曾泉
- 作品数：30 被引量：32H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院野战输血研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 微小RNA miR-125b真核表达载体的构建及其对细胞增殖的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:构建微小RNA125b(miR-125b)真核表达载体,研究其过表达后对细胞增殖的影响。方法:以pcDNA3.1(-)-myc-his载体为模板,PCR扩增CMV启动子,克隆入pHRS-1cla-EGFP慢病毒载体,构建pHRS-1cla-CMV-EGFP载体;以从人全血中提取的基因组DNA为模板,PCR扩增pri-miR-125b序列,将其克隆到pHRS-1cla-CMV-EGFP载体中,构建pHRS-1cla-miR125b-CMV-EGFP慢病毒表达载体;将pHRS-1cla-miR125b-CMV-EGFP表达载体瞬时转染入293FT细胞,用实时定量PCR技术对miR-125b在转录水平的表达进行检测,用MTT及Brdu法检测miR-125b过表达后对293FT细胞增殖的影响。结果:构建的pHRS-1cla-miR125b-CMV-EGFP真核表达载体经质粒酶切和测序鉴定正确,转染细胞后72h经实时定量PCR检测,成熟miR-125b表达上调约750倍(P<0.01),说明其能有效高表达,MTT及Brdu法检测显示细胞增殖受到明显抑制(P<0.01)。结论:构建了pHRS-1cla-miR-125b-CMV-EGFP慢病毒真核表达载体,转染293FT细胞后能高效表达成熟miR-125b,同时证明过表达miR-125b能使细胞的增殖受到非常明显的抑制。
- 曾泉谢小燕赵爱华王静雪陈琳岳文裴雪涛
- 关键词：微小RNA真核表达载体细胞增殖
- miR-155对肝癌细胞增殖的影响被引量：1
- 2014年
- 目的:在肝癌细胞系中过表达miR-155,研究其对肝癌细胞增殖的影响。方法:将pc DNA3.0-miR-155表达载体瞬时转染Huh7.5.1及Hcclm3肝癌细胞系,通过实时定量PCR技术对miR-155在转录水平的表达进行检测,采用CCK8法及克隆形成实验检测miR-155过表达后对Huh7.5.1及Hcclm3肝癌细胞系增殖的影响。结果:转染细胞后72 h,经实时定量PCR检测,Huh7.5.1及Hcclm3肝癌细胞中成熟miR-155的表达分别上调约431及16倍(P<0.01),说明其能有效高表达;CCK8法及克隆形成实验结果显示,miR-155能够明显促进肝癌细胞增殖(P<0.01)。结论:pc DNA3.0-miR-155转染Huh7.5.1及Hcclm3肝癌细胞系后能高效表达成熟miR-155,同时证明过表达miR-155能使肝癌细胞的增殖受到非常明显的促进。
- 南雪曾泉吕洋姚海雷陈琳岳文裴雪涛
- 关键词：MIR-155肝癌细胞增殖MIR-155
- RNA干扰技术体外抑制肝星状细胞表皮形态发生素表达及其对肝癌细胞迁移能力的影响被引量：3
- 2011年
- 肿瘤微环境中肝星状细胞能够影响肝癌细胞的生物学行为.在肝脏发育过程中,肝星状细胞通过表皮形态发生素(epimorphin,EPM,syntaxin2)与肝干细胞接触而促进肝干细胞的功能性分化.EPM在溃疡性结肠炎、间质性肺炎以及结肠癌中也发挥了重要的作用.发现肝细胞癌(HCC)细胞能够促使星状细胞EPM表达上调.为了研究肝星状细胞的EPM对于肝癌可能的作用,构建了针对EPM基因表达的shRNA干扰载体,并将质粒转染肝星状细胞,获得了两株携带该干扰片段的细胞系.RT-PCR与Westernblot检测结果表明,转基因干扰星状细胞系EPMmRNA和蛋白质表达量明显降低.之后,使用转基因细胞系的条件培养基对于肿瘤细胞进行侵袭能力的检测,并对星状细胞与肝癌细胞三维共培养,证明EPM干涉后肝星状细胞促进肿瘤细胞迁移的能力降低.结果表明通过RNAi可稳定干扰人肝星状细胞EPM基因的表达,并且EPM能够促进肝癌细胞的转移.
