公共文化服务平台

嗜酸乳酸杆菌ATCC4356菌株异源二聚体β-半乳糖苷酶的克隆表达被引量：7: 2008年; 嗜酸乳酸杆菌(Lactobacillus acidophilus)的异源二聚体β-半乳糖苷酶属于糖苷水解酶2家族,由两个部分重叠、协同翻译的基因编码(lacL和lacM)。【目的】克隆表达该酶并测定其酶学特性。【方法】参照已全基因组测序的嗜酸乳酸杆菌NCFM菌株,以嗜酸乳酸杆菌ATCC4356菌株基因组为模板,将lacL的RBS到lacM的终止子之间的序列(2834bp)克隆到pQE31质粒上,并电转化JM109菌株。以下列步骤纯化表达产物:硫酸铵分级沉淀、阴离子交换、亲和层析和凝胶排阻层析。以凝胶排阻层析测定纯化酶的天然分子量,以邻硝基苯基半乳糖为底物测定其酶学特性。【结果】实现了该酶在JM109菌株中的可溶性表达。其氨基酸序列有一处不同于嗜酸乳酸杆菌NCFM菌株,即其大亚基(LacL)的第512位氨基酸不是组氨酸而是精氨酸。纯化酶比活力为226U/mg蛋白,天然分子量为96.3±4.6kDa,最适pH为7,最适温度为49℃,Km和Vmax值分别是:2.18±0.12mmol/L,273±5U/mg蛋白。; 潘渠李晋川丛延广刘丽娜朱军民胡福泉; 关键词：Β-半乳糖苷酶克隆表达纯化 KM值

重组人肽抗生素hPAB-β及其突变体的活性测定与筛选: 2003年; 饶贤才陈志瑾金晓琳黎庶胡晓梅朱军民黄建军胡金川谭银玲胡福泉; 关键词：突变体活性测定基因工程基因表达

一种金黄色葡萄球菌膜泡展示系统及其制备方法和应用: 本发明提供了一种金黄色葡萄球菌膜泡展示系统，所述展示系统将任选靶蛋白的编码核苷酸序列插入到锚定蛋白的编码基因的终止子前，表达的融合蛋白将所述靶蛋白展示于金黄色葡萄球菌的膜泡表面；其中，所述靶蛋白为病原体来源的抗原分子或多...; 饶贤才袁吉振杨杰胡珍杨裔胡启文尚伟龙朱军民; 文献传递

摩氏摩根菌噬菌体MmP1生物学特性及其基因组学的研究: 噬菌体是细菌的病毒,现代分子生物学的许多重大成就,都是以噬菌体为研究对象或用噬菌体作为研究工具取得的。噬菌体具有极大的生物多样性,对于任何新分离噬菌体的生物学及其基因组; 朱军民熊坤陈瑶胡珍谭银玲丛延广陈志瑾饶贤才胡福泉; 文献传递

人源肽抗生素hPABβ突变体及其重组杆状病毒的构建被引量：2: 2002年; 确定人工合成的人肽抗生素hPAB β的抗菌活性。利用已知肽抗生素hBD 2的晶体结构坐标进行hPAB β的同源模建 ;设计hPAB β突变体 ;用PCR法生成hPAB β突变体基因 ,分别构建转移载体和重组杆状病毒。结果表明 ,合成肽hPAB β在正确复性后具有较好的杀菌活性 ,将 4种突变体基因插入转移载体pFASTHTa ,筛选阳性重组子pFAST hPAB β并转化DH10Bac大肠杆菌 ,获得了重组杆状病毒 ,为筛选活性强而结构更为简单的hPAB; 饶贤才陈志瑾金晓琳胡晓梅朱军民张克斌胡福泉; 关键词：抗生素突变体杆状病毒

金黄色葡萄球菌agr基因敲除及其对膜泡毒力影响被引量：7: 2014年; 目的利用同源重组技术构建金黄色葡萄球菌RN4220附属基因调节系统(agr)的敲除株,探讨agr基因缺失对金黄色葡萄球菌分泌膜泡毒力的影响。方法分别扩增agr基因的上下游同源臂,利用重叠PCR获得agr基因上下游同源臂的融合片段,经酶切后连接敲除载体PYT3,构建同源重组质粒pYT3::Δagr,电转化至金黄色葡萄球菌RN4220,利用pYT3质粒对温度敏感的特点筛选agr缺失的突变株。分别制备野生菌RN4220和突变株RN4220::Δagr的膜泡,小鼠毒力实验观察agr基因缺失后对金黄色葡萄球菌膜泡毒力的影响。结果同源重组质粒pYT3::Δagr通过酶切鉴定证明构建成功;经PCR及DNA测序证实获得金黄色葡萄球菌RN4220 agr缺失突变株,重组效率为5.6%;agr突变株与野生株相比,其分泌膜泡的毒力大大降低,72 h内小鼠存活率为100%。结论 agr基因缺失后能够显著降低膜泡的毒力。; 袁吉振杨杰袁文常胡珍尚伟龙张霞朱军民胡启文周人杰饶贤才; 关键词：金黄色葡萄球菌膜泡同源重组

