徐容
- 作品数：13 被引量：31H指数：4
- 供职机构：第二军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 新型噬菌粒展示载体pCANTAB5L的构建被引量：8
- 2003年
- 目的 :将柔性多肽接头和多克隆位点引入噬菌粒载体 pCANTAB5X中 ,构建适用于展示各种随机肽库、功能靶蛋白、功能靶蛋白变异体库和大分子量 (>30 0个氨基酸 )功能蛋白的新型噬菌粒展示载体。 方法 :应用 5′端含XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ、KpnⅠ识别序列的引物 ,PCR扩增获得XbaⅠ StuⅠ SalⅠ KpnⅠ [G4S]3 NotⅠ衔接片段 ,将该PCR产物克隆到pMD 18T中 ,再将该片段插入 pCANTAB 5X中构建成新型噬菌粒展示载体 pCANTAB5L。 结果 :限制性内切酶酶谱及DNA序列分析证明[G4S]3多肽接头和限制性内酶切位点XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ、KpnⅠ序列被引入到新构建的噬菌粒载体pCANTAB 5L中。 结论 :成功构建了新型噬菌粒展示载体 pCANTAB5L ,并能有效展示功能靶蛋白。
- 沈毅珺潘卫易进华徐容陈秋莉潘欣冯春芝邓松华戚中田刘彦君
- 关键词：噬菌体展示多克隆位点
- 一种进化免疫球蛋白结合分子、其制备方法及应用
- 本发明涉及新型进化免疫球蛋白结合分子、其制备方法及其应用。本发明公开了一种分离的进化免疫球蛋白结合分子，它是具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的蛋白、或其具有免疫球蛋白结合活性的保守性变异蛋白。本发明还公开了该免...
- 潘卫蒋少华徐容贾建安沈毅珺杨华王锦红陈秋莉何俊陈璐
- 文献传递
- 重组人淋巴毒素随机点突变组合文库的构建被引量：3
- 2004年
- 构建重组人淋巴毒素 (rhLT)随机点突变组合文库以进行体外分子进化及结构和功能的研究。应用含随机核苷酸序列的引物 ,通过OverlapPCR的方法分别对rhLT的 4 6、10 6和 130位氨基酸进行定点随机突变 ,获得各单点随机突变体库。通过基因操作将这三个单点随机突变体库拼接并克隆于pMD_18T载体建立三点组合突变体文库 ,DNA测序鉴定突变位点的随机性和多样性 ,原核表达该变异体库 ,体外测定生物学活性。成功获得rhLT三点随机点突变组合文库 ,其转化克隆数达到 1 5× 10 5,是多样性理论值的 4 5倍。 5 0个样品的序列分析显示各个位点的核苷酸和氨基酸序列的突变都呈随机性分布。对原核表达的 30个样品进行生物学活性测定 ,结果 70 % (2 1个 )的样品无活性、2 3 3% (7个 )的样品活性低于rhLT、6 7% (2个 )的样品活性高于rhLT。成功构建了rhLT随机点突变组合文库 ,该库不仅在一级结构上具有良好的随机性和多样性 ,而且具有生物学活性的多样性 ,为应用噬菌体展示等高通量筛选策略对淋巴毒素进行体外分子进化和结构与功能的深入研究打下了基础。
- 沈毅珺潘卫徐容潘欣王罗春王征曹峰谭靖伟吴劲松吴芳刘彦君
- 关键词：淋巴毒素随机突变分子进化点突变
- 腺病毒介导mIFN-β基因转染的小鼠黑色素瘤细胞体内致瘤性及抗肿瘤作用的实验研究被引量：4
- 2004年