- 石磊贾雅丽张晓梅袁红丰曾泉周军年岳文裴雪涛
- 关键词：RNA干扰人肝星状细胞肝细胞
- 表皮形态发生素对肝细胞癌SK-HEP-1细胞生物学活性的影响
- 2013年
- 目的:明确表皮形态发生素(EPM)对肝细胞癌SK-HEP-1细胞生物学行为的影响。方法:构建高表达EPM的SK-HEP-1细胞,real-time PCR和Western印迹检测EPM在肿瘤细胞内的表达,CCK8分析和克隆形成实验检测细胞的增殖能力,Matrigel-transwell实验检测细胞的浸润能力。结果:EPM在肿瘤细胞内的高表达不影响细胞的增殖能力,但明显增强肿瘤细胞的浸润能力。结论:肝癌肿瘤微环境有可能通过EPM影响肿瘤细胞的生物学活性,对其作用机制的进一步明确,将有助于阐明肝癌发生发展的病理机制,发现新的恶性肿瘤诊断和治疗手段。
- 傅春江贾雅丽周军年陈琳曾泉南雪岳文尉承泽裴雪涛
- 关键词：肝细胞癌增殖
- 肝癌肿瘤干细胞的分离鉴定及差异性小分子RNA筛选被引量：1
- 2013年
- 旨在分离并鉴定肝癌肿瘤干细胞,并对其异常表达的microRNA进行了初步筛选。首先利用流式细胞术及免疫荧光技术分别在肝癌细胞系及肝癌组织标本中确认了CD90+细胞的存在;随后利用免疫磁珠分选技术从肝癌细胞系MHCC97-H中分离出了CD90+细胞,化疗药物耐药性实验表明,CD90+细胞具有明显的化疗药物耐受能力;两次裸鼠皮下成瘤性实验也表明CD90+细胞具有较强的成瘤能力,而CD90-细胞不具备成瘤能力。上述实验充分说明:CD90+细胞具有肝癌肿瘤干细胞特性。因此利用该细胞模型进行了肝癌肿瘤干细胞CD90+细胞和非肝癌肿瘤干细胞CD90-细胞之间差异表达的microRNA的检测,结果表明,CD90+细胞与CD90-细胞之间共有92个microRNAs的表达存在差异性,其中在CD90+细胞中高表达的microRNAs有52个;在CD90-细胞中高表达的microRNAs有40个。
- 许英晨管利东周军年曾泉袁红丰李思霆管兆轩何丽娟南雪陈琳岳文裴雪涛
- 关键词：肝癌肿瘤干细胞CD90小分子RNA
- 肝星状细胞中表皮形态发生素表达调控机制及其作用研究被引量：4
- 2016年
- 肝星状细胞是肝脏中重要的间质细胞,是肝细胞外基质的主要来源.表皮形态发生素(epimorphin、EPM、syntaxin2)在肝脏发育、再生及癌变过程中发挥了重要的作用,目前其表达变化的调控机制及对肝星状细胞的作用还未有报道.通过对肝组织标本进行检测,发现肝纤维化过程中肝星状细胞表达EPM上调.从表观遗传学的角度对EPM表达变化调控机制进行研究,发现DNA去甲基化促进了EPM的表达.为了研究EPM对肝星状细胞的可能的调节作用,将EPM表达质粒转染肝星状细胞,之后检测了EPM对肝星状细胞增殖及迁移能力的变化.结果证明EPM能够促进肝星状细胞的增殖与迁移.本研究发现,激活的肝星状细胞高表达EPM可能是由于DNA去甲基化引起的,同时,高表达的EPM能够促进肝星状细胞的增殖与迁移,进而促进肝纤维化进展.