金葡菌TG-TPase嵌合基因在甲醇营养型酵母中的表达被引量：1: 2009年; 目的设计耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)耐药相关TG-TPase嵌合基因,构建其真核表达质粒,为嵌合基因的高效、分泌型表达奠定基础。方法在序列结构分析的基础上,设计引物从MRSA菌株中扩增其耐药性相关转糖基酶(TGase)和转肽酶(TPase)活性片段,进一步用酶切连接等分子生物学操作构建TG-TPase嵌合基因,亚克隆至酵母表达质粒pPIC9K中,转化DH5α大肠埃希菌。经酶切、PCR和核苷酸测序鉴定正确的重组质粒用SalⅠ线性化,整合入甲醇营养型毕赤酵母GS115中,在DNA和基因转录水平鉴定出阳性重组酵母。结果采用PCR从MRSA基因组中扩增得到了873bp的TGase片段和1044bp的TPase片段。以酶切连接构建的TG-TPase嵌合基因经酶切、PCR鉴定,能获得约1900bp的融合片段,与预期结果相符,测序表明序列和阅读框均正确。线性化的重组质粒转化GS115后,得到5个高拷贝阳性转化子,经诱导表达和PCR鉴定,这些转化子能转录出目的基因的mRNA。结论成功构建了含TG-TPase嵌合基因的重组毕赤酵母工程菌,为进一步高效制备嵌合蛋白、进而利用其酶学活性进行抗耐药性金葡菌抑制剂的筛选创造前提。; 杨杰饶贤才侯瑞胡晓梅陈志瑾丛延广谭银铃朱军民周莹冰胡福泉; 关键词：MRSA TGASE 毕赤酵母

HSV-1 UL15 exon-Ⅱ的原核表达及抗体制备: 2009年; 目的构建pQE-HSV-1 UL15 exonⅡ原核表达载体,在大肠埃希菌中高效表达并免疫家兔制备抗体。方法以HSV-1感染后的Vero细胞总RNA为模板,通过RT-PCR扩增HSV-1 UL15 exon-Ⅱ基因,克隆入原核表达载体pQE-31;重组质粒经酶切、测序鉴定无误后转化大肠埃希菌JM109,IPTG诱导表达;SDS-PAGE检测蛋白表达情况;表达蛋白用Ni-NTA亲和层析纯化及透析复性处理后免疫家兔制备特异性抗体,抗体的免疫原性用Western blotting进行检测。结果通过RT-PCR扩增获得了HSV-1 UL15 exon-Ⅱ全长基因;构建的pQE-HSV-1 UL15 exonⅡ重组质粒经酶切及测序鉴定无误;阳性转化菌株经IPTG诱导后SDS-PAGE电泳显示表达蛋白的相对分子质量约为43 000,与理论值一致,蛋白表达率约为35%～40%;表达蛋白经纯化及透析复性后免疫家兔获得的抗血清经Western blotting鉴定具有较好的特异性和敏感性。结论成功构建了pQE-HSV-1 UL15exonⅡ原核表达载体,诱导蛋白表达并进一步用表达的蛋白制备了特异性抗体,为HSV-1末端酶全长基因表达情况的鉴定及最终构建抗病毒组装药物的分子筛选模型奠定了前期实验基础。; 陈灿煌黎庶金晓琳朱晓艳胡晓梅周莹冰丛延广朱军民陈志瑾胡福泉; 关键词：原核表达抗体制备

难测序噬菌体基因组PaP1的鸟枪法测序及其面临的困难: 目的对新分离到的铜绿假单胞菌噬菌体 PaP1进行全基因组测序,并进行初步生物信息学分析, 为噬菌体改造和噬菌体治疗奠定基础。方法采用鸟枪法随机测序和重叠群组装的策略对 PaP1 进行; 谭银玲李明黄建军饶贤才朱军民胡福泉; 文献传递

2-型猪链球菌分泌性保护性抗原RfeA的确认被引量：1: 2011年; 目的确认RTX家族胞外蛋白A(RTX family exoprotein A,RfeA)为2-型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的分泌蛋白。方法通过生物信息学软件分析RfeA的氨基酸序列,预测RfeA在SS2中的分布;以纯化的RfeA重组蛋白为免疫原免疫小鼠,制备RfeA鼠多抗血清,间接ELISA检测抗血清效价;以制备的RfeA抗血清为一抗,利用ELISA方法分析RfeA在05ZYH33株培养上清中的分布,通过实验证实生物信息学预测的结果。结果生物信息学软件分析RfeA氨基酸序列,预测RfeA为SS2分泌性蛋白;ELISA方法分析发现RfeA存在于05ZYH33株培养上清中,是SS2分泌性蛋白。结论实验研究结果与生物信息学预测一致,RfeA为SS2分泌性蛋白的确定为进一步研究RfeA的功能以及在SS2致病过程中扮演的角色奠定了基础。; 刘丽娜朱军民丛延广胡福泉; 关键词：分泌蛋白

渝B2-20050021-1　渝公网安备 50019002500403号　违法和不良信息举报中心　互联网出版许可证　新出网证(渝)字10号

朱军民

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

朱军民

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