒的主要囊膜糖蛋白,利用基因重组技术在gp64中插入外源蛋白基因,二者在病毒表面融合表达活性肽或蛋白质,可以免去纯化表达产物的繁琐。L-天冬酰胺酶Ⅱ(ASP)是一种临床上广泛使用的蛋白类抗肿瘤药物,利用家蚕杆状病毒(BmNPV)GP64展示系统表面展示ASP,探讨以表面展示有ASP蛋白的出芽型病毒粒子(BV)生产抗肿瘤药物的可行性。构建重组转移载体pFast Bacdual-gp64sp-asp-gp64ctd,并转化E.coli DH10BacTM,通过蓝白斑筛选获得重组杆粒DNA,将重组杆粒DNA通过脂质体转染至Bm N细胞,获得了重组病毒。重组病毒大量感染Bm N细胞后72 h,收集感染病毒的细胞培养液超速离心纯化BV。采用奈氏试剂法检测接种重组病毒的Bm N细胞内表达融合ASP的酶活力为1 788.4U/mg;Western blot检测纯化后的BV中含融合ASP蛋白,然而BV中的ASP检测不出酶活性。试验结果提示,构建的杆状病毒GP64展示系统可以将ASP转到BV上,但产物的活性保持有待进一步研究。
- 孔莉吴岩刘永乌慧玲朱珊颖王文兵
- 利用家蚕杆状病毒da26基因融合表达L-天冬酰胺酶成熟肽
- 2013年
- L-天冬酰胺酶是一种有效的抗肿瘤药物,通过利用杆状病毒表达系统表达L-天冬酰胺酶的成熟肽序列asp(s)与da26的融合蛋白,利用家蚕生物反应器大量生产该蛋白,为L-天冬酰胺酶在临床上的广泛应用打下基础。
- 费建明孔莉施国方占鹏飞吴岩白雪川王文兵
- 关键词：家蚕多角体成熟肽L-天冬酰胺酶大肠杆菌
- 利用家蚕病毒颗粒表达和纯化抗肿瘤药物天冬酰胺酶被引量：1
- 2013年
- 目的:通过家蚕病毒颗粒简化抗肿瘤药物L-天冬酰胺酶的生产纯化过程,为抗肿瘤的药物生产提供依据。方法:利用基因重组技术构建pFastdual-polh-da26-asp融合蛋白真核表达载体,利用杆状病毒表达系统在家蚕细胞中表达融合蛋白,奈氏试剂法检测L-天冬酰胺酶活性。结果:成功构建了重组表达载体,融合蛋白在家蚕细胞中顺利表达,并检测到L-天冬酰胺酶在家蚕细胞中表达,活性为2 113.52 U/mg。结论:重组病毒颗粒成功表达,且L-天冬酰胺酶具有一定的活性;可以利用家蚕颗粒病毒简化纯化抗肿瘤药物L-天冬酰胺酶。
- 王文兵孔莉施国方吴岩白雪川费建明
- 关键词：家蚕杆状病毒L-天冬酰胺酶大肠埃希菌