- 石磊秦恩强贾雅丽吴丹金磊曾泉姜天俊聂为民岳文王福生
- 关键词：人肝星状细胞DNA甲基化细胞增殖细胞迁移
- 肝癌细胞上皮-间质转换模型的建立与差异性表达微小RNA分子的高通量筛选被引量：1
- 2016年
- 目的拟利用转化生长因子β1（TGF-β1）诱导人肝癌细胞发生上皮-间质转换（epithelial-mesenchymal transition,EMT）,建立EMT模型。方法在低血清培养条件下,用TGF-β1处理肝癌细胞2～6 d,观察细胞形态变化,采用Western印迹检测EMT典型标志物的表达变化,流式细胞术检测肝癌肿瘤干细胞标志物CD13和Ep CAM的表达变化,并利用微小RNA芯片技术（miRNA chip）筛选和分析TGF-β1处理前后差异表达的miRNA。结果经10 ng/ml TGF-β1诱导2～6 d后,多数细胞形态由上皮样转变为成纤维样,细胞间隙明显增大;Western印迹定量分析结果显示,10 ng/ml TGF-β1处理后,肝癌细胞E-钙黏蛋白（cadherin）表达水平显著性下调;流式细胞术结果显示,CD13和Ep CAM显著性上调;对miRNA芯片结果分析得到35种差异表达比较显著的miRNA,经过生物信息学分析,这些差异表达的miRNA在转录调控中发挥了重要作用。结论在低血清培养条件下,用10 ng/ml TGF-β1处理肝癌细胞2～6 d,细胞发生明显的EMT过程,利用该法可成功建立肝细胞癌的体外EMT细胞模型,在此模型中,可对差异表达的miRNA进行筛选分析和进一步的功能研究。
- 王海洋曾泉张彪李思霆南雪何丽娟岳文周军年裴雪涛
- 关键词：转化生长因子Β1微小RNA
- microRNA-7真核表达载体的构建及其对细胞增殖能力的影响被引量：1
- 2010年
- 目的构建miR-7真核表达载体,以研究miR-7过表达后对细胞增殖能力的影响。方法以人全血标本基因组为模板,PCR扩增miR-7序列,然后将该序列克隆入pHRS-1cla-CMV-EGFP载体中,构建pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体。将构建好的载体瞬时转染入293FT细胞中,利用RT-PCR技术对转染前后293FT细胞中miR-7的表达水平进行检测。将pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体瞬时转染入乳腺癌细胞系MCF-7中,利用CCK-8法以及BrdU增殖实验检测过表达miR-7后细胞增殖能力的变化。结果构建的pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体质粒酶切和测序鉴定结果正确,实时定量RT-PCR结果表明,与转染pHRS-1cla-CMV-EGFP对照载体细胞相比,转染pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体72 h后的293FT细胞成功地过表达miR-7达76.8倍。CCK-8法以及BrdU增殖实验检测过表达miR-7后乳腺癌细胞系MCF-7的增殖能力显著性下降(P<0.05)。结论成功构建了pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体,瞬时转染后细胞可以有效地高表达miR-7,同时证明过表达miR-7可以使细胞的增殖能力受到明显抑制。
- 许英晨周军年曾泉袁红丰岳文裴雪涛
- 关键词：微小RNAS细胞增殖
- 一个新的靶向肝癌干细胞的miRNA的检测及应用
- 本发明提出了核酸在制备药物中的用途，所述药物用于预防或治疗肝癌，所述核酸具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。利用miR‑486的核酸所制备的药物，可有效用于预防或治疗肝癌。
- 阎新龙裴雪涛岳文纪光红黄映辉曾泉
- 文献传递
- miR-155对人肝癌细胞系SK-HEP-1及MHCC-97H增殖与浸润能力的影响被引量：2
- 2015年
- 目的:在肝癌细胞系SK-HEP-1及MHCC-97H中过表达mi R-155,研究其对肝癌细胞增殖能力的影响。方法:将pc DNA3.0-mi R-155表达载体瞬时转染SK-HEP-1及MHCC-97H肝癌细胞系,通过实时定量PCR技术检测mi R-155在转录水平的表达;采用CCK8法及克隆形成实验检测mi R-155过表达后对SK-HEP-1及MHCC-97H肝癌细胞系增殖的影响;采用Transwell实验探讨mi R-155过表达后对肿瘤细胞浸润能力的影响。结果:实时定量PCR检测结果显示,转染SK-HEP-1及MHCC-97H细胞后72 h,成熟mi R-155表达分别上调约424±48.5倍及63.69±7.8倍,表明mi R-155在肿瘤细胞内得到高表达;CCK8法及克隆形成实验结果显示,mi R-155能够明显促进肝癌细胞增殖(P<0.01);Transwell实验证明mi R-155明显促进MHCC-97H肿瘤细胞的浸润能力。结论:mi R-155在肝癌细胞中的高表达能够明显促进肝癌细胞增殖与浸润,提示其有可能在肝癌的发生发展中发挥重要作用。
- 傅春江毛廷森曾泉陈琳周军年贾雅丽岳文
- 关键词：MI肝癌细胞增殖细胞浸润
