廖芳芳
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 供职机构：北京农学院动物科学技术学院更多>>
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- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 马兜铃酸Ⅰ诱导肾小管上皮细胞凋亡的检测被引量：5
- 2011年
- 本试验旨在培养小鼠肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs),探讨马兜铃酸Ⅰ(aristolochic acidⅠ,AAⅠ)诱导小鼠肾小管上皮细胞的凋亡情况。AAⅠ与RTECs反应后,从细胞形态学、DNA Ladder、流式细胞仪3个方面检测AAⅠ诱导RTECs的凋亡情况。AAⅠ作用后,随着浓度的增高,上皮细胞失去上皮细胞表型,在20～80μg/mL作用24h后,细胞都出现晚期凋亡的特征;在20μg/mL AAⅠ的作用下早期凋亡的比率随作用时间的延长而增高。AAⅠ可诱导小鼠原代RTECs产生凋亡,凋亡随着作用时间的延长和药物浓度的增大而加剧。
- 彭晓兰董晓凯廖芳芳高磊张中文吴国娟
- 关键词：肾小管上皮细胞细胞凋亡
- 泛素羧基端水解酶-5(UCH-L5)研究进展
- 泛素羧基端水解酶-5(UCH-L5)，也叫UCH37，具有去泛素化作用，是泛素-蛋白酶体系统中的重要成员，定位在蛋白酶体上，是目前发现唯一直接与蛋白酶体相关的UCH家族成员。UCH-L5在细胞核中与人In080即染色质重...
- 董晓凯彭晓兰廖芳芳吴国娟
- 关键词：蛋白酶体染色质重塑
- Arkadia和UCH37表达载体的构建及其对TGF-β1/Smads信号通路的影响
- 2012年
- 【目的】构建泛素启动酶Arkadia和泛素羧基末端水解酶-5(亦称UCH37)的表达载体,并探讨Smad7蛋白的泛素化修饰对马兜铃酸肾病中TGF-β1/Smads信号通路的影响。【方法】通过观察绿色荧光的表达量及real-time PCR反应优化转染条件,转染Arkadia和UCH37 siRNA,real-time PCR检测mRNA表达抑制率。分别构建Arkadia和UCH37的表达载体pGPU6/GFP/Neo,经鉴定后转染细胞,real-time PCR和Western blotting检测Arkadia、UCH37和Smad7的表达变化。【结果】①30 pmol siRNA和1.5μL LipofectamineTM2000为最佳转染条件;②Arkadia-1490和UCH37-721的干扰效果最明显;③载体的插入序列完全正确,且pGPU6/GFP/Neo-Arkadia能上调马兜铃酸肾病模型中Smad7的表达,而pGPU6/GFP/Neo-UCH37使Smad7表达下降。【结论】成功构建了表达载体pGPU6/GFP/Neo-Arkadia和pGPU6/GFP/Neo-UCH37,且Arkadia和UCH37可分别放大、抑制TGF-β1/Smads信号通路。
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- 关键词：转染
- 马兜铃酸Ⅰ致小鼠肾脏损伤的研究被引量：1
- 2011年
- 本研究旨在观察马兜铃酸Ⅰ对小鼠肾脏超微结构及其相关生理指标的影响,初步阐明马兜铃酸Ⅰ对肾脏的损伤作用,为探讨发病机理提供理论依据。将20g左右的雄性昆明鼠随机分成4组,每日分别用低、中、高3个浓度的马兜铃酸Ⅰ溶液灌胃,对照组用等体积饮用水替代。第30天时观察各组的肾脏组织病理学变化,并检测血液和尿液中相关生理指标。随着给药剂量的增加,小鼠体质量呈加速下降趋势,初期尿量增多,后期尿量减少甚至出现无尿、肾性糖尿,而血清中TGF-β1的含量逐渐上升,小鼠红细胞、血红蛋白、单核细胞减少。与对照组相比,在皮质到皮髓交界处,试验组表现为近曲小管上皮细胞损伤,纤维化随着剂量的加大由皮质向髓质逐渐深入。电镜下观察可见细胞器损伤以及细胞核变异。马兜铃酸I对小鼠明显的剂量依赖性的损伤作用,主要导致肾小管间质病变,并改变其正常的超微结构。
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- 关键词：肾脏TGF-Β1病理学变化小鼠
- AAN中Smad7泛素化及调节TGF-β1信号通路相关因子表达的研究
- 目的：筛选泛素连接酶Arkadia和泛素羧基末端水解酶-5（也叫UCH37）的高效小干扰RNA（small interference RNA, siRNA）,并构建其表达载体,探讨马兜铃酸肾病（aristolochic ...
- 廖芳芳
- 关键词：SMAD7
- Arkadia表达载体转染肾小管上皮细胞条件的优化被引量：1
- 2012年
- 本试验旨在优化泛素化酶Arkadia质粒表达载体pGPU6/GFP/Neo转染小鼠肾小管上皮细胞(renal tubular epithelialcells,RTECs)的条件,为研究Arkadia表达载体在小鼠马兜铃酸肾病(aristolochic acid nephrohathy,AAN)中的作用奠定基础。以小鼠RTECs为转染对象、脂质体LipofectamineTM2000为转染介质,采用Real-time PCR和CCK-8法检测不同的质粒与脂质体比例条件下Arkadia mRNA的表达差异及对细胞活性的影响;同时,用Real-time PCR检测不同的转染时间条件下表达载体对Arkadia mRNA沉默效果的差异。结果显示,Arkadia-pGPU6/GFP/Neo载体的转染效率表现出了一定的剂量和时间依赖性。当质粒DNA∶LipofectamineTM2000为0.66μg∶2μL、转染时间为24 h时,对Arkadia mRNA表达的抑制最明显并且对细胞的毒性最小。最终确定了Arkadia-pGPU6/GFP/Neo载体转染小鼠RTECs的最佳条件。
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- 关键词：转染肾小管上皮细胞
- Smad7和组蛋白去乙酰化酶1在小鼠马兜铃酸肾病中的表达被引量：2
- 2012年
- 目的探讨Smad7、组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)在小鼠马兜铃酸肾病(AAN)中的表达及两者在马兜铃酸肾病发生、发展中的作用。方法将32只体重(20±2)g的SPF(无菌)雄性昆明小鼠随机分为4组,其中3组为实验组,灌胃给予不同剂量的马兜铃酸(AA)Ⅰ,分别为4 mg/(kg.d)、8 mg/(kg.d)、16mg/(kg.d)。另设对照组,PBS灌胃。应用免疫组织化学、免疫印迹法及RT-PCR技术,检测AAN小鼠和正常对照组中Smad7和HDAC1的表达情况。结果 HDAC1阳性着色主要分布于细胞核上,且在AAN中的表达强度明显高于正常对照组。免疫印迹法检测和RT-PCR提示,Smad7在AAN中的表达低于对照组,而HDAC1的表达显著高于对照组。结论在AAN中Smad7低表达以及HDAC1高表达,提示Smad7和HDAC1可能在AAN的发生、发展中起重要作用。
- 彭晓兰董晓凯廖芳芳高磊张中文吴国娟
- 关键词：马兜铃酸肾病SMAD7组蛋白去乙酰化酶1免疫组织化学免疫印迹法小鼠
