单纯疱疹病毒(GSV)是重要的人类DNA病毒。国内外学者正在对其基因结构、功能和基因调控机制进行探索,以及利用其作为病毒载体表达外源基因研制基因工程疫苗等,并且已经取得了一定的成绩。多年来,尽管对HSV-1的分子遗传学做了包括序列分析在内的大量研究,但对HSV基因组许多部位的功能,它们相互之间的关系,特别是某特定部位对活病毒生物特性的作用(病毒生长、繁殖、毒力等),所知很少。为了深入了解HSV-1基因组中Bam H I C片段这一未知部分的功能,我们对它进行了克隆、次级克隆和酶谱分析,并且利用胸腺嘧啶核苷激酶基因—小Mu噬菌体系统(TK-mM)组建了在HSV-1的Eam H I C片段上有TK-mM插入的重组质粒。本文报道利用组建的重组质粒DNA和提纯的TK-HSV-1毒株DNA共同转染细胞,获得了在HSV-1基因组Burn H I C片段上有插入突变的重组病毒。
应用前期工作克隆的腺病毒晚期表达盒对引进的5型腺病毒(Adenovirus type 5,Ad5)载体进行改建,首先将成人腹泻轮状病毒(Adult Diarrhea rotavirus,ADRV)第5基因克隆入表达盒中,而后将该表达盒插入到Ad5载体的E3区,最后重组质粒与Ad5 DNA EcoR I大片段共转染A549细胞,经打点杂交和Southern转印筛选出重组病毒空斑。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测重组病毒感染细胞上清和沉淀的抗原滴度分别为1:8,1:64。Western转印显示在分子量44 000处有一条转印带。ADRV第5基因在改建的Ad5载体上的表达为口服腺病毒基因工程疫苗的研究积累了实验经验,为ADRV诊断试剂的研制提供了便利条件。
