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李代宗: 作品数：18 被引量：52H指数：4; 供职机构：河北农业大学海洋学院更多>>; 发文基金：河北省科技厅科技计划项目秦皇岛市科技计划项目河北省科技支撑计划项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学文化科学轻工技术与工程更多>>

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少量制备大肠杆菌感受态细胞条件探索被引量：10: 2006年; 目的：为了获得重复性好、转化率高的少量制备感受态细胞的方法，利用不同生长时期的大肠杆菌感受态细胞，进行转化比较。方法：根据普通实验室的实验条件，常规方法提取质粒，氯化钙法转化不同生长时期的大肠杆菌感受态细胞，比较转化率。结果：大肠杆菌感受态细胞的转化率与0D值显著相关，在OD600nm为0.39和0.55时转化率最高，在OD600nm为0.28．0.55之间均可得到理想的转化效果。结论：少量制备感受态细胞方法操作中无需添加任何保护试剂和细胞复苏培养，操作简便、重复性好，实验成本低廉。; 李代宗赵晓瑜倪志华张玉明; 关键词：大肠杆菌感受态细胞

虹鳟抗细胞凋亡因子(DAD1)基因全长cDNA克隆与进化分析被引量：1: 2013年; 抗细胞凋亡因子1(Defender against cell death 1,DAD1)是内质网内膜上糖基转移酶复合体亚基之一。本文通过RT-PCR及RACE技术从虹鳟脑组织中克隆到DAD1基因cDNA全长序列(GenBank登录号:FJ849061)。该基因包括88 bp 5'-UTR、292 bp 3'-UTR以及342 bp开放阅读框(ORF)。该基因编码113个氨基酸,存在三个明显跨膜区,无信号肽序列。通过蛋白序列比对显示虹鳟DAD1蛋白序列与大西洋鲑、白斑狗鱼、斑马鱼以及裸盖鱼同源性均在90%以上。系统发育分析显示DAD1蛋白主要聚成两个群:脊椎动物DAD1群与无脊椎动物DAD1群。虹鳟DAD1与大西洋鲑DAD1蛋白亲源关系最近。; 王家庆李振刚马爽李代宗王虹玲王亮; 关键词：虹鳟基因克隆进化分析

虹鳟脑型肌酸激酶基因cDNA全长的克隆与序列分析被引量：1: 2009年; 肌酸激酶(Creatine kinase,CK)能够催化磷酸基团在二磷酸腺苷(ADP)和磷酸肌酸间的可逆性转移,在细胞能量代谢过程中发挥重要作用。以虹鳟(Oncorhynchus mykiss)为研究材料,使用RT-PCR和RACE法分离和克隆了虹鳟脑型肌酸激酶(CKB)基因cDNA的全长序列(GenBank登录号:FJ548753)。序列全长1493bp,其中5′端非翻译区81bp,3′端非翻译区266bp,开放性阅读框1146bp,编码381个氨基酸。虹鳟鱼CKB蛋白存在两个重要功能结构域,分别为EF-hand结构域和ATP:guanido磷酸转移酶结构域。构建的系统进化树证实所克隆的肌酸激酶CK基因属于脑型肌酸激酶基因CKB。虹鳟鱼CKB蛋白序列与大西洋鲑(Salmo salar)的CKB在进化树上最先聚为一支,这与两者同属鲑科鱼类这一事实是一致的。虹鳟鱼CKB蛋白序列与大西洋鲑的CKB蛋白同源性高达99%,与已报道的哺乳动物的CKB蛋白同源性均在80%以上相符,表明CKB基因在进化过程中是高度保守的,在细胞能量发生与转移过程中发挥着重要作用。; 王家庆李代宗郭冉张辉宋波澜王志平钟尉方; 关键词：虹鳟鱼 RT-PCR RACE

虹鳟鱼trapd基因cDNA的克隆与序列特征分析: 2009年; 易位子相关蛋白δ(translocon associated protein delta,TRAPD)是作为内质网膜蛋白参与细胞内信号序列识别、新生肽链的修饰、转运通道的形成等过程。以虹鳟鱼(Oncorhynchus mykiss)为研究材料,采用RT-PCR和RACE法分离和克隆虹鳟鱼trapd基因cDNA的全长序列(GenBank登录号:FJ591154),序列全长949 bp,其中5’端非翻译区(UTR)长109 bp,3’端非翻译区(UTR)长336 bp,开放性阅读框(ORF)长504 bp,编码167个氨基酸,存在1个跨膜区。虹鳟TRAPD蛋白序列与斑马鱼、黑青斑河豚、大西洋鲑、斑点叉尾鮰、热带爪蟾、人和小鼠等脊椎动物的同源性均在80%左右,表明trapd基因在进化过程中是高度保守的。; 王家庆刘晓慧郭冉李代宗王志平张辉; 关键词：虹鳟鱼 RACE

β-葡聚糖对鱼类相关免疫功能的影响被引量：5: 2017年; β-葡聚糖是水产养殖特别是鱼类病害防治中应用较为广泛的免疫增强剂之一,对集约化规模养殖条件下增强水产动物相关免疫功能具有明显效果。但可能由于试验方法及试验对象的不同,有些研究结果存在差异。试验就近年来国内外β-葡聚糖对鱼类特异性及非特异性免疫功能相关指标及其抗感染能力等方面的研究进行综述,以期为水产养殖中鱼类病害防治提供理论参考。; 刘露李代宗肖勤; 关键词：Β-葡聚糖鱼类免疫功能抗感染