- 目的 研究腺病毒 (adenovirus,Ad)介导mIFN β基因转染的B16小鼠黑色素瘤细胞的体内致瘤性及抗肿瘤作用。方法 用携带mIFN β基因的重组腺病毒载体体外转染B16细胞 ,将该细胞接种于小鼠 ,观察其在小鼠体内的致瘤性及对野生型B16细胞的致瘤性有无影响。结果 经腺病毒介导 ,mIFN β基因成功地导入B16细胞并获得有效表达 ;转mIFN β基因的B16细胞的体内致瘤性明显降低 ,并能抑制对侧野生型B16细胞的致瘤性。结论 该研究结果提示利用腺病毒载体携带IFN β基因来开发瘤苗治疗肿瘤具有良好的应用前景。目的 研究腺病毒 (adenovirus,Ad)介导mIFN β基因转染的B16小鼠黑色素瘤细胞的体内致瘤性及抗肿瘤作用。方法 用携带mIFN β基因的重组腺病毒载体体外转染B16细胞 ,将该细胞接种于小鼠 ,观察其在小鼠体内的致瘤性及对野生型B16细胞的致瘤性有无影响。结果 经腺病毒介导 ,mIFN β基因成功地导入B16细胞并获得有效表达 ;转mIFN β基因的B16细胞的体内致瘤性明显降低 ,并能抑制对侧野生型B16细胞的致瘤性。结论 该研究结果提示利用腺病毒载体携带IFN β基因来开发瘤苗治疗肿瘤具有良好的应用前景。
- 吴云徐容曹广文潘卫陈秋莉沈毅君卢海妹蔡春晓邓松华
- 关键词：干扰素-Β瘤苗腺病毒黑色素瘤
- 新型噬菌体展示载体pCANTAB5S的构建被引量：16
- 2004年
- 目的 进一步改造噬菌体展示载体 ,使之能更有效地展示各种外源随机多肽文库。方法 以 pCANTAB5X IFN α2b重组质粒为模板 ,在上游引物中引入XbaⅠ、SacⅠ酶切位点 ,在下游引物中引入SacⅠ、StuⅠ、SalⅠ酶切位点 ,将用该引物扩增的IFN α2b衔接片段PCR产物克隆到pMD18 T中 ,再将该片段用XbaⅠ和SalⅠ酶切并将之插入pCANTAB5L的XbaⅠ和SalⅠ位点中 ,经SacⅠ酶切 ,线性载体片段自连 ,构成新型噬菌体展示载体 pCANTAB5S。 结果 限制酶切位点SacⅠ被引入到噬菌体展示载体 ,并校正了pCANTAB5L载体StuⅠ、SalⅠ等位点的读框。结论 成功构建了含读框正确的SacⅠ等多个克隆位点的新型噬菌体展示载体pCANTAB5S ,可用于各种外源随机多肽文库的有效展示。
- 徐容潘卫沈毅陈秋莉潘欣冯春芝戚中田刘彦君邓松华
- 关键词：噬菌体遗传学质粒肽库
- 腺病毒介导mIFN-β基因转染的小鼠黑色素瘤细胞的体外生物学特性被引量：2
- 2004年
- 目的 研究腺病毒 (Ad)介导mIFN β基因转染的B16小鼠黑色素瘤细胞的体外生物学特性。方法 用Ad为载体将mIFN β基因导入B16细胞 ,观察mIFN β基因转染的B16细胞的体外增殖能力及免疫原性的改变。结果 当MOI为 5 0～ 10 0 ,即可获得较高的转染效率 ,达 90 %± 1% ,转染细胞能表达分泌mIFN β并具有生物学活性 ;AdmIFN β感染对B16细胞的增殖能力无影响 ,但能显著提高细胞表面MHC Ⅰ类抗原的表达。结论 Ad载体具有较高的转移效率 ,并能使其携带的mIFN β基因有效表达 ;AdmIFN β转染的B16细胞的免疫原性显著增强。提示利用Ad载体携带有效的目的基因来治疗肿瘤甚至开发瘤苗是可行的。
- 吴云徐容曹广文潘卫陈秋莉沈毅蔡春晓邓松华
- 关键词：腺病毒小鼠黑色素瘤体外生物学特性
- 腺病毒介导的LacZ基因在B16小鼠黑色素瘤细胞中的表达被引量：2
- 2003年
