崔红
- 作品数：6 被引量：18H指数：3
- 供职机构：华南农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 蜂毒溶血肽基因在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达及其溶血机理研究
- 蜂毒溶血肽(meIntin)具有杀菌、消炎等作用，但也具有溶解红细胞作用，这极大的限制了其在医药和临床方面的应用，且目前尚未弄清其溶血机理。本实验旨在利用基因工程表达蜂毒溶血肽，为其作为药物生产提供一条有效的途径;同时初...
- 崔红
- 关键词：蜂毒溶血肽基因表达蜂毒素
- 文献传递
- 蜂毒素基因的突变与表达及其构效关系研究被引量：2
- 2006年
- 为获得保留有抗菌活性而降低溶血活性作用的蜂毒素,对其分子结构进行了改造.其中一条序列缺失Lys-7,另一条缺失Leu-9.用PCR技术获得两条新的蜂毒素基因,将其克隆到酵母表达载体pPICZα-A,获得重组质粒pPICZα-A-Mel1和pPICZα-A-Mel2.将2个重组质粒分别转化毕赤酵母菌GS115.筛选获得重组酵母菌.对重组酵母菌培养条件进行优化,在YEPD中含甘油2%,pH为7,重组酵母菌培养48h后,0.5%的甲醇诱导72h,表达目的蛋白通过Tricion-SDS-PAGE确定分子质量为5.4kD.杀菌效价分别达0.947、1.085.结果表明两条蜂毒素基因成功的在毕赤酵母中表达,经突变后表达的蜂毒素降低了溶血活性,同时保留了抗菌活性.
- 赵亚华白云崔红廖富蘋高向阳
- 关键词：蜂毒素毕赤酵母抗菌活性溶血活性
- 人β防御素3基因在巴斯德毕赤酵母细胞中的表达被引量：4
- 2006年
- 根据大肠杆菌对精氨酸密码子使用的偏爱性和β防御素3全基因中G、C、A、T含量的平衡,设计搭桥引物,通过PCR法合成人β防御素全基因序列,克隆到真核表达载体pPICZα-A,测序确认.将重组体电击转化酵母GS115.转化子经甲醇诱导表达,Tricine-SDS-PAGE分析,琼脂孔穴扩散法检测抑菌活性.结果表明,目的基因在毕赤酵母中已得到表达,表达量为0.22 mg/mL,重组人β防御素3对金黄色葡萄球菌有抑菌活性.
- 赵亚华黄蓬亮徐来祥白云崔红高向阳
- 关键词：金黄色葡萄球菌抗菌活性
- 改造的蜂毒素基因在毕赤酵母中分泌表达及培养条件研究被引量：3
- 2005年
- 对蜂毒素基因进行改造后,通过PCR方法获得新蜂毒素基因(MEA),将其克隆到表达载体pPICZa-A,而后将重组表达载体pPICZa-A-MEA转化GS115,筛选获得重组酵母菌.对GS115-ME经甲醇诱导表达并对培养条件进行优化探讨.对改造的蜂毒素进行了溶血活性、热稳定性及酸碱稳定性测定.结果表明,蜂毒素基因成功地在毕赤酵母中表达,经改造的蜂毒素在保留了抗菌活性的同时溶血活性降低20倍左右,同时还具有良好的热稳定性和酸碱稳定性.
- 赵亚华董竟南崔红白云
- 关键词：毕赤酵母分子改造溶血活性
- 唾液HRP5第17位密码子反义突变对其在毕赤酵母中表达的影响
- 2007年
- 目的在毕赤酵母中表达唾液富组蛋白5(HRP5)基因原始序列hrp5及突变序列hrp5′(Lys17→Asn),比较表达量及抗白色念珠菌活性。方法选用毕赤酵母偏爱密码子,设计3′端互补、5′端带酶切位点的两对引物,PCR合成hrp5和hrp5′,克隆至pPICZα-A,转化大肠杆菌,将酶切、测序鉴定的阳性重组质粒pPICZα-A-hrp5和pPICZα-A-hrp5′经SacI线性化后电击转化GS115,筛选阳性菌落,PCR鉴定,甲醇诱导表达,比较抗菌活性,测定表达量。结果hrp5及hrp5′正确整合到GS115基因组中,突变前后表达产物与HRP5标准品活性相当,表达量分别为4μmol/L、5μmol/L。结论HRP5在毕赤酵母中成功表达,活性区Lys17突变为Asn使表达量提高25%,而对其杀菌活性无影响。
- 金科华赵亚华罗德生蒋智勇崔红周崎赵长臣
- 关键词：基因表达
- 蜂毒素分子的改造及其基因在毕赤酵母中的表达被引量：11
- 2005年
- 为获得保留有抗菌活性而降低溶血作用的蜂毒素,对蜂毒素的分子结构进行了改造。将第5位的Val变为Arg,第15位Ala变为Arg,删除了第16位的Leu。用PCR技术获得了改造后的蜂毒素基因,将其克隆入酵母表达载体pPICZa-A,获得重组表达质粒pPICZa-A-MEA。该质粒转化毕赤酵母菌GS115,甲醇诱导下表达,发酵上清液经抑菌活性、溶血活性测定及亲和层析纯化,结果表明,蜂毒素基因成功地在毕赤酵母中表达,经改造后表达的蜂毒素保留了抗菌活性且溶血活性显著降低,经纯化后用Bradford法测定表达蜂毒素的含量约为0.29mg／ml。
- 赵亚华董竟南崔红白云金科华蒋智勇
- 关键词：蜂毒素酵母表达载体基因溶血活性毕赤酵母菌重组表达质粒