虹鳟冷休克蛋白Y-box基因的cDNA全长克隆与序列分析被引量：4: 2014年; 采用逆转录PCR(RT-PCR)及cDNA末端快速扩增(RACE)技术从虹鳟(Oncorhynchus mykiss)脑组织中克隆了Y-box基因cDNA全长序列(GenBank登录号:FJ492962)。该基因cDNA全长为1 452 bp,其中5'端非翻译区(5'UTR)长137 bp,3'端非翻译区(3'UTR)长409 bp,开放阅读框(ORF)长906 bp,编码301个氨基酸。蛋白质相对分子质量为33.1×103。PSORTⅡ亚细胞定位显示该蛋白位于细胞核,富含两类核定位信号,分别为pat4与pat7。虹鳟的Y-box蛋白序列与大西洋鲑、斑马鱼和大菱鲆的同源性分别为99%、80%和79%。同源建模显示虹鳟与人的Y-box蛋白具有十分相似的三级结构。系统发育树显示不同物种的Y-box蛋白分为3个亚群:亚群Ⅰ为鱼类;亚群Ⅱ为两栖类、鸟类及哺乳类;亚群Ⅲ为节肢动物类,这与物种间的进化历程基本一致。; 王家庆张丽丽马爽李代宗付玉洁李绍明; 关键词：虹鳟冷休克蛋白

虹鳟腺苷酸转移酶基因2(ant2)cDNA克隆与蛋白结构分析被引量：3: 2009年; 腺苷酸转移酶(ANT)是位于线粒体内膜上参与能量分子传导的转运蛋白,在细胞凋亡调控网络中发挥重要作用.以虹鳟鱼(Oncorhynchus mykiss)为研究材料,使用RT-PCR和RACE法分离和克隆了虹鳟鱼ant2基因cDNA的全长序列(GenBank登录号:FJ591153).该序列全长1 276 bp,其中5′端非翻译区长66 bp,3′端非翻译区长316 bp,开放性阅读框长894 bp,编码297个氨基酸.该蛋白具有3个保守的线粒体穿膜功能结构域和3个转膜区.通过与其他脊椎动物腺苷酸转移酶蛋白序列的比较,发现该基因具有高度保守性,氨基酸序列的同源性均在90%左右.同源模建显示其与牛的线粒体ADP/ATP载体,chain A蛋白有相同的孔洞(cavity)结构.; 王家庆刘晓慧李代宗宋波澜王志平郭冉; 关键词：虹鳟鱼 RT-PCR CDNA末端快速扩增

虹鳟PDCD6基因cDNA全长的克隆与功能预测: 2013年; 程序性死亡因子6(PDCD6)基因编码1个含EF-hand结构域的钙离子结合蛋白。应用逆转录PCR及cDNA末端快速扩增(RACE)技术从虹鳟(Oncorhynchus mykiss)脑组织中克隆了PDCD6基因cDNA的全序列(GenBank No:FJ591154)。序列全长1 179bp,其中5’端非翻译区长48bp,3’端非翻译区长567bp,开放性阅读框长564bp,编码187个氨基酸。电子表达谱分析结果表明该基因在4种脊椎动物的多个部位或组织中均有表达。同源模建蛋白三级结构显示该蛋白具有8个主要的α螺旋结构。虹鳟PDCD6蛋白序列与斑马鱼、非洲爪蟾、人、小鼠和鸡的同源性均高于85%,表明PDCD6基因在进化过程中是高度保守的,在细胞程序性死亡过程中发挥重要作用。; 王家庆李振刚边佳李代宗马爽那广宁; 关键词：虹鳟 RT-PCR RACE

贝类毒素及其检测方法研究进展被引量：15: 2017年; 贝类所含的毒素是由其摄食的微藻或菌类所产生的,这些毒素在贝类的体内积聚,通过被人类摄取而在人体中释放,使人体产生相应的食源中毒症状,严重威胁着人类健康。本文综述了贝类毒素及种类,并针对其近年来研发的小鼠生物测定法、高效液相色谱法、免疫学测定法、毛细电泳法、生物传感器法等检测方法进行了详细介绍,分析了各方法的原理、优缺点和适用范围等,最后对贝类毒素检测方法的未来发展趋势进行了展望。; 方丽媛李代宗肖勤; 关键词：高效液相色谱法酶联免疫法生物传感器

青鳉鱼DBI基因全长cDNA的克隆与蛋白结构分析被引量：3: 2010年; 地西泮结合抑制因子(diazepam binding inhibitor,DBI)具有抑制由葡萄糖诱导的胰岛素分泌、促进胆固醇跨线粒体膜转运和调节脂肪酸合成与代谢等多种生理功能。本研究使用反转录PCR结合RACE方法克隆了青鳉鱼(Oryzias latipes)的DBI基因全长cDNA序列。该序列全长592bp,包含长度为102bp的5'端非编码区(5'-UTR),长度为220bp的3'端非编码区(3'-UTR),和长度为270bp的开放阅读框,推测其编码89个氨基酸。同源性分析结果显示青鳉鱼DBI蛋白序列与大西洋鲑、鲤鱼、斜带石斑鱼、斑马鱼、非洲爪蟾、大鼠和人的同源性分别为82%、76%、76%、75%、72%、71%和70%,说明DBI基因在脊椎动物的进化过程中非常保守。同源建模显示青鳉DBI蛋白的4个α螺旋结构围成一个脂酰CoA结合口袋,与已测定果蝇DBI蛋白具有非常相似的三级结构。本研究结果为阐明脊椎动物在进化过程中DBI分子结构的演变规律及DBI在低等脊椎动物中的作用机理等提供了有意义的科学参考。; 李林春王家庆何振峰李代宗; 关键词：RT-PCR RACE

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