- 目的 观察腺病毒介导的LacZ基因转移在B1 6细胞的转导效率。方法 腺病毒介导的LacZ基因转导B1 6细胞。结果 当MOI为 50～ 1 0 0 ,即可获得较高的转导效率 ,达 90 %± 1 %。结论 腺病毒介导的基因转移在B1 6细胞能获得较高的转导效率和目的基因的有效表达。提示腺病毒载体作为一种高效的基因转移载体 。
- 朱洁平吴云李慧曹广文徐容郑红潘卫邓松华
- 关键词：LACZ基因小鼠黑色素瘤B16细胞基因治疗
- 噬菌体展示protein A及protein L Ig结合单结构域随机组合文库及Ig亲和筛选被引量：12
- 2005年
- ProteinA和proteinL是细菌产生的两种结构和功能均不同的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)结合分子,在细菌的致病中起重要作用.用含SacⅠ位点的特定引物PCR分别扩增制备proteinA的A、B、C、D抗体结合结构域和proteinL的B3抗体结合结构域,各结构域DNA片段经SacⅠ酶切后,再随机连接形成各种不同长度的分子组合文库,将该文库呈现在噬菌体表面构建了噬菌体展示Ig结合分子单结构域随机组合文库,所建组合文库容量为2.3×106个菌落形成单位,滴度为4.1×1011TU/ml,包含各种单结构域片段,并以随机方式连接.用人Ig对该文库进行4轮亲和筛选,随机挑选36个代表性的阳性克隆进行序列测定分析表明,亲和筛选获得了多种非天然形式存在的新的Ig结合分子结构,其中32个克隆具有由proteinL的单结构域和proteinA的单结构域间隔重复排列而成的特征性(MDPL-MDPA)n结构.对噬菌体展示Ig结合分子单结构域随机组合文库的体外分子进化研究的尝试,为Ig结合分子的结构和功能研究提供了一新的途径,也为Ig结合分子的定向改造打下基础.
- 徐容沈毅臖邓松华蔡春晓陈秋莉贾建安王锦红潘欣潘卫
- 关键词：噬菌体展示分子进化结构域PROTEINPROTEIN
- 一种进化免疫球蛋白结合分子、其制备方法及应用
- 本发明涉及新型进化免疫球蛋白结合分子、其制备方法及其应用。本发明公开了一种分离的进化免疫球蛋白结合分子，它是具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的蛋白、或其具有免疫球蛋白结合活性的保守性变异蛋白。本发明还公开了该免...
- 潘卫蒋少华徐容贾建安沈毅珺杨华王锦红陈秋莉何俊陈璐
- 文献传递
- 进化免疫球蛋白结合分子LD5的原核表达、纯化及结合活性被引量：1
- 2007年
- 目的对新型进化免疫球蛋白(Ig)结合分子LD5进行原核表达和纯化,并鉴定其结合活性。方法将LD5基因片段克隆入原核表达载体pET32a(+),转化大肠杆菌后,IPTG诱导表达。以8mol/L尿素裂解菌体后,上清经Ni2+-NTA柱纯化,并对纯化蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。以ELISA和Dot blot对LD5蛋白结合IgG、IgM活性进行鉴定。结果LD5分子在大肠杆菌中获得成功表达,表达的融合蛋白相对分子质量为59000。Western blot表明纯化的LD5蛋白能特异结合IgG。ELISA结果显示,LD5在结合IgM上较SpA具有明显的优势。结论LD5分子在大肠杆菌中已成功表达,纯化的LD5蛋白保留了天然Ig结合分子的结合活性。
- 蒋少华徐容何俊陈璐卢海妹贾建安陈秋莉潘卫
- 关键词：原核表达结合活性
