张咏梅
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：复旦大学附属华山医院感染科更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 基于单标记探针实时荧光定量PCR和熔解曲线分析方法定量检测HBeAg阳性患者前C区变异株被引量：1
- 2013年
- 目的建立一种HBV复杂前C区变异株精确定量的检测系统。方法分两步实时PCR完成检测。首先应用野生株阻断探针(WT-blocker probe)进行选择性抑制野生株病毒的扩增,而含量偏低的变异株病毒得以扩增约10000倍,使其在后续反应中易于检出;第二步应用单标记探针(Simple Probe)结合熔解曲线分析系统精确定量检测前C区G1896A、G1899A、G1896A/G1899A变异株。通过PBPPO(primer-blocker-probe partial-overlap)设计减少基因多态性对检测的影响,来提高检测精确度。检验结果经直接测序及聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法予以证实。结果 4种标准质粒(G1896/G1899、G1896A、G1899A、G1896A/G1899A)能够很好地被检出并予以区分,突变检测灵敏度达到0.01%;10例HBeAg阳性(直接测序法鉴定前C区变异阴性)患者血清标本中,每例至少1种前C区变异株被检出。结论单标记探针实时荧光定量PCR和熔解曲线分析能够早期灵敏检测前C区变异株,前C区变异株进化过程及机制还需进一步大样本、纵向队列研究予以阐明。
- 涂文辉侯伟张瑾吕莹王瑾瑜张咏梅张轶俊刘红艳朱浩翔秦艳丽毛日成张继明
- 关键词：熔解曲线分析
- 乙型肝炎病毒表面抗原T131N/M133T变异株糖基化和抗原性研究被引量：1
- 2015年
- 为探讨乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)T131N/M133T变异株的糖基化和抗原性,本研究构建了T131N/M133T变异的HBsAg过表达质粒,将质粒转染细胞,用蛋白免疫印迹法检测HBsAg表达和糖基化情况,用酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光法检测HBsAg的抗原性。结果显示,T131N/M133T变异使HBsAg产生了新的N-糖基化修饰,该变异质粒转染细胞内HBsAg水平显著低于野生型,上清液中HBsAg水平也有一定程度降低。结果提示,T131N/M133T变异使HBsAg发生了新的N-糖基化修饰,该变异产生的糖基化可能影响HBsAg的胞内稳定性,对HBsAg的抗原性也有一定影响。
- 康耀月郭红英张咏梅张继明
- 关键词：乙型肝炎病毒表面抗原糖基化抗原性
